牛妊娠早期精準(zhǔn)ELISA檢測(cè)

Kathy Velek Shona Michaud Kate Boucher Anna Rice Lori Plourde Nevena Djuranovic Christoph Egli Peter Welles Valerie Leathers

1.IDEXX Laboratories Inc.,Westbrook-Maine 04092；2.IDEXX Switzerland AG,Liebefeld-Bern 3097

精準(zhǔn)及時(shí)的牛妊娠檢測(cè)，是當(dāng)今牧場(chǎng)繁殖管理方案的一項(xiàng)重要組成部分。獸醫(yī)和牧場(chǎng)主通過檢測(cè)盡早發(fā)現(xiàn)空懷牛，能夠及時(shí)配種并縮短胎間距，從而幫助牧場(chǎng)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)奶量和利潤的最大化（圖1）。

另外，通過頻繁妊娠檢測(cè)也能夠優(yōu)化胎間距，空懷天數(shù)每增加1d，養(yǎng)殖成本可增加32.9元/d或5美元/d。愛德士公司研發(fā)了ELISA妊娠檢測(cè)方法，最早能夠在配種后28d精準(zhǔn)檢測(cè)，為獸醫(yī)和牧場(chǎng)主提供了另外一種空懷牛早期鑒定的工具。

1 材料與方法

愛德士牛妊娠檢測(cè)試劑盒，以牛血清或血漿中存在的早期妊娠相關(guān)糖蛋白（PAGs）作為判斷妊娠的標(biāo)志。試劑盒中抗-PAG抗體包被在固相板上，結(jié)合樣品中可能含有的PAGs。生物素偶聯(lián)PAG二抗與鏈霉親和素辣根過氧化物酶（SA-HRP）一起作為檢測(cè)試劑。TMB底物作為含有PAG樣本的顯色劑，并用終止液停止酶促反應(yīng)。在450nm波長下讀數(shù)，顯色超過試驗(yàn)閾值的孔被認(rèn)定為陽性，表明牛妊娠；若沒有顯色或顯色不明顯，表明?？諔眩▓D2）。

從奶牛場(chǎng)或肉牛場(chǎng)采集血清或血漿，來評(píng)估愛德士公司妊娠檢測(cè)試劑的敏感性和特異性。實(shí)驗(yàn)中總共使用783份血清樣本和1001份血漿樣本，這些樣本來自美國各地，包括緬因州、佛蒙特州、紐約州、威斯康星州、賓尼法吉亞州、華盛頓州、印第安納州以及瑞士和中國。根據(jù)產(chǎn)品說明書操作，用愛德士ELISA檢測(cè)樣品。牛的妊娠狀況通過超聲波和直腸檢查來確認(rèn)。

2 結(jié)果與分析

檢測(cè)采自整個(gè)妊娠期的樣品，結(jié)果表明妊娠期PAG水平始終保持在閾值之上（圖3）。

圖1 牛只泌乳曲線

圖2 檢測(cè)方案

圖3 通過愛德士ELISA檢測(cè)牛早期PAG水平

通過大批量現(xiàn)場(chǎng)樣本檢測(cè)，得到總體的敏感性和特異性。結(jié)果表明，授精后28d已確認(rèn)妊娠牛的621份血漿樣品和552血清樣品敏感性均為99.5%。231份血清樣品和380份血漿樣品的特異性分別為93.1%和94.7%。用于評(píng)估特異性的樣本為經(jīng)超聲波或直腸檢查確認(rèn)的已配空懷牛以及產(chǎn)后60d以上和未配種的牛只（圖4）。

產(chǎn)犢后，愛德士ELISA方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PAG水平下降（圖5）。產(chǎn)后60d檢測(cè)血清（n=65）和血漿（n=90），PAGs含量值降到基準(zhǔn)線以下，特異性為100%。

3 討 論

圖4 超聲波和直腸檢查結(jié)果

圖5 血清樣本PAG水平

對(duì)愛德士妊娠試劑盒的評(píng)估表明，妊娠檢測(cè)產(chǎn)品對(duì)于現(xiàn)有的繁殖管理方案是非常有用的補(bǔ)充。這為受精后28d乃至整個(gè)妊娠過程中診斷妊娠牛和空懷牛提供了可靠的方法。獸醫(yī)和牧場(chǎng)主通過不斷地確認(rèn)妊娠狀況來發(fā)現(xiàn)空懷牛，縮短胎間距。因?yàn)楫a(chǎn)后PAG水平迅速降到基準(zhǔn)線以下，所以ELISA能夠在產(chǎn)犢后60d使用，作為新一輪妊娠檢測(cè)的可靠方法。獸醫(yī)在常規(guī)畜群檢測(cè)中，可使用愛德士ELISA對(duì)配后時(shí)間短、直腸無法準(zhǔn)確檢測(cè)的個(gè)體牛只進(jìn)行妊娠狀況評(píng)估。

另外，當(dāng)養(yǎng)殖戶不具備常規(guī)獸醫(yī)診斷服務(wù)或者直腸檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)不足時(shí)，獸醫(yī)可以推薦使用愛德士ELISA檢測(cè)。與其他診斷檢測(cè)一樣，愛德士牛妊娠檢測(cè)試劑盒作為牧場(chǎng)整體健康和繁殖管理方案的一部分，應(yīng)該在獸醫(yī)指導(dǎo)下使用。

[1]FRENCH P D，NEBEL，R L.The simulated economic cost of extended calving intervals in dairy herds and comparison of reproductive management programs[J].Journal of Dairy Science，2003，86（S1）:54.