反相高效液相色譜法測定鹽酸美西律片的含量

劉紅莉，韓學(xué)靜，閆 凱

(河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011)

鹽酸美西律片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在2005年版與2010年版《中國藥典(二部)》中均有收載。其含量測定方法2005年版采用高氯酸非水滴定法[1]，操作煩瑣費(fèi)時(shí)，且非水滴定時(shí)需加入乙酸汞，污染環(huán)境;2010年版修訂為紫外光譜對照品法[2]，但在不同程度上仍存在輔料干擾情況。筆者參考文獻(xiàn)[3]，經(jīng)過多次篩選色譜條件，建立了高效液相色譜法測定鹽酸美西律片的含量，并對多各個(gè)廠家的樣品用本方法和藥典收載的方法進(jìn)行了比對，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括紫外檢測器，DAD檢測器。鹽酸美西律對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100218－199601);鹽酸美西律原料(常州亞邦制藥有限公司，批號為M100301);鹽酸美西律片(A，B，C，D，E，F(xiàn)，G 廠家);甲醇為色譜純，醋酸鈉、醋酸均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agela Venusil XBP－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －用冰醋酸調(diào) pH至(5.8±0.1)的 0.1 mol/L醋酸鈉(50 ∶50);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長 216 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)以鹽酸美西律計(jì)不低于3 000;外標(biāo)法計(jì)算含量。

2.2 檢測波長選擇

圖1 鹽酸美西律紫外掃描圖

取鹽酸美西律原料適量，加水溶解，配成質(zhì)量濃度為25 μg/mL的溶液，在190～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，鹽酸美西律在216 nm與262 nm波長處均有最大吸收(圖1)，但鹽酸美西律在262 nm波長處吸收峰較小，若以此波長采用高效液相色譜法測定含量，色譜峰的響應(yīng)值較小;若被測溶液濃度太大時(shí)，又會造成色譜峰的對稱性欠佳。因此，選擇216 nm作為鹽酸美西律含量測定的檢測波長，樣品質(zhì)量濃度為25 μg/mL時(shí)色譜峰響應(yīng)適中。鹽酸美西律高效液相色譜圖見圖2。

圖2 鹽酸美西律對照品高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按照各藥廠提供的處方，稱取輔料適量，制備空白溶液，記錄色譜圖。結(jié)果表明，輔料峰對主峰無干擾。

專屬性試驗(yàn):稱取鹽酸美西律原料5份，各50 mg，分別按以下條件處理，加入2 mol/L的氫氧化鈉溶液2 mL，水浴10 min;加入2 mol/L的鹽酸溶液2 mL，水浴10 min;105℃加熱8 h;經(jīng)4 000 lx光照48 h;加入5%雙氧水溶液3 mL。取上述經(jīng)堿、酸、高溫、光照和氧化破壞的產(chǎn)物，加水定容至10 mL，過濾，記錄色譜圖(圖3)。結(jié)果表明，鹽酸美西律與各降解產(chǎn)物分離良好，分離度能達(dá)到要求。

圖3 專屬性考察圖譜

線性關(guān)系考察:取鹽酸美西律對照品，加水溶解并稀釋制成每 1 mL 含 6.25，12.50，18.75，25.00，37.50，50.00，75.00 μg/mL的溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，以鹽酸美西律的質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(C)、峰面積為縱坐標(biāo)(A)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得線性回歸方程 A=0.649 2 C+0.205 8，r=0.999 9(n=7)。結(jié)果表明，鹽酸美西律質(zhì)量濃度在6.25～75 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取鹽酸美西律對照品，加水配成25 μg/mL的溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.19%(n=6)，表明方法的精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品，加水制成25 μg/mL的溶液，在室溫下放置，于 0，1，2，3，6，12 h 時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD 為0.11%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收率試驗(yàn):根據(jù)各藥廠提供的處方(表1)，按照每種輔料的量取最大量，稱取相當(dāng)于主藥相應(yīng)的輔料量，精密加入鹽酸美西律對照品適量，加水振搖溶解后，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，制成相當(dāng)于測定鹽酸美西律含量80%，100%，120%的溶液，依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表1 模擬處方

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取樣品，用水溶解制成含鹽酸美西律25 μg/mL的供試品溶液，依法測定含量，并將結(jié)果同2005年版和2010年版《中國藥典》收載的方法相比對，測定結(jié)果見表3。結(jié)果表明，3種方法的測定結(jié)果基本一致。

表3 樣品含量測定結(jié)果(%)

3 討論

鹽酸美西律在216 nm波長測定時(shí)峰形對稱性優(yōu)于262 nm，且鹽酸美西律易溶于水，故采用水為溶劑。回收率試驗(yàn)顯示，采用濾紙過濾對樣品測定有影響，改用0.45 μm微孔濾膜過濾后，消除了輔料對測定的影響，且對主藥沒有吸附作用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:551.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:751.

[3]韓學(xué)靜，張軼華，張 艷，等.鹽酸美西律及其片劑的毛細(xì)管GC法測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2008，40(12):936.