基于小鼠生理生化指標探討生半夏和竹瀝半夏的寒熱藥性*

楊新杰，楊 芳，劉 琦，王 薇，崔九成，宋小妹

(陜西中醫(yī)學院藥學院，陜西咸陽 712046)

半夏為天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb.)Breit.的干燥塊莖，性辛，味溫，有毒。具有燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)之功效。用于濕痰寒痰、咳喘痰多，痰飲眩悸，風痰眩暈，痰厥頭痛，嘔吐反胃，胸脘痞悶，梅核氣等癥［1］。半夏始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，“多毒不可久服”［2］，歷代的本草文獻也均將其記載為“辛溫、有毒”。半夏藥用歷史悠久，是中醫(yī)臨床上最常用的有毒中藥之一，因此半夏的炮制方法及炮制作用為歷代醫(yī)家所關(guān)注。半夏通過炮制，不僅可以減毒，也是其功效的發(fā)揮方向的有效控制因素之一。

竹瀝是竹子經(jīng)加工后提取的汁液。它是一種無毒無副作用，集藥、食兩用的天然飲品。其性味甘寒，能清心肺胃之火，有清熱豁痰、定驚利竅之功效，主要用于治中風痰迷，驚癇癲狂，痰熱咳喘，痰稠胸悶等癥［3］。竹瀝半夏為半夏或法半夏，竹瀝拌透陰干而得。經(jīng)竹瀝炮制過的半夏溫燥之性大減，使藥性由熱性轉(zhuǎn)為寒性。適于胃熱嘔吐，肺熱痰黃稠粘，痰熱內(nèi)閉中風不語。本文通過對小鼠灌胃給予生半夏、竹瀝半夏的水煎液，測定小鼠的生理生化指標來衡量生半夏和竹瀝半夏的寒熱之藥性，為以后生半夏和竹瀝半夏在臨床中應用提供科學的依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

昆明種小鼠45只，SPF級，雄性，體重18～22g，由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號:SCXK(陜)20070001。

1.2 儀器

DT－1TB電子體溫計 (上海醫(yī)用儀表廠);自制耗氧量檢測裝置 (密閉容器、膠管、移液管、燒杯);秒表;UV－2000型紫外可見分光光度計(UV1102);臺式低溫離心機 (530 Saite XiangYi);HH－2電熱恒溫水浴鍋 (國華電器有限公司);微量移液器;渦旋混勻器。

1.3 試藥

ATP酶測試盒、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、蛋白標準 (均購自南京建成生物工程研究所)，凡士林 (南京金陵石油化工公司化工一廠)，醫(yī)用鈉石灰 (北京德爾利鈉石灰廠)，蒸餾水，生半夏購自安徽新興中藥材飲片有限公司 (批號20100401)，經(jīng)陜西中醫(yī)學院王繼濤高級實驗師鑒定為天南星科植物半夏 Pinellia ternate(Thunb.)Breit.的塊莖，鮮竹瀝 (江西民濟藥業(yè)有限公司)，竹瀝半夏 (自制)。

2 方法

2.1 藥物配置及給藥方法

藥物配置方法:(1)竹瀝半夏的制法:取凈半夏100g，用水浸泡至內(nèi)無干心，另取生姜切片25g煎湯，加白礬12.5g與半夏共煮至透心，取出，晾至半干，切薄片，干燥［4］。取姜半夏100g加鮮竹瀝12.5g拌勻，待吸盡，干燥［5］。 (2)實驗用試藥制備:取生半夏50g、竹瀝半夏50g，粉碎，將藥材粗粉分別置于圓底燒瓶中加10倍量水浸泡1h，煎煮兩次，每次2h，過濾，殘渣加8倍量水，煎煮1h，過濾，合并濾液，濃縮至200mL，即得。給藥方法:將小鼠隨機分為對照組 (CG)、生半夏組 (RP)、竹瀝半夏組 (RP－BVP)，每組15只。生半夏組、竹瀝半夏組按0.05g/10g小鼠灌胃給藥，對照組給予同等劑量蒸餾水，連續(xù)灌胃給藥11d。

