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    蜂蜜抗氧化性的研究進(jìn)展

    2012-08-01 02:42:58高子立
    中國蜂業(yè) 2012年1期
    關(guān)鍵詞:超氧過氧化陰離子

    高子立

    西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院,重慶400715

    1 前言

    蜂蜜是蜜蜂將采集的植物花蜜或植物細(xì)胞滲出的蜜露或昆蟲排泄的甘露,混以蜜蜂唾液腺的分泌物,經(jīng)充分釀制而儲(chǔ)藏在蜜巢的甜物質(zhì)。蜂蜜不僅是一種營養(yǎng)價(jià)值高的保健食品,而且還具有多種生物學(xué)活性,如抗氧化、解毒、抗菌、消炎、滋潤、防腐、保護(hù)創(chuàng)面、促進(jìn)細(xì)胞再生等[1]。

    傳統(tǒng)食品中的抗氧化物質(zhì)可以保護(hù)生物體免受自由基的攻擊,可以預(yù)防癌癥、心腦血管疾病以及糖尿病的發(fā)生和發(fā)展。自由基生物學(xué)研究認(rèn)為,活性氧自由基是導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞損傷的最主要氧化劑,它可以和細(xì)胞膜的多不飽和脂肪酸、細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)以及核酸等生物大分子發(fā)生反應(yīng),對(duì)細(xì)胞造成不可逆的損傷,最終導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生衰老和死亡[2]。

    蜂蜜用作食品的歷史非常悠久,但它的抗氧化功能知道最近才被發(fā)現(xiàn)。蜂蜜抗氧化性的強(qiáng)弱取決于蜜源、季節(jié)、環(huán)境因素,以及蜜蜂的釀蜜過程。蜂蜜中的抗氧化成分包括黃酮和酚酸、酶類(葡萄糖氧化酶、過氧化氫酶)、抗壞血酸、美拉德反應(yīng)產(chǎn)物、類胡蘿卜素物質(zhì)、有機(jī)酸、氨基酸和蛋白質(zhì)等。這些天然的抗氧化劑具有抗菌、消炎、抗過敏、抗血栓形成和血管擴(kuò)張等廣泛的生物學(xué)活性。

    2 蜂蜜抗氧化能力的測定

    2.1 羥自由基清除能力比較

    羥基自由基的化學(xué)性質(zhì)非?;顫?可損傷蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等多種生物大分子,尤其對(duì)脂質(zhì)過氧化的作用最強(qiáng)?!H可直接作用于細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸,引發(fā)不飽和脂肪酸過氧化反應(yīng)并最終生成丙二醛(MDA)。酚類物質(zhì)能清除·OH是由于酚類化合物提供了酚羥基上的氫,而使·OH還原。此外,酚類物質(zhì)還能通過對(duì)金屬離子的絡(luò)合,降低Fenton反應(yīng)的速率,從而間接實(shí)現(xiàn)抗氧化作用。

    張文靜等[3]在測定總酸、還原糖、過氧化氫、淀粉酶值的基礎(chǔ)上,采用羥自由基清除法測定并比較了4種蜂蜜的抗氧化活性。

    實(shí)驗(yàn)原理如下[4]:Fenton試劑(過氧化氫和硫酸亞鐵)是以過氧化氫為氧化劑,以Fe2+為催化系的氧化法,其反應(yīng)機(jī)理如下:

    所產(chǎn)生的羥自由基與結(jié)晶紫作用后使體系吸光度降低,利用吸光度值的變化間接測定所產(chǎn)生的羥自由基。在一系列10 mL帶蓋比色管中分別加入1.4 mL結(jié)晶紫溶液(2×10-5mol/L)、1.0mL Fe2+溶液(5×10-3mol/L)、0.4 mL H2O2(1%)溶液,1.0 mLTris-HCl溶液(pH5.5),用二次蒸餾水稀釋到10 mL并搖勻,放置5 min后,在波長588 nm處測定吸光度。

    結(jié)果表明:4種蜂蜜均具抗氧化作用,洋槐蜜、枸杞蜜、椴樹蜜、棗花蜜對(duì)羥自由基的清除率分別為:4.96%、5.83%、16.8%、23.2% 。說明蜂蜜能夠清除體內(nèi)過多的自由基,降低過氧化脂質(zhì)的生成,是很好的抗氧化產(chǎn)品。

    2.2 超氧陰離子自由基的清除試驗(yàn)

    超氧陰離子自由基是基態(tài)氧接受一個(gè)電子形成的第一個(gè)氧自由基,超氧陰離子自由基本身不很活潑,但由于超氧陰離子在體內(nèi)壽命很長,它可以接受一個(gè)H+形成質(zhì)子化的超氧陰離子自由基HOO·,HOO·不帶電荷,具有疏水性,可以穿透細(xì)胞膜,擴(kuò)散到離生成位置很近的距離,到達(dá)靶位置,具有更大的危害性。在生物體內(nèi),由于氧代謝的存在,主要發(fā)生酶促氧化還原反應(yīng)生成超氧陰離子自由基,其中黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶體系產(chǎn)生的超氧陰離子是機(jī)體常見的產(chǎn)生超氧陰離子的途徑[5]。

    曹煒[7]等參考Beauchamp的方法對(duì)五種蜂蜜的超氧陰離子自由基清除能力進(jìn)行了測試。實(shí)驗(yàn)原理如下:

