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    NF-κB與Caspase-9在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

    2012-07-31 09:23:06程善光季萬勝
    山東醫(yī)藥 2012年39期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞免疫組化分化

    王 敏,程善光,季萬勝

    (濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,山東濰坊 261031)

    核因子-κB(NF-κB)是一種具有多向性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能的蛋白,在許多惡性腫瘤中均有高表達(dá)[1,2],與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。Caspase-9是一種促凋亡因子,是內(nèi)源性細(xì)胞凋亡傳導(dǎo)通路中最重要的凋亡啟動因子,其活化能啟動級聯(lián)激活反應(yīng)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡[3]。2010年1月~2010年11月,我們采用免疫組化法檢測了NF-κB與Caspase-9在胃癌組織中的表達(dá),并分析其與臨床病理特征的關(guān)系,旨在探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料 同期行手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的胃癌組織標(biāo)本68份(胃癌組),患者男48例,女20例,年齡20~79歲,中位年齡59.5歲。根據(jù)WHO分類標(biāo)準(zhǔn),低分化/Ⅲ級胃癌23例,高、中分化/Ⅰ、Ⅱ級胃癌45例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例,有漿膜浸潤40例。患者術(shù)前均未行化療、放療和免疫治療。另取距離癌灶5 cm以上癌周正常組織作為癌旁組。

    1.2 NF-κB、Caspase-9表達(dá)檢測 所有組織標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,制備4 μm厚連續(xù)切片,采用免疫組化法檢測NF-κB和Caspase-9表達(dá)。兔抗人Caspase-9抗體、兔抗人NF-κBp65抗體均購于武漢博士德公司,PV-9000二步法所用免疫組化檢測試劑及DAB顯色試劑盒購于北京中杉生物科技有限公司,嚴(yán)格按說明書操作,用已知的陽性片做陽性對照,以PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定:NF-κB、Caspase-9陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)和/或胞核染成棕褐色或棕黃色。隨機(jī)抽取有代表性的10個連續(xù)的高倍視野(×400倍),每個視野計數(shù)100個細(xì)胞,均值為該切片的積分值。根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞比例進(jìn)行綜合評分。染色強(qiáng)度評分:無色為0分,淺黃為1分,棕黃為2分,棕褐為3分;陽性細(xì)胞百分比評分:<5%為0分,5% ~25%為1分,26% ~50%為2分,>50%為3分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≤1分為陰性,≥2分者為陽性[4]。分析 NF-κB、Caspase-9 表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系及二者表達(dá)的相關(guān)性。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用 Fisher確切概率法和 χ2檢驗及Spearman等級相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 NF-κB及 Caspase-9表達(dá) 胃癌組及癌旁組NF-κB 陽性率分別為 63.2%(43/68)、33.3%(23/68);Caspase-9陽性率分別為 36.8%(25/68)、80.9%(55/68),P 均 <0.05。

    2.2 NF-κB和Caspase-9表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

    表1 NF-κB和Caspase-9表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

    2.3 NF-κB、Caspase-9在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性胃癌組NF-κB表達(dá)陽性的43例組織中Caspase-9蛋白表達(dá)陽性11例,25例陰性表達(dá)NF-κB的組織中14例Caspase-9蛋白表達(dá)陽性,經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析,NF-κB和Caspase-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.304,P=0.025)。

