腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)后Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)

羅文芳 唐 濤 林 源 羅杰坤 鐘鵬程 劉清娥

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410008)

Th細(xì)胞是決定移植免疫排斥的關(guān)鍵成分，Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN－γ 和 IL－2 介導(dǎo)細(xì)胞免疫;Th2 細(xì)胞則產(chǎn)生 IL－4、IL－10 等，介導(dǎo)體液免疫。針對(duì)同種異體抗原的移植免疫應(yīng)答主要是由Th1細(xì)胞介導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)，在移植器官功能發(fā)生障礙之前，常檢測(cè)到 IFN－γ、IL－2 基因表達(dá)增高〔1〕。側(cè)腦室的腦室下帶(Svz)和海馬的顆粒下帶(SGz)集中于血管周圍，而且和內(nèi)皮細(xì)胞間僅隔一層基板，這種解剖上的毗鄰關(guān)系暗示了NScs和內(nèi)皮細(xì)胞間存在密切的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞的體內(nèi)環(huán)境建立共培養(yǎng)模型，觀察Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的變化，探討同種異體內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞的免疫反應(yīng)關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新生3 d的Sprague－Dawley乳鼠6只，新生7～10 d Sprague－Dawley乳鼠20只，雌雄不拘，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。

1.1.2 主要試劑及藥物 M199干粉培養(yǎng)基、D－Hank′s液干粉(Hyclone)，谷氨酰胺(上海伯奧)，肝素鈉、明膠、臺(tái)盼藍(lán)、胰蛋白酶、Ⅱ型膠原酶(Sigma)，胎牛血清(杭州四季青)，DNaseⅠ(Roche)，多聚賴氨酸(武漢博士德)，bFGF、EGF(Pepro Tech EC)，抗Ⅷ因子相關(guān)抗原多克隆抗體(美國PharMingen)，Trizo1試劑盒、DNA Marker、逆轉(zhuǎn)錄(RT)試劑盒、Pre Mix Taq(寶生物大連)，β－actin引物(上海生工)，一抗(Abcam)，辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG、辣根酶標(biāo)記鏈霉親和素、濃縮DAB試劑盒(北京中山)，其他常用試劑為國產(chǎn)分析純產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 OLYMPUS IXTO倒置顯微鏡(日本OLYMPUS)，QWJ300TVBB型CO2培養(yǎng)箱(美國產(chǎn))，Sanyo超低溫冰箱(日本三洋)，ELX800酶標(biāo)儀(美國產(chǎn))，超凈工作臺(tái)(蘇州凈化)，E260 電子天平(梅特勒)，Beckman J2－21 型低溫離心機(jī)(美國產(chǎn))，Beckman DU－640紫外分光光度計(jì)(美國產(chǎn))，Nikon倒置熒光相差顯微鏡(日本尼康)，PCR儀(美國ABI)，DDY多導(dǎo)電泳儀(北京六一)，UPW－5超純水儀(美國產(chǎn))，DHW－60恒溫水浴箱、DHP－81恒溫箱(上海醫(yī)用儀器廠)，50ml培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、濾器等耗材(Costar、Millipore等公司)。

1.2 方法

1.2.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液的配制 用超純水溶解M199干粉培養(yǎng)基，配制成體積比為1∶1的 M199無血清培養(yǎng)基(每1000 ml培基中另加2.2 g碳酸氫鈉、1 g葡萄糖、0.9 g谷氨酰胺)，0.22 μm濾膜過濾除菌，4℃保存?zhèn)溆?。使用前?EGF、bFGF 各 20 ng/ml，青 霉 素、鏈 霉 素 各 100 U/ml，ECGS 500 μg/ml，20%胎牛血清配成內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)液。

1.2.2 大鼠腦皮質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、傳代及鑒定

新生7～10 d SD乳鼠20只，75%酒精浸泡消毒5 min，斷頸處死，無菌條件下取腦，立即放入盛有4℃ D－Hank′s液的平皿中;仔細(xì)剔除大血管、軟腦膜、腦干、小腦及大腦髓質(zhì)，將大腦皮質(zhì)剪成1 mm3的小塊，加入20 ml含0.005%的 DNaseⅠ的D－Hank′s液，玻璃勻漿器上下勻漿20次;勻漿液用孔徑150 μm的不銹鋼濾網(wǎng)過濾，收集濾液，再用孔徑75 μm的不銹鋼濾網(wǎng)，棄濾液;用 D－Hank′s液沖洗濾網(wǎng)，收集濾網(wǎng)上的微血管段，1000 r/min×15 min離心，收集沉淀的微血管段。上述操作均在冰上進(jìn)行。