    光照核黃素產(chǎn)生超氧陰離子(O-2·),超氧陰離子還原NBT生成藍(lán)色化合物。反應(yīng)體系包括3×10-6mol/L核黃素、1 × 10-2mol/L蛋氨酸、1 × 10-4mol/L NBT 及不同濃度的樣品,總反應(yīng)體系為5mL。將上述試劑和樣品混合后,放入20W的熒光燈箱中,調(diào)節(jié)燈和反應(yīng)物的距離使光照均勻。2 5℃下光照25min,在560nm處測定吸光值。

    光超氧陰離子自由基清除率通過下式計(jì)算:

    式中A為空白管的吸光值,A1為樣品管的吸光值。

    試驗(yàn)結(jié)果表明五種蜂蜜對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力大小為枇杷蜜>荊條蜜>黨參蜜>枸杞蜜>黃芪蜜。

    2.3 脂質(zhì)過氧化體的抑制作用

    生物體內(nèi)的脂質(zhì)過氧化主要發(fā)生在細(xì)胞膜上,細(xì)胞膜的主要成分是磷脂和蛋白質(zhì),其中磷脂中含有多不飽和脂肪酸,最容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),很多疾病和衰老與脂質(zhì)過氧化有關(guān),因此預(yù)防機(jī)體內(nèi)的質(zhì)脂過氧化,對(duì)人類的健康有重要的作用。引起機(jī)體脂質(zhì)過氧化的因素有很多,其中二價(jià)鐵離子是生物體內(nèi)最主要的脂質(zhì)過氧化促進(jìn)劑[7]。

    曹煒[8]等以二價(jià)鐵離子為脂質(zhì)過氧化促進(jìn)劑,以卵磷脂脂質(zhì)體為模型,研究了蜂蜜對(duì)脂質(zhì)過氧化的抑制作用。試驗(yàn)原理如下:

    10mL試管中加入0.2mL脂質(zhì)體溶液,不同體積的樣品和50mmol/L FeSO4溶液50μL,再加磷酸鹽緩沖溶液至3mL。不加樣品的反應(yīng)物作為模型,不加FeSO4溶液作為空白,將反應(yīng)物置于37℃中水浴40min,每5min振搖一次。最后加入10%三氯乙酸1mL,0.8%硫代巴比妥酸1mL,混勻,置沸水中15min,立刻用冰水冷卻,在5000r/min下離心10min,取上清液在532nm處測定吸光度(A)。

    試驗(yàn)結(jié)果表明,各種蜂蜜的清除能力大小依次為:黨參蜜>荊條蜜>枇杷蜜>黃芪蜜>枸杞蜜。

    2.4 還原能力測定

    Yen[9]和 Siddhuraju,P[10]等人研究表明,抗氧化劑的還原力與其抗氧化性之間存在聯(lián)系??寡趸瘎┦峭ㄟ^自身的還原作用給出電子而清除自由基的[11],還原力越強(qiáng),抗氧化性越強(qiáng)。因此可通過測定還原力來說明抗氧化活性的大小。

    徐坤[112]等在10mL試管中分別加入不同濃度樣品1mL,磷酸鹽緩沖溶液(0.2mol/L,pH=6.6)2.5mL和1%鐵氰化鉀5mL,置于50℃水浴中反應(yīng)20min,然后加入10% 的三氯乙酸5mL,搖勻。吸取上清液2.5mL,加入2.5mL蒸餾水和0.5mL 0.1%的三氯化鐵溶液。樣品在700nm處測定吸光值。反應(yīng)物的吸光值增加表明還原力增強(qiáng)。

    試驗(yàn)結(jié)果表明5種蜂蜜還原力的大小順序依次為荊條蜜>枇杷蜜>黨參蜜>枸杞蜜>黃芪蜜。

    2.5 蜂蜜中總酸酚含量的測定

    徐坤等參考Folin-Ciocalteu[12]法測定。準(zhǔn)確移取1.0mL稀釋后的蜂蜜溶液,加入1mL的Folin-Ciocalteu試劑,混勻,然后加入5mL 1mol/L的碳酸鈉溶液,用蒸餾水定容至10mL,充分混勻,在黑暗條件下放置1h,用1cm的比色杯在波長為760nm下測定光密度值。將對(duì)照品原兒茶酸配置成0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照上述方法制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品中總酚酸的含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)的值,蜂蜜總酚酸含量以原兒茶酸的相對(duì)量表示。

    試驗(yàn)結(jié)果表明4種蜂蜜的酚酸含量大小順序依次是紫云英蜜>棗花蜜>枸杞蜜>益母草蜜。

    3 總結(jié)

    蜂蜜的質(zhì)量取決于它們的化學(xué)成分和植物來源。而多酚化合物的含量受到植物來源、地理來源和氣候特征的影響,因而鑒定和量化蜂蜜中的多酚化合物意義重大。此外,多種蜂蜜均有抑制超氧陰離子自由基和抗脂質(zhì)過氧化的作用表明蜂蜜是一種很好的抗氧化保健食品。

    [1]玄紅專,吳玉厚,羅琳.不同蜂蜜抗氧化活性測定[J].食品研究與開發(fā),2008,03:116.

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    [3]玄紅專,桑青,沈保濤.蜂花粉、蜂膠、蜂王漿、蜂蜜抗氧化作用的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(3):870-871.

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