    3 討論

    NF-κB是調(diào)節(jié)細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵因子,參與多種凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,在腫瘤的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[5]。其激活最常見的形式為p50和p65組成的二聚體,在非激活條件下,NF-κB與抑制因子IκB相結(jié)合而處于無活性狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)胞因子、腫瘤壞死因子(TNF)等多種刺激時,IκB發(fā)生磷酸化和泛素化并隨后降解,NF-κB被激活并與IκB分離,活化的NF-κB從胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞核,定位于細(xì)胞核而不能返回胞質(zhì),與靶基因上啟動子或增強(qiáng)子的κB基因序列發(fā)生特異性結(jié)合,調(diào)控一系列腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成與局部浸潤[6]。通常認(rèn)為,NF-κB在癌癥的早期事件中通過刺激惡性細(xì)胞生長參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而促進(jìn)癌癥的發(fā)生;在癌癥晚期發(fā)展中,NF-κB作為調(diào)節(jié)因子也發(fā)揮一定作用,如NF-κB可上調(diào) COX-2、MMP-7表達(dá),促進(jìn)腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移[7]。Sasaki等[8]對胃癌組織及癌旁組織進(jìn)行免疫組化和RT-PCR分析,發(fā)現(xiàn)NF-κB的活性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腹膜轉(zhuǎn)移、腫瘤體積等臨床病理特點有關(guān),與胃癌患者的存活時間呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果表明,NF-κB在胃癌組織中的表達(dá)率顯著高于癌旁組織,其表達(dá)與胃癌的組織學(xué)分型、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),即隨著分化減低、浸潤深度的增加體積,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,NF-κB的表達(dá)明顯升高,此與Sasaki等報道的結(jié)果相符,說明NF-κB能夠促進(jìn)胃癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移,并可以對胃癌的預(yù)后進(jìn)行預(yù)測。

    Caspase是一個半胱氨酸蛋白酶家族,是執(zhí)行細(xì)胞凋亡的主要酶類,通常情況下以無活性的酶原形式存在于細(xì)胞中,在細(xì)胞線粒體依賴的凋亡傳導(dǎo)途徑中,Caspase-9屬于啟動型Caspase,位于細(xì)胞凋亡傳導(dǎo)通路的上游,當(dāng)?shù)蛲銎鹗夹盘栕饔糜诰€粒體后,引起線粒體釋放細(xì)胞色素C,與凋亡蛋白酶活化因子(Apaf-1)結(jié)合并使其構(gòu)象改變形成活性復(fù)合體,后者與Caspase-9結(jié)合并誘導(dǎo)其發(fā)生自身活化,活化后又能激活下游的Caspase因子,啟動細(xì)胞凋亡級聯(lián)反應(yīng),從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。由于Caspase可以自我活化并能夠相互激活,因此凋亡過程一旦觸發(fā),即呈級聯(lián)放大效應(yīng)。Park等[9]研究 MMC介導(dǎo)的SUN-16人胃癌細(xì)胞株凋亡時發(fā)現(xiàn),Caspase-9在腫瘤細(xì)胞的凋亡過程中發(fā)揮了重要作用。Caspase-9蛋白低表達(dá)時細(xì)胞凋亡受到抑制的機(jī)制可能是Caspase-9蛋白表達(dá)下降,其激活下游Caspase因子的能力降低,從而使細(xì)胞凋亡減少,細(xì)胞凋亡和增殖平衡被打破,胃癌則可能發(fā)生。本研究結(jié)果表明,Caspase-9在胃癌組織中的表達(dá)率明顯低于癌旁組,且分化程度越差其表達(dá)率越低,但與浸潤深度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)系。表明Caspase-9表達(dá)與胃癌的惡性程度有關(guān),Caspase-9是正常分化細(xì)胞所具有的,正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程中易失去某些表型,因而我們認(rèn)為Caspase-9隨著分化降低而表達(dá)減少,是腫瘤異常分化的結(jié)果。

    本研究還發(fā)現(xiàn)NF-κB和Caspase-9在胃癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。說明NF-κB能夠通過某種途徑抑制Caspase 9的表達(dá),從而抑制細(xì)胞凋亡??梢哉J(rèn)為胃癌細(xì)胞在NF-κB的作用下增殖、分化乃至轉(zhuǎn)移,在此過程中,Caspase-9作為影響細(xì)胞凋亡的過程因子,也起著不可或缺的作用。

    總之,胃癌組織中存在 NF-κB高表達(dá)及Caspase-9低表達(dá),且 NF-κB對 Caspase-9具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用,可以進(jìn)一步抑制細(xì)胞凋亡,共同促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步深入研究兩種因子與胃癌的關(guān)系,可為揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制提供新的思路。

    [1]Sethi G,Sung B,Aggarwal BB.Nuclear factor-kappa B activation:from bench to bed side[J].Exp Biol Med(Maywood),2008,233(1):21-31.

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    [9]Park JC,Park MJ,Hwang CS,et al.Mitomycin C induces apoptosis in a caspases-dependent and Fas/CD95-independent manner in human gastric adenocarcinoma cells[J].Cancer Lett,2000,158(2):125-132.

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