將微血管段移入含0.005%DNaseⅠ的0.1%Ⅱ型膠原酶溶液中，37℃振蕩消化30 min;加入20%胎牛血清終止消化，1000 r/min× 15 min離心，棄上清后，加 D－Hank′s液清洗，1000 r/min×15 min離心，棄上清，洗滌2次，沉淀物加入內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，接種于預(yù)先包被好明膠的玻璃培養(yǎng)瓶中，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入一次性培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，每2～3 d換液，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

原代培養(yǎng)7～10 d后，細(xì)胞呈單層密集生長(zhǎng)，近亞融合時(shí)進(jìn)行傳代繁殖。倒掉培養(yǎng)液后，以D－Hank′s液清洗2遍。0.25%胰蛋白酶37℃消化細(xì)胞約5 min，予20%胎牛血清終止消化。800 r/min×10 min離心，吸出消化液，D－Hank′s液清洗，離心，洗滌兩次，收集內(nèi)皮細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)瓶中，以后每2～3 d換液一次至細(xì)胞鋪滿瓶底。

將細(xì)胞以2×105/ml細(xì)胞接種于預(yù)先放有洗凈、多聚賴氨酸溶液包被并消毒的小蓋玻片的24孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)基為內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)液，培養(yǎng)2 d后，用Ⅷ因子相關(guān)抗原進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。

1.2.3 大鼠腦皮質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定 Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè):將洗凈、多聚賴氨酸溶液包被、消毒后的小蓋玻片置于24孔板中，按傳代培養(yǎng)的方法，以密度為2×105/ml接種細(xì)胞3 d后，可見蓋玻片上長(zhǎng)有一層細(xì)胞，0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次，每孔加入4%多聚甲醛室溫固定30 min;按SABC試劑盒說明書進(jìn)行操作，陰性對(duì)照用0.01 mol/L PBS代替一抗進(jìn)行。

1.2.4 測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 收集生長(zhǎng)良好的細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化，臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)，以2×105/ml細(xì)胞密度接種于一次性24孔培養(yǎng)板中置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每日消化3孔，以血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，取3孔細(xì)胞數(shù)均值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.2.5 海馬 NSCs的分離、培養(yǎng)、傳代及鑒定〔2，3〕取新生(3 d)SD大鼠，斷頸處死，以75%酒精浸泡5 min，無菌條件下取出大腦放入含無菌0.01 mol/L PBS培養(yǎng)皿中，剝除腦膜，分離出海馬，將其剪成0.5 mm×0.5 mm大小的組織塊，移入10 ml玻璃培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入0.05%胰酶－EDTA消化15～30 min，20%胎牛血清終止消化，過200目細(xì)胞篩，收集細(xì)胞懸液于試管中，離心1000 r/min× 10 min，D－Hank′s液洗滌 3 遍，加入NSCs選擇培養(yǎng)液，吸管反復(fù)吹打制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度，按1×105個(gè)/ml接種于培養(yǎng)瓶，常規(guī)37℃ 5%CO2孵箱中培養(yǎng)。每3 d半量換液，待原代克隆形成后(約7～10 d)，以0.25%胰酶消化細(xì)胞克隆制成單細(xì)胞懸液進(jìn)行傳代。

選取部分培養(yǎng)的細(xì)胞克隆種植明膠包被的24孔培養(yǎng)板上，加入含血清培養(yǎng)基DMEM/F12。2 d后以Nestin抗原進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色鑒定NSCs。

1.2.6 NSCs+MVEC共培養(yǎng) 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞以1×105/cm2的密度，種于包被2.5%明膠的OSTAR 24孔TRANSWELL外槽，以腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)72～96 h后，細(xì)胞匯片;D－Hank′s液洗細(xì)胞2次，在膜孔徑8.0 μm的內(nèi)槽種入傳代4 d的神經(jīng)干細(xì)胞球，分為共培養(yǎng)組(NSCs+MVECs)、空白對(duì)照組(NSCs)，培養(yǎng)48 h后，用熒光免疫細(xì)胞化學(xué)和RT－PCR技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞中 INF－γ，IL－2，IL－4，IL－10 的表達(dá)。