2.2 檢測指標及方法［6］

2.2.1 一般指標

從分組當天起每日對小鼠體重稱重并記錄，每日記錄各組小鼠總飲水量、總進食量。

2.2.2 小鼠體溫測定

分別測量給藥前和給藥1h后的體溫。每天上午8時開始測量，將涂有凡士林的測溫探頭插入直腸約1.5cm，測量肛溫;各組動物平行交替進行測試。

2.2.3 耗氧量的測定

小鼠實驗前禁食18h。小鼠于檢測當日給藥后1h，用自制的簡易耗氧量測定裝置進行測定，記錄水柱上升2.5mL所需時間和6min水柱上升的高度，來粗略衡量6min內(nèi)小鼠的耗氧量。各組動物交替平行進行實驗。所得數(shù)據(jù)按體重折算為20g體重耗2.5mL O2所需時間，20g體重6min耗氧量。

2.2.4 小鼠肝組織ATP酶、總蛋白、臟器系數(shù)等生化指標的測定

實驗取材前一天晚8點小鼠禁食不禁水，次日上午灌胃給藥1h后，測完耗氧量后，處死小鼠，打開動物胸腔、腹腔，取出肝臟剔除脂肪組織及系膜等，稱量肝臟的重量，并記錄;取出肝臟后迅速放入－20℃冰箱保存?zhèn)溆谩０碅TP酶測試盒、考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、標準蛋白試劑盒說明書進行測定并計算;并計算臟器系數(shù)。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

對各組小鼠的飲水量、食量，用每組小鼠的平均值表示，進行粗略比較。其余數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差 ()表示，采用SPSS19.0軟件進行方差分析，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著，均具有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠的一般狀況檢測結(jié)果

由于受實驗條件限制，飲水量、進食量由整籠小鼠飲水量、進食量的平均值表示，粗略反映小鼠飲水量、食量的變化趨勢:與對照組比較，生半夏組小鼠飲水量有增加的趨勢，竹瀝半夏組小鼠飲水量有降低的趨勢;生半夏組、竹瀝半夏組小鼠進食量都有增加的趨勢;生半夏組、竹瀝半夏組小鼠體重差異均無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見圖1，表1。

圖1 生半夏和竹瀝半夏對小鼠的影響A 對飲水量的影響 B對進食量的影響

表1 生半夏和竹瀝半夏對小鼠體重的影響 ()

表1 生半夏和竹瀝半夏對小鼠體重的影響 ()

與對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01; 與生半夏組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

3.2 生半夏、竹瀝半夏對小鼠體溫的影響

實驗結(jié)果表明，與對照組比較，生半夏組在給藥初期，體溫有增加的趨勢，但是隨著給藥時間的延長，又趨于平衡與對照組沒有明顯的不同;竹瀝半夏組有體溫降低的趨勢，差異有顯著性意義 (P＜0.05);與生半夏組比較，竹瀝半夏組有體溫降低的趨勢，差異有顯著性意義 (P＜0.05)。結(jié)果見表2。

表2 生半夏、竹瀝半夏對小鼠體溫的影響 ()

表2 生半夏、竹瀝半夏對小鼠體溫的影響 ()

與對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01; 與生半夏組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

3.3 生半夏、竹瀝半夏對小鼠耗氧量的影響

實驗結(jié)果表明，①與對照組比較，20g體重的小鼠消耗2.5mL的氧氣所需的時間，生半夏組所需時間明顯縮短，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)，竹瀝半夏組所需時間明星縮短，差異有顯著性意義 (P＜0.05);與生半夏組比較，竹瀝半夏組耗時明顯增加，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)。②與對照組比較，20g體重6min消耗氧氣的量，生半夏組耗氧量有所增加，差異有顯著性意義 (P＜0.05)，竹瀝半夏組有耗氧量降低的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義;與生半夏組比較，竹瀝半夏組耗氧量明顯下降，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)。結(jié)果見表3。

表3 生半夏、竹瀝半夏對小鼠耗氧量的影響 ()

表3 生半夏、竹瀝半夏對小鼠耗氧量的影響 ()

與對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01; 與生半夏比較，△P＜0.05，△△P ＜0.01。

3.4 生半夏、竹瀝半夏對小鼠組織生化指標的影響 (表4)

表4 生半夏、竹瀝半夏對小鼠生化指標的影響 ()

表4 生半夏、竹瀝半夏對小鼠生化指標的影響 ()

