老年骨肉瘤組織中生存素與組織蛋白酶D的表達(dá)及關(guān)系

徐遠(yuǎn)坤 陳久毅 (貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，貴州 貴陽 550001)

生存素(Survivin)是新發(fā)現(xiàn)的抑制凋亡蛋白，在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展中有重要作用〔1〕。組織蛋白酶D(Cath-D)作為雌激素調(diào)節(jié)的溶酶體蛋白酶，具有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、松解細(xì)胞黏附的能力，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移〔2〕。目前對(duì)老年骨肉瘤組織中Survivin及Cath-D的表達(dá)未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)老年骨肉瘤組織Survivin及Cath-D的表達(dá)，探討其在不同臨床特征中的表達(dá)差別。

1 材料與方法

1.1 材料 2004年1月至2009年6月我院行骨肉瘤手術(shù)后存留的蠟塊組織作為骨肉瘤組。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)兩位病理專家確診;②患者術(shù)前均未進(jìn)行任何放、化療。骨肉瘤組70例，年齡60～83〔平均(69.45)〕歲，其中男40例，女30例。選取同期70例老年良性骨腫瘤術(shù)后蠟塊組織作為對(duì)照組，其中骨樣骨瘤60例，骨母細(xì)胞瘤10例，年齡60～81(平均68.36)歲，其中男40例，女30例。兩組患者在性別、年齡等一般臨床特征的比較中，無明顯差別，具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)方法 Survivin及Cath-D(購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限責(zé)任公司)檢測(cè)應(yīng)用免疫組化S-P法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說明書，均由同一病理學(xué)技師完成，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Survivin及Cath-D蛋白陽性染色均定位于細(xì)胞質(zhì)中，計(jì)算高倍鏡下(×400)隨機(jī)選擇的10個(gè)視野中陽性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，取平均值，計(jì)算陽性反應(yīng)細(xì)胞的百分率。以≥10%為陽性，無明顯陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS6.12軟件進(jìn)行組間χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組Survivin及Cath-D陽性表達(dá)比較 骨肉瘤組Survivin〔50例(71.43%)vs 21例(30.00%)〕及Cath-D蛋白陽性表達(dá)率〔55例(78.57%)vs 24例(34.29%)〕顯著高于對(duì)照組(χ2=24.0335，P ＜0.0001;χ2=27.9187，P ＜0.0001)。

2.2 骨肉瘤組中不同臨床特征患者Survivin和Cath-D的表達(dá)骨肉瘤組Survivin和Cath-D在有、無軟組織浸潤(rùn)及不同Ennecking分期中陽性表達(dá)率有顯著差異(P＜0.01)。見表1。

表1 骨肉瘤組不同臨床特征患者Survivin和Cath-D陽性表達(dá)率的比較〔n(%)〕

2.3 骨肉瘤組Survivin和Cath-D表達(dá)的關(guān)系 骨肉瘤組Survivin和Cath-D的表達(dá)進(jìn)行線性相關(guān)分析，結(jié)果顯示Survivin和Cath-D表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.42，P=0.0129)。

3 討論

老年骨肉瘤患者多為繼發(fā)性，且病情發(fā)展快，腫瘤可于數(shù)月內(nèi)通過血道出現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移，因此其惡性程度高，預(yù)后極差。在此過程中，機(jī)體與轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因和蛋白相對(duì)活躍，對(duì)病變具有明顯促進(jìn)作用。Survivin基因定位于17q25，編碼含有142個(gè)氨基酸，是分子量為16.5 kD 的蛋白質(zhì)〔3，4〕。Survivin具有抑制細(xì)胞凋亡，干擾細(xì)胞周期，調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂，參與腫瘤微血管形成的功能，也是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子〔5〕。Cath-D是一種溶酶體中天冬氨酸肽鏈內(nèi)切酶，具有肽鏈內(nèi)切酶活性，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，Cath-D的促有絲分裂活性有利于腫瘤生長(zhǎng)。而且Cath-D還可以作為雌激素調(diào)節(jié)的溶酶體蛋白酶，具有分解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)與松解細(xì)胞黏附的能力，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，同時(shí)具有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂作用〔6〕。Cath-D作為一種蛋白水解酶，活化后可以直接催化基底膜和ECM的降解，形成局部溶解區(qū)，構(gòu)成腫瘤細(xì)胞移動(dòng)的通道，并間接破壞血管基膜〔7〕。有研究認(rèn)為癌細(xì)胞對(duì)Cath-D合成較正常組織多，分布形態(tài)也不同，易于分泌到細(xì)胞外〔6〕。還有觀點(diǎn)認(rèn)為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移時(shí)，瘤細(xì)胞自脫離原瘤灶到轉(zhuǎn)移灶的過程中，至少應(yīng)穿越兩次血管壁并向周圍組織侵襲，而此過程中，Cath-D、膠原酶、血纖溶酶原激活劑均起重要作用，因此，Cath-D高表達(dá)可以有效促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Survivin和Cath-D對(duì)骨肉瘤發(fā)生發(fā)展有重要作用，骨肉瘤組中Survivin和Cath-D均與有、無軟組織浸潤(rùn)及不同Ennecking分期有關(guān)，由于有、無軟組織浸潤(rùn)及不同Ennecking分期均與患者的預(yù)后密切相關(guān)，因此術(shù)后對(duì)骨肉瘤標(biāo)本進(jìn)行Survivin和Cath-D免疫組化檢測(cè)，可能對(duì)判斷患者預(yù)后有一定價(jià)值。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤生物學(xué)行為的重要標(biāo)志，是導(dǎo)致死亡和影響預(yù)后的主要原因之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Survivin和Cath-D可能相互作用，但是其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。有觀點(diǎn)顯示Survivin和Cath-D均可以促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)〔8〕，因此，Survivin和Cath-D是否通過中介蛋白血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子起作用尚需證實(shí)。當(dāng)Survivin和Cath-D激活后，二者分泌明顯增多，可以直接催化ECM降解，并間接破壞血管基膜，而且Cath-D還可以激活組織蛋白酶B，從而觸發(fā)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，引發(fā)更廣泛的侵襲和轉(zhuǎn)移。而且Survivin和Cath-D協(xié)同作用時(shí)，還參與腫瘤相關(guān)蛋白的水解級(jí)聯(lián)反應(yīng)，共同促進(jìn)老年骨肉瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。

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