1.2.7 免疫細(xì)胞熒光化學(xué)檢測(cè) INF－γ，IL－2，IL－4，IL－10 蛋白表達(dá) 將洗凈、多聚賴氨酸溶液包被、消毒后的小蓋玻片置于24孔板中，按傳代培養(yǎng)的方法，以密度為2×105/cm2接種細(xì)胞3 d，蓋玻片上長(zhǎng)有一層細(xì)胞后。分空白對(duì)照組、共培養(yǎng)組加以處理;每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，按上述條件干預(yù)各組細(xì)胞后，吸出培養(yǎng)液，按SABC試劑盒說明書進(jìn)行操作。

以上操作除滴加封閉液后勿洗外，其他各步驟間均需用0.01 mol/L PBS洗滌5 min×3次。陰性對(duì)照用0.01 mol/L PBS代替一抗進(jìn)行。

所有在同一條件下完成免疫組化染色的兩組細(xì)胞，按每組6孔、每孔于400倍光鏡下中隨機(jī)選取一個(gè)高倍視野拍照。

1.2.8 RT－PCR 檢測(cè) INF－γ，IL－2，IL－4，IL－10 mRNA 收集各組細(xì)胞，按下述流程提取細(xì)胞總RNA。①取1 ml內(nèi)含106個(gè)細(xì)胞的培養(yǎng)液于1.5 ml EP管中;②4℃，12000 r/min離心30 s，棄上清;③加入1 ml Trizol，重懸細(xì)胞，室溫孵育5 min;④加入0.2 ml氯仿，振搖15 s，室溫孵育10 min;⑤4℃，12000 r/min離心15 min，收集上層無色水相于1.5 ml EP管中，去沉淀;加入等體積的異丙醇，混勻，室溫孵育 5～10 min;⑥4℃，12000 r/min離心10 min，棄上清;加入1 ml 75%乙醇并混勻;⑦4℃，12000 r/min離心10 min，棄上清;空氣中干燥10 min;⑧加入20 μl含1‰DEPC蒸餾水溶解 RNA，取2 μl RNA作凝膠電泳鑒定，確定RNA有無降解;再取1.5 μl 100倍稀釋，分光光度計(jì)測(cè)定A260和A280值，以測(cè)定RNA的含量及純度。余液于－70℃冰箱保存。

逆轉(zhuǎn)錄:取總 RNA 0.5 μg，Oligo(dT)18(50 μg/ml)引物1 μl，RNasin 1 μl，加 DEPC 水至 11 μl，70℃變性 5 min，在冰浴下加 5 × 逆轉(zhuǎn)錄緩沖液 4 μl，10 mmol dNTP 2 μl，RNasin 1 μl，加 DEPC 水至 19 μl;37℃，5 min;加 M－MLV 1 μl(200 U/μl)，總體積 20 μl;42℃，60 min 后;再 70℃，10 min。

PCR特異性引物用primer premier5.0軟件設(shè)計(jì)，由上海生物工程公司合成，各引物序列見表1。

擴(kuò)增反應(yīng)體系:取 Pre Mix Taq 12.5 μl，cDNA 2.0 μl，10 μmol/L目的引物 1.0 μl，β－actin 引物 1.0 μl加 DEPC 水至總體積25 μl，4000 r/min短暫離心后，于PCR儀中擴(kuò)增。反應(yīng)條件:預(yù)變性 94℃，5 min;變性94℃，30 s;退火溫度見表1，40 s;延伸72℃，45 s;35個(gè)循環(huán)，末次循環(huán)后72℃延伸7 min。取PCR 產(chǎn)物5 μl，加上樣緩沖液1 μl，2.0%瓊脂糖凝膠電泳，圖像分析儀攝片。采用Band Leader軟件分析數(shù)據(jù)，獲得各電泳條帶的吸光度值(X)，用β－actin的吸光度值(A)作為內(nèi)參照，計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量(X/A)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件，各組數(shù)據(jù)以±s表示，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。

