高效液相色譜法測定格列齊特緩釋片的含量

蔣海峰

(黑龍江大學化學化工與材料學院有機化學實驗室，黑龍江 哈爾濱 150080)

格列齊特為磺酰脲類第2代口服降糖藥物[1－2]，格列齊特緩釋片是其緩釋劑型之一，也是目前患者常用藥物。2005年版《中國藥典(二部)》和文獻[3]，其中格列齊特片的含量測定方法為電位滴定法、紫外分光光度法和高效液相色譜法，但未詳細設有該物質(zhì)的相關檢測項;同時，由于格列齊特緩釋片輔料的原因，在228 nm波長下紫外測定有干擾，而高效液相色譜法在測定藥物有效含量時具有精密度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點[3－5]。因此，筆者采用高效液相色譜法測定了格列齊特緩釋片的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC－10ATVP液相色譜儀(日本島津公司);SPD－10AVP紫外檢測器(日本島津公司);JA1003型電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)。色譜乙腈(山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司);磷酸(天津科密歐化學試劑有限公司)，格列齊特原料藥(天津中新藥業(yè)集團股份有限公司，批號為Y05050035，純度99%);無水乙醇(分析純，天津市北方天醫(yī)化學試劑廠);色譜甲醇(天津科密歐化學試劑有限公司);格列齊特緩釋片(施維雅＜天津＞制藥有限公司，批號分別為 9G0502，2002258，2001948)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μL);流動相:乙腈 － 水 － 磷酸(70 ∶30 ∶0.1);流速:0.8 mL/min;檢測波長:228 nm;柱溫:室溫。

2.2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重的格列齊特原料藥0.0032 g，置100 mL容量瓶中，加95%乙醇適量，超聲使其完全溶解，再加95%乙醇定容至100 mL，作為貯備液。根據(jù)2010年版《中國藥典(二部)》，取10片格列齊特緩釋片(批號為9G0502)，搗碎，研細，取細粉適量置于50 mL容量瓶中，加95%乙醇適量，超聲使其完全溶解，室溫下加95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用一次性濾膜過濾，取濾液適量，再用95%乙醇定量稀釋制成20 μg/mL的濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

檢測限試驗:將配置好的供試品溶液不斷稀釋，搖勻，進樣，以信噪比 S/N=3作為檢測限。結(jié)果檢測限為0.5 μg/mL。

專屬性試驗:分別取格列齊特原料藥的貯備液和供試品溶液各20 μL進樣，按色譜條件進樣，色譜圖見圖1。可見，格列齊特原料藥保留時間是7.0 min，格列齊特緩釋片的輔料出峰在6 min以內(nèi)，格列齊特主藥峰與輔料峰達到有效分離，分離度大于2，輔料對格列齊特測定無干擾，理論板數(shù)按格列齊特峰計算不低于2000，表明方法專屬性良好。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取105℃干燥至恒重的格列齊特原料藥0.0032 g，置100 mL的容量瓶中，按貯備液方法制備溶液，用移液管從貯備液中精密量取 0.2，1，2，4，6，8，10 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用95%乙醇定容，每次用液相針取20 μL注入液相色譜儀中，峰面積分別為 24107.9，80170.5，159033.8，315542.7，473342.8，638712.3，792820.0，得到標準曲線 A=24675 C+2886.3，r=0.9999(n=7)。結(jié)果表明，格列齊特的95%乙醇液在0.64～32 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，8，12 h時依法進樣。結(jié)果峰面積分別為 496501，496383，496156，496373，496079，平均 496298，RSD 為 0.035%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:按處方比例精密稱取格列齊特和輔料混合，分別為標示量的90%，100%，120%，置100 mL容量瓶中，用95%乙醇溶解并稀釋定容至刻度，經(jīng)0.8 μm微孔濾膜過濾，精密量取濾液并稀釋。結(jié)果見表1。

表1 格列齊特加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

精密度試驗:取標示量為90%的加樣回收試驗項下溶液，連續(xù)進樣6次。結(jié)果的 RSD為0.22%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批次(批號為9G0502)的樣品10片，按供試品溶液制備方法操作，重復試驗6次。結(jié)果的 RSD為0.57%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.4 樣品含量測定

取3種同一廠家不同批次(9G0502，2002258，2001948)的格列齊特緩釋片各10片，依法測定，結(jié)果含量分別為標示量的99%，101%，98%，均符合要求。

3 討論

由2010年版《中國藥典(二部)》[6]可知，格列齊特溶于三氯甲烷，在甲醇中略溶，在乙醇中微溶。本試驗中，為了避免三氯甲烷和甲醇的毒性，將格列齊特溶于95%乙醇中，但一定要長時間超聲處理，確保格列齊特全部溶于乙醇中，才能使數(shù)據(jù)準確。

稱取格列齊特原料藥2 mg于50 mL燒杯中，用少量95%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻度線，以95%乙醇為空白對照，在采用紫外分光光度法，200～400 nm波長處進行波長掃描，格列齊特在228 nm波長處有最大吸收。筆者查閱相關文獻資料[8]，通過紫外分光光度法試驗確定了格列齊特的波長為228 nm，輔料的雜質(zhì)峰的干擾可以忽略，用外標法以色譜峰的面積計算藥品含量。經(jīng)過方法學驗證，本方法操作簡便，回收率、精密度、重現(xiàn)性等結(jié)果均符合分析方法規(guī)范要求，可用作格列齊特緩釋片的含量測定方法。

[2]Krentz A J，Bailey CJ.Oral antidiabetic agents:Current role in type 2 di-abetes mellitus[J].Drugs，2005，65:385－411.

[3]Rambiritch V，Naidoo P.Gliclazide modified release[J].Drugs，2005，65:1449－1450.

[4]董翠萍.反相高效液相色譜法測定治傷膠囊中歐前胡素含量[J].中國藥業(yè)，2012，24(1):30 －31.

[5]劉 楊，賴慶寬.高效液相色譜法測定復方茶新那敏片中馬來酸氯苯那敏含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(1):26－27.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:809－810.

[7]陳勇川，董 慧，代 青，等.反相高效液相色譜法測定生物樣品中左氧氟沙星的含量[J].中國抗生素雜志，1998，23(5):342－343.