心力衰竭大鼠不同時期血漿內(nèi)皮素-1、降鈣素基因相關(guān)肽及神經(jīng)肽Y水平變化及益氣溫陽活血方對其影響

楊冬花 付 蓉 羅建華 袁志柳 (貴州省人民醫(yī)院干醫(yī)科，貴州 貴陽 550002)

長期過度激活的神經(jīng)內(nèi)分泌激素系統(tǒng)可加重血流動力學(xué)紊亂，使心臟前、后負(fù)荷增高，進(jìn)一步促使心室重塑持續(xù)進(jìn)行，最終導(dǎo)致慢性心力衰竭惡化〔1〕。中藥復(fù)方益氣溫陽活血方對改善慢性心力衰竭患者臨床癥狀非常明顯〔2〕，但確切的作用機制目前尚不清楚。本研究通過觀察益氣溫陽活血方對心力衰竭大鼠血漿內(nèi)皮素(ET)-1、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、神經(jīng)肽Y(NPY)等血管活性肽水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康Wistar大鼠90只，體重(250±10)g，雌雄各半，由貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部提供。

1.2 益氣溫陽活血方主要成分 人參、黃芪、丹參、益母草各30 g，白術(shù)、茯苓各15 g，桂枝9 g等11味中藥。藥材從貴州省人民醫(yī)院中藥房一次性選購，生藥按比例取好，加水浸泡1 h，第一遍煮沸40 min，濾渣取汁;再加水煮沸15 min，濾渣取汁，合并2次煎液，水浴中濃縮至每毫升煎液含生藥4 g備用。

1.3 試劑 ET-1由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供，CGRP、NPY由北京解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.4 方法

1.4.1 心力衰竭的模型制備 阿霉素2.5 mg/kg尾靜脈注射，2 次/w，連續(xù)8 w。

1.4.2 動物分組及給藥 將上述所購大鼠隨機分組為:正常組，對照組，治療組。正常組10只，對照組及治療組分為不同的時間段組(第1、3、5、8周末)，每組10只。實驗開始治療組給予益氣溫陽活血方0.8 ml/100 g灌胃(相當(dāng)于人臨床劑量10倍)，每日1次，正常組及對照組則以等量生理鹽水灌胃。所有大鼠均予標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，自由飲水。試驗結(jié)束后麻醉測量左室結(jié)構(gòu)和功能，抽取血漿，后處死動物，取心臟組織，－70℃低溫冰箱中凍存，以檢測其他指標(biāo)。

1.4.3 心功能測定 對各組大鼠實驗結(jié)束后對大鼠行超聲心動圖檢查。分別測量左室舒張末期內(nèi)徑(LVDd)、左室收縮末期內(nèi)經(jīng)(LVDs)、左室后壁厚度(LVPW)、室間隔厚度(IVS)，推算射血分?jǐn)?shù)(EF)。

1.4.4 血漿ET-1、CGRP、NPY的測定 均采用放射免疫法，嚴(yán)格按試劑盒說明書檢測。

2 結(jié)果

2.1 各組一般情況及死亡情況 整個實驗期間，正常及治療組大鼠毛色有光澤，雙眼靈活有神，行動敏捷，對周圍變化靈敏。模型大鼠在第1周后先后出現(xiàn)癥狀，如活動減少、蜷縮、進(jìn)食減少、皮毛松軟、體重減輕等，此后癥狀呈逐漸加重趨勢，從第5周后出現(xiàn)程度不一的腹水，唇周青紫，雙耳蒼白，呼吸減弱，毛色枯槁、散亂豎起，脫毛，嚴(yán)重者行走不穩(wěn)，消瘦，口唇及雙耳發(fā)紺，個別開始死亡。正常及治療組大鼠全部存活，模型組大鼠第5周末組死亡1只，第8周模組死亡2只，兩組模型大鼠生存率分別為90%和80%。

2.2 各組心臟結(jié)構(gòu)及功能的檢測 與正常組比較，模型組第5周末及第8周LVDd、LVDs明顯擴大，有顯著性差異(均P＜0.01);而EF值與正常組比較，模型組第5周末及第8周末則明顯降低(均P＜0.01)。治療各組與正常組比較，差異均無顯著性(均P＞0.05);治療組第5、8周末與模型組第5、8周末比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。見表1。

2.3 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定 與正常組比較，模型組第1周末ET-1、NPY含量明顯升高，而CGRP則明顯降低(均P＜0.05)，并且隨著造模時間的延長，ET-1、NPY含量進(jìn)性升高，CGRP進(jìn)行性降低，第5周末后差異更顯著(均P＜0.01)。見表2。

表1 各組心臟結(jié)構(gòu)及功能的檢測(±s)

表1 各組心臟結(jié)構(gòu)及功能的檢測(±s)

與正常組比較:1)P＜0.01;與同一時間點模型組比較:2)P＜0.05

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表2 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定(±s)

表2 各組血漿ET-1、CGRP、NPY水平的測定(±s)

與正常組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與同一時間點模型組比較:3)P＜0.05

?