表1 基因擴(kuò)增引物序列、退火溫度及產(chǎn)物大小

2 結(jié)果

2.1 大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定 倒置顯微鏡下觀察分離出的微血管段呈單枝或分枝狀，長(zhǎng)約200～800 μm，直徑約20～30 μm;經(jīng)膠原酶消化后，微血管管壁模糊不清;3 d換液清除組織碎片和紅細(xì)胞后，可見散在貼壁的梭形內(nèi)皮細(xì)胞，排列不規(guī)則，核淡，胞膜明顯。5 d時(shí)細(xì)胞呈細(xì)長(zhǎng)彎曲狀，7～9 d傳代后經(jīng)兔抗Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色，胞質(zhì)可見明顯的棕黃色著色，陰性對(duì)照無著色。符合Ⅷ因子相關(guān)抗原的分布特點(diǎn)，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。見圖1。

2.2 大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 細(xì)胞計(jì)數(shù)后，以細(xì)胞數(shù)及培養(yǎng)時(shí)間繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。可見細(xì)胞在前2 d生長(zhǎng)緩慢，第3天起迅速增長(zhǎng)，6 d后生長(zhǎng)減慢。由此選擇傳代后3～5 d進(jìn)行共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。見圖2。

2.3 海馬成體神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定 海馬分離的細(xì)胞接種到無血清培養(yǎng)基上，2 d后大部分細(xì)胞死亡，10%細(xì)胞貼壁，其后形成2～4個(gè)細(xì)胞團(tuán)，10 d后長(zhǎng)出大小不一的細(xì)胞團(tuán)，即神經(jīng)球(neurosphere)(圖3)，這些細(xì)胞球呈懸浮狀，形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞免疫熒光化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)均為Nestin抗原陽性(圖4)，可證明為神經(jīng)干細(xì)胞。將上述細(xì)胞克隆經(jīng)胰酶消化吹打制成單細(xì)胞懸液進(jìn)行傳代培養(yǎng)，2～4 d后單個(gè)細(xì)胞又可重新形成克隆球(圖5)，并表達(dá)Nestin抗原。每次傳代后，均有少量細(xì)胞貼壁分化，而且隨傳代的次數(shù)增多，貼壁的細(xì)胞也有增多的趨勢(shì)，在7～8代左右還不影響細(xì)胞的傳代，而后分化加劇，大部分貼壁分化。

圖1 倒置顯微鏡觀察腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(×150)

圖2 大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

圖3 培養(yǎng)10 d后的神經(jīng)球(×200) 圖4 神經(jīng)干細(xì)胞Nestin熒光染色(×300)圖5 繼續(xù)傳代培養(yǎng)中的神經(jīng)球(×100)

2.4 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)觀察 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)48 h后，經(jīng)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)，神經(jīng)干細(xì)胞球 IFN－γ(圖 6A、圖 6B)，IL－2(圖 6C、圖 6D)，IL－4(圖 6E、圖6F)，IL－10(圖 6G、圖 6H)均成陽性。見圖 6。

圖6 神經(jīng)干細(xì)胞球免疫熒光表達(dá)(×200)

2.5 RT－PCR檢測(cè) RT－PCR檢測(cè)共培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞中細(xì)胞因子mRNA表達(dá)，共培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞中IL－2、INF－γ mRNA的表達(dá)上調(diào)，IL－4、IL－10 mRNA 的表達(dá)下調(diào)，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01)。見圖7。

圖7 共培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞中細(xì)胞因子mRNA表達(dá)

3 討論

機(jī)體在正常狀態(tài)時(shí)Th1和Th2細(xì)胞功能處于動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)機(jī)體因識(shí)別自體或異體抗原而發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)，一旦反應(yīng)向著Th1/Th2二者其中某一方向分化，則相應(yīng)亞群通過自分泌方式增強(qiáng)其作用(正反饋)，同時(shí)以旁分泌方式抑制向?qū)Ψ降姆只?。在移植免疫?yīng)答中，一般認(rèn)為Th1參與同種移植的急性排斥反應(yīng)，Th1細(xì)胞因子和排斥反應(yīng)相關(guān);而Th2細(xì)胞在同種移植中易于誘導(dǎo)移植耐受。

免疫應(yīng)答中的一個(gè)重要過程是抗原提呈，即抗原提呈細(xì)胞(APC)通過捕捉和處理抗原，并以MHC分子限制形式提呈免疫活性細(xì)胞，導(dǎo)致后者激活產(chǎn)生免疫效應(yīng)。移植排斥反應(yīng)的關(guān)鍵是供、受體MHC不相容，MHC主要分為MHC－Ⅰ和MHC－Ⅱ類分子，Mason等〔4〕認(rèn)為MHC－Ⅱ類抗原在誘導(dǎo)同種移植免疫排斥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。無論是異種還是同種異體腦內(nèi)移植均可存在免疫排斥反應(yīng)，可能主要與MHCⅡ類分子有關(guān)，是由MHCⅡ類抗原不同而誘發(fā)的〔5〕。

