血管內(nèi)皮生長因子在喉癌中的表達及其與血管生成和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

任光輝 董 朝 耿中利 李鴻濤 馬斌林

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺頭頸外科，新疆 烏魯木齊 830011)

已有研究表明，幾乎所有實體腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤的血管生成。腫瘤血管形成受許多因素的調(diào)節(jié)，其中具有重要實際意義的是血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)。絕大多數(shù)惡性腫瘤中，VEGF呈高表達，促進內(nèi)皮細胞分裂、增殖，誘導(dǎo)血管新生，并直接作用于腫瘤細胞刺激其生長〔1〕。本文對我院診治的喉癌患者檢測VEGF及微血管密度(MVD)表達情況，探討其在喉癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 病例組50例喉癌患者來自我院2006年6月至2009年6月住院患者，男28例，女22例，年齡50～82〔平均(61.4±10.9)〕歲。所有病例均經(jīng)病理確診，依據(jù)TNM臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期29例。根據(jù)病理中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否分為轉(zhuǎn)移組與未轉(zhuǎn)移組，轉(zhuǎn)移組26例，未轉(zhuǎn)移組24例。20例對照來自我院聲帶息肉患者，男12例，女8例，年齡48～81〔平均(61.5±12.1)〕歲。兩組性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑與方法 一抗鼠CD34單抗、兔VEGF多抗及即用型SABC試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)。嚴格按試劑盒說明書操作，采用免疫組化SABC法檢測，VEGF工作濃度為1∶150稀釋，CD34工作濃度為1∶50稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性喉癌切片作為陽性對照。

1.2.2 結(jié)果判定 VEGF判定:隨機以200倍視野下計數(shù)染成棕黃色的腫瘤細胞數(shù)占整個腫瘤細胞的比例，至少計數(shù)5個視野，1 000個腫瘤細胞。VEGF的表達強度分為0～3級，陽性細胞數(shù) ＜10%計為0，10% ～25%為1，25% ～50%為2，＞50%為3。MVD計數(shù):CD34抗體顯示MVD，凡是被抗體染成棕黃色或棕褐色的內(nèi)皮細胞或細胞簇作為一個微血管計數(shù)，即先在低倍鏡下尋找瘤內(nèi)微血管密集區(qū)，選取5個血管豐富的視野，于200倍視野內(nèi)計數(shù)，取平均值，即為MVD。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料用±s表示，計數(shù)資料以%表示，相關(guān)性分析用非參數(shù)檢驗的Pearson相關(guān)系數(shù)計算。

2 結(jié)果

2.1 兩組中VEGF及MVD的表達情況 50例喉癌組織中VEGF表達陽性例數(shù)為31例(62%)明顯高于對照組陽性例數(shù)〔5例(20%)，P＜0.01〕。喉癌組織MVD表達值亦高于對照組〔(22.35±2.1)vs(9.1±3.1)，P ＜0.01〕。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關(guān)(r=0.729，P=0.005)。

2.2 VEGF陽性表達與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VEGF陽性表達率與TNM分期及頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。隨臨床分期的進展，VEGF表達率增高;且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)。見表1。