3 討論

阿霉素是一種廣譜高效的蒽醌類抗腫瘤化療藥物，具有嚴(yán)重的心臟毒性。長期使用阿霉素可致與累計量有關(guān)的擴張性心肌病和充血性心力衰竭，是目前較為常用、且成熟的心力衰竭動物模型。本實驗?zāi)Ｐ蛣游镆园⒚顾?.5 mg/kg尾靜脈注射，2次/w，累積量達(dá)40 mg/kg后，所有大鼠均出現(xiàn)心腔擴大、不同程度的心衰表現(xiàn)，并且部分大鼠出現(xiàn)死亡，與人類心力衰竭臨床表現(xiàn)相同。多次驗證造模方法，模型大鼠均出現(xiàn)上述表現(xiàn)，說明造模成功。

ET-1主要來源于血管內(nèi)皮、心內(nèi)膜、心肌細(xì)胞，是目前為止發(fā)現(xiàn)最強的縮血管肽類物質(zhì)〔3〕。ET與兒茶酚胺及血管緊張素Ⅱ之間的協(xié)同作用促使心肌細(xì)胞肥大，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞胚胎型基因的表達(dá)和影響成纖維細(xì)胞的膠原合成代謝，導(dǎo)致心肌間質(zhì)纖維化，構(gòu)成心室重構(gòu)的病理基礎(chǔ)〔4，5〕。

CGRP是機體重要的內(nèi)源性心血管保護(hù)物質(zhì)，是體內(nèi)最強的血管擴張劑之一，有明顯拮抗血管收縮劑的作用，CGRP是一種內(nèi)源性舒血管活性肽，其擴血管作用比乙酰膽堿、5-羥色胺、P物質(zhì)等均強，且呈不同程度的劑量依賴性〔6〕。CGRP還具能改善內(nèi)皮細(xì)胞的功能，促進(jìn)血管修復(fù);有降低血液黏度、增加冠脈血流量、拮抗內(nèi)皮素及內(nèi)源性細(xì)胞保護(hù)等作用〔7〕。NPY具有很強的收縮血管作用，能引起劑量依賴的冠脈收縮反應(yīng)，增強冠脈阻力，并引起心臟缺血，繼而引起左心室EF下降，對心臟有負(fù)性肌力作用，NPY明顯升高，其含量越高，對心臟損害作用越大〔8〕。本研究表明在初始的心肌損傷階段，即使機體尚處于代償期，血管內(nèi)皮功能已出現(xiàn)障礙，ET-1、NPY及CGRP參與心衰早期對心肌損傷的病理生理進(jìn)程，為重要的血管活性肽，可作為心力衰竭早期預(yù)警標(biāo)志物。

益氣溫陽活血方主要成分人參、黃芪、丹參、益母草各30 g，白術(shù)、茯苓各15 g，桂枝9 g等11味中藥組成，以參芪桂益氣通陽，丹參益母草活血化瘀，茯苓白術(shù)健脾利水，且益母草既活血又利水，切中心衰病機。近年來的研究表明神經(jīng)內(nèi)分泌-細(xì)胞因子系統(tǒng)引起心肌重塑主要是通過信號傳導(dǎo)途徑和細(xì)胞凋亡過程參與的，這些細(xì)胞因子其下游都要經(jīng)NF-κB通路〔9〕。而NF-κB的過表達(dá)可啟動心房利鈉因子(ANF)、BNP的表達(dá)并引起心肌細(xì)胞肥大，激活金屬基質(zhì)蛋白酶-9(MMP-9)，影響細(xì)胞外基質(zhì)的降解平衡，促使心室重構(gòu)、心腔擴大和心衰發(fā)生〔10〕。故我們推測，在心力衰竭的早期，益氣溫陽活血方通過減少心力衰竭大鼠血漿ET-1、NPY的含量及升高CGRP含量，抑制NF-κB信號通路的活化，減少ANF、BNP、MMP-9等促使心室肥厚、心腔擴大因子的表達(dá)，阻斷心室重塑，增加心臟的射血分?jǐn)?shù)，改善心臟功能，減少死亡率，具體作用機制有待于進(jìn)一步研究證實。

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