注: 與對照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01; 與生半夏組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

3.4.1 生半夏、竹瀝半夏對小鼠肝臟NaK－ATPase的影響

由表4可知，與對照組比較，生半夏組NaKATPase活力增強，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)，竹瀝半夏組NaK－ATPase活力有降低的趨勢，但無統(tǒng)計學差異;與生半夏組比較，竹瀝半夏組NaK－ATPase活力明顯降低，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)。

3.4.2 生半夏、竹瀝半夏對小鼠肝臟總蛋白含量的影響

由表4可知，與對照組比較，生半夏組總蛋白含量明顯增加，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)，竹瀝半夏組總蛋白含量有降低的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義;與生半夏組比較，竹瀝半夏組總蛋白含量明顯降低，差異有非常顯著性意義 (P＜0.01)。

3.4.3 生半夏、竹瀝半夏對小鼠臟器系數(shù)的影響

由表4可知，與對照組比較，生半夏組和竹瀝半夏組都有肝臟指數(shù)增加的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義。

4 討論

從本實驗結(jié)果可以看出，生半夏和竹瀝半夏的寒熱之性與小鼠的飲水量、體溫、耗氧量、肝臟總蛋白含量、肝臟NaK－ATPase活力具有一定的相關(guān)關(guān)系，說明生半夏和竹瀝半夏的寒熱之性可通過對機體能量代謝影響的不同得以體現(xiàn)。具體來說，生半夏的熱性可使小鼠的飲水量、體溫、耗氧量、Nak－ATPase活力、肝臟組織總蛋白含量增加，提示生半夏的熱性可使動物的能量代謝水平得到提升;竹瀝半夏的寒性可使小鼠的飲水量、體溫、耗氧量、Nak－ATPase活力、肝臟組織總蛋白含量降低;提示竹瀝半夏的寒性可使動物的能量代謝水平得到抑制。實驗結(jié)果與傳統(tǒng)的“竹瀝能轉(zhuǎn)半夏之溫熱之性而為寒涼”的理論相一致。

一般認為，中藥經(jīng)過炮制可以調(diào)整原藥性味或改變原藥的偏性，使其治療作用也相應的發(fā)生變化。本實驗通過測量生半夏和竹瀝半夏對小鼠的生理生化指標的影響，可以初步斷定并驗證，經(jīng)過具有寒涼之性的竹瀝炮制過的半夏，其溫熱之性得以緩解，使生半夏的溫熱之性轉(zhuǎn)為寒涼之性。這使半夏的功效得以有效的發(fā)揮，使其臨床應用的范圍進一步擴大。

中藥的寒熱之性與中藥本身所含的物質(zhì)基礎有一定的相關(guān)性［7－9］。生半夏熱性與其含有熱性類化合物所具有的共性物質(zhì)基礎有一定的關(guān)系。但是有關(guān)其熱性與具體哪類化學成分有關(guān)，還有待于進一步的研究。而生半夏經(jīng)過竹瀝炮制后的熱性轉(zhuǎn)為寒性是不是與其化學成的改變有一定的聯(lián)系，目前還不清楚，這方面的研究還有待于進一步的深入研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2010:110.

［2］清·黃奭輯.神農(nóng)本草經(jīng) ［M］.北京:中醫(yī)古籍出版社，1982:265.

［3］高學敏.中藥學 ［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:1238－1239.

［4］龔千鋒.中藥炮制學 ［M］.中國中醫(yī)藥出版社，2007:1.

［5］上海衛(wèi)生局.上海市中藥飲片炮制規(guī)范 ［M］.上?？茖W技術(shù)出版社，1983:5.

［6］趙興業(yè).中藥寒熱性生理生化評價指標的初步研究［D］.北京中醫(yī)藥大學，2005.

［7］周正禮，李峰，王文炳，等.中藥藥性與物質(zhì)基礎關(guān)系的研究進展 ［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2010，37(4):758－759.

［8］王振國，王鵬，歐陽兵.中藥物質(zhì)成分與寒熱藥性相關(guān)性研究的方法學框架 ［J］.浙江中醫(yī)藥大學學報，2009，33(5):734－737.

［9］楊波.中藥寒熱藥性的實驗評價方法及物質(zhì)基礎研究［D］.西北大學.2010.