表1 VEGF陽性表達率與喉癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

3 討論

惡性腫瘤可呈現(xiàn)出無限制的生長、增殖和侵襲的特點，這一切都依賴于建立更多的血管網(wǎng)絡(luò)供給大量的營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走更多的代謝產(chǎn)物，其中VEGF在腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用〔2，3〕。本組結(jié)果說明 VEGF在喉癌發(fā)生中起重要作用。VEGF是一個分子量為34～35 kD的高度糖基化的堿性蛋白，由分子量為17～22 kD的同源雙聚體構(gòu)成。人體的許多組織可檢測到VEGF的表達，VEGF在腫瘤細胞株中的表達也很普遍，目前已肯定的有胃腸道原發(fā)腺瘤、喉癌、腎癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等。研究表明，腫瘤生長到1～2 mm3時，必須有新生血管的形成，才能保證其快速生長〔4，5〕。VEGF生物學(xué)功能主要有:(1)促進血管形成。作為特異內(nèi)皮細胞分裂素，能直接促進內(nèi)皮細胞分裂，增殖，體外促進細胞生長，并可誘導(dǎo)血管增生。(2)增加血管通透性。(3)增加組織因子的產(chǎn)生，可直接改變內(nèi)皮細胞基因表達，促進細胞浸潤，有利于血管形成。腫瘤新生血管有重要作用:(1)輸送氧氣、營養(yǎng)，轉(zhuǎn)運代謝產(chǎn)物，滿足腫瘤組織無限生長的需要。(2)內(nèi)皮細胞本身對腫瘤細胞有旁分泌刺激作用，產(chǎn)生生長因子、細胞因子促進腫瘤細胞生長轉(zhuǎn)移。(3)腫瘤的血管化使癌細胞易于接近血管系統(tǒng)，并且腫瘤血管的結(jié)構(gòu)缺陷更有利于腫瘤的血管播撒。VEGF可能通過促進喉癌新生血管及淋巴管的增生、提高血管的滲透性等機制促進癌組織的發(fā)展和轉(zhuǎn)移〔6〕。惡性腫瘤轉(zhuǎn)移很少發(fā)生在血管新生之前，腫瘤的轉(zhuǎn)移及其在轉(zhuǎn)移部位的生長也依賴腫瘤組織的血管新生。腫瘤血管生成分前血管期與血管期，缺乏血液供應(yīng)的腫瘤細胞主要靠彌散供氧，其體積一般不會超過1～2 mm3，可存在數(shù)月至數(shù)年而不發(fā)生轉(zhuǎn)移，一旦其獲得血供則迅速生長并發(fā)生轉(zhuǎn)移。

腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移受多種因素的影響，其中腫瘤內(nèi)MVD是影響腫瘤生物學(xué)特征的重要因素之一。近年來，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤內(nèi)的血管形成程度與腫瘤的臨床病理特征和預(yù)后有密切的關(guān)系。MVD是利用針對血管內(nèi)皮細胞抗原的免疫組化技術(shù)對腫瘤血管進行定量，可直接量化反映腫瘤血管生成的程度。MVD指切片中血管“熱點”區(qū)在1個200倍視野下的血管數(shù)目。一般認為腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)與“熱點”區(qū)的MVD有良好的相關(guān)性。本組喉癌患者VEGF水平與癌組織中MVD呈明顯正相關(guān)。表明隨著VEGF水平的增高，MVD增多，血管增生，促進了腫瘤的生長。

綜上所述，VEGF促進血管再生，在喉癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到了重要作用，與淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。喉癌中VEGF的表達與MVD呈正相關(guān)，可以作為判斷腫瘤惡性程度和估計預(yù)后的獨立影響因子，為抗血管治療提供依據(jù)?？鼓[瘤血管生成的基因治療策略適用于多種實體瘤，隨著對VEGF在喉癌發(fā)病機制中作用研究的進一步深入，抑制血管形成治療腫瘤的新策略會越來越被重視，配合其他抗腫瘤方法必將提高治療效果。

1 李能蓮，張 煦，王雅莉.缺氧誘導(dǎo)因子及其應(yīng)答基因BNIP3和血管內(nèi)皮生長因子在胃腺癌中表達及臨床意義〔J〕.中華腫瘤雜志，2008;30(1):44-7.

2 楊東霞，韓艷春，劉魯英，等.Elf-1和VEGF在非小細胞肺癌組織中的表達及意義〔J〕.癌癥，2009;28(7):762-7.

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4 黃 方，康 瑞，吳春林.VEGF-C、NF-κBp65及 Survivin在鼻咽癌中的表達及臨床意義〔J〕.山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2009;47(6):83-7.

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6 盧 培，陸慧琦，韓煥興，等.2種檢測VEGF-C和VEGFR-3基因表達的方法在診斷食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的價值〔J〕.檢驗醫(yī)學(xué)，2009;24(6):446-9.