神經(jīng)干細(xì)胞是一種來源于神經(jīng)組織或可向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化的前體細(xì)胞，很少表達(dá)MHC抗原，故一直認(rèn)為神經(jīng)干細(xì)胞具有極低或無免疫原性，是一種比較“純凈”的細(xì)胞群，同時(shí)缺乏APC細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞或小膠質(zhì)細(xì)胞)，雖然早期的NSCs無MHC表達(dá)，但隨著體外傳代次數(shù)增加，細(xì)胞表面開始表達(dá)MHCⅡ類分子〔6〕。側(cè)腦室的腦室下帶(Svz)和海馬的顆粒下帶(SGz)，集中于血管周圍，而且和內(nèi)皮細(xì)胞間僅隔一層基板，這種解剖上的毗鄰關(guān)系暗示了NScs和內(nèi)皮細(xì)胞間存在密切的聯(lián)系，在異基因神經(jīng)干細(xì)胞移植治療時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞可作APC，據(jù)此推測(cè)異基因神經(jīng)干細(xì)胞移植治療腦出血可能會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，神經(jīng)干細(xì)胞不易存活，移植手術(shù)失敗。

本實(shí)驗(yàn)采用Transwell建立神經(jīng)干細(xì)胞與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)模型，用熒光免疫化學(xué)和RT－PCR測(cè)定NSCs中與Th1相關(guān)的 IFN－γ、IL－2，與 Th2 相關(guān)的 IL－4、IL－10 的表達(dá)，結(jié)果顯示兩種細(xì)胞共培養(yǎng)后，神經(jīng)干細(xì)胞呈 INF－γ，IL－2，IL－4，IL－10 陽性;并且與空白對(duì)照組比較，共培養(yǎng)組 IL－2，INF－γmRNA的表達(dá)上調(diào)，IL－4，IL－10mRNA 的表達(dá)下調(diào)。

IL－2、IFN－γ 和 IL－4、IL－10 分別是 Th1 與 Th2 細(xì)胞所分泌的代表性的細(xì)胞因子，在Th1/Th2分化偏移過程中發(fā)揮著獨(dú)特作用。Th0向Th1/Th2分化的關(guān)鍵事件，是IL－12受體β鏈第二個(gè)亞單(IL－12Rβ2)的表達(dá)，以及由 IL－12Rβ2受體啟動(dòng)的信號(hào)傳導(dǎo)。IL－12Rβ2 的表達(dá)受 IFN－γ 和 IL－4 的正負(fù)調(diào)節(jié)。IFN－γ 與IL－4、IL－10能分別促進(jìn) Th1和 Th2的分化并抑制對(duì)方的表達(dá)〔7〕。因此，若能增強(qiáng) IL－4、IL－10 的表達(dá)，或抑制 IFN－γ 的作用，就可以上調(diào)Th1、下調(diào)Th2表達(dá)，而有助于移植耐受的形成。

CD4+Th細(xì)胞不同亞群在移植免疫中通過其分泌的細(xì)胞因子各自發(fā)揮著獨(dú)特作用:Th1細(xì)胞分泌的IFN－γ、IL－2等參與介導(dǎo)移植排斥反應(yīng)〔8〕;Th2 細(xì)胞分泌的 IL－4、IL－10 等則抑制CD4+Th細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，易于誘導(dǎo)移植耐受〔9〕。因此，定向調(diào)控Th細(xì)胞分化，成為誘導(dǎo)移植免疫耐受的策略之一。

NSCs具有無限增殖和多分化潛能。NSCs移植治療腦出血，促進(jìn)缺失的神經(jīng)功能恢復(fù)具有巨大臨床應(yīng)用前景。因此，定向調(diào)控Th細(xì)胞亞群分化，即阻斷Th1細(xì)胞及其所分泌的細(xì)胞因子的效應(yīng)，或增強(qiáng)Th2細(xì)胞及其所分泌的細(xì)胞因子的效應(yīng)已成為誘導(dǎo)移植免疫耐受的策略之一。

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