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    安絡(luò)化纖丸預(yù)防大鼠酒精性脂肪肝形成的作用

    2012-07-21 07:45:18相妍笑婁海燕王菊英于曉彥馮一民張岫美
    中國(guó)生化藥物雜志 2012年5期
    關(guān)鍵詞:化纖變性酒精性

    相妍笑,婁海燕,王菊英,于曉彥,馮一民,張岫美

    (山東大學(xué) 醫(yī)學(xué)院 藥理學(xué)研究所,山東 濟(jì)南 250012)

    酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)是酒精性肝病的一種,處于酒精性肝病的早期,長(zhǎng)期過量的酒精攝入會(huì)導(dǎo)致不同程度的肝損傷并逐步向肝纖維化,肝硬化發(fā)展[1],其防治已經(jīng)成為一個(gè)重要的課題。

    酒為濕熱之品,長(zhǎng)期過量飲酒形成濕毒有毒之邪,蘊(yùn)結(jié)中焦,傷及脾胃,連及膽肝。安絡(luò)化纖丸為中藥復(fù)方制劑,主要成分為地黃、三七、水蛭、牛黃、地龍等,具有疏通脈絡(luò)、健脾養(yǎng)肝、涼血活血、軟堅(jiān)散結(jié)、清除肝內(nèi)淤積的作用。

    藥理學(xué)研究證明,安絡(luò)化纖丸具有降低轉(zhuǎn)氨酶、保肝、抗肝纖維化等作用[2-3],臨床用于治療乙型肝炎和肝硬化等。我們前期的實(shí)驗(yàn)也已經(jīng)證明安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠有明顯的治療作用[4]。本文以灌服過量酒精制備大鼠AFLD模型,觀察安絡(luò)化纖丸對(duì)其的預(yù)防作用。

    1 材料

    安絡(luò)化纖丸,森隆藥業(yè)有限公司提供,批號(hào):2007-12-001;美他多辛,山東齊都藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào):070104;天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST/GOT)試劑盒、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT/GPT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、堿性磷酸酶(AKP)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)測(cè)定試劑盒購(gòu)自溫州東甌津瑪生物科技有限公司;北京二鍋頭酒,北京鑫帝酒業(yè)開發(fā)有限公司,GB10781.2-89,酒精體積分?jǐn)?shù)56%,用時(shí)加水稀釋。

    Wistar大鼠,雄性,體重180~220 g,合格證號(hào):SCXK(魯)2003004,山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    2 方法

    2.1 動(dòng)物分組及給藥

    Wistar大鼠60只,實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d,隨機(jī)分為正常組10只和造模50只;正常組大鼠普通飼料喂養(yǎng),以水10mL/kg灌胃代替藥物,自由飲水;AFLD模型大鼠隨機(jī)分5組:AFLD模型組、安絡(luò)化纖丸高、中、低劑量組、美他多辛陽性對(duì)照組,每組10只。安絡(luò)化纖丸高、中、低劑量組在實(shí)驗(yàn)開始后分別灌服2 160,1 080及540 mg/kg安絡(luò)化纖丸混懸液;美他多辛組灌服135 mg/kg美他多辛溶液;AFLD模型組每天灌服水10 mL/kg。每天1次,連續(xù)灌胃4周。

    2.2 大鼠AFLD模型的建立

    AFLD模型組大鼠自實(shí)驗(yàn)第5周的第1~3天按15 mL/kg給予含15%乙醇的二鍋頭白酒灌胃,第4天起按15 mL/kg給予含52%乙醇的二鍋頭白酒灌胃,每天上午1次,藥物于下午灌服,連續(xù)6周[4-5]。同時(shí)喂自制飼料(配方:普通飼料與豬油的比例為85∶15,同時(shí)每1 kg飼料加入硫酸亞鐵15 g),自由飲水。

    2.3 標(biāo)本制備

    連續(xù)灌胃給藥10周后,實(shí)驗(yàn)前一晚禁食不禁水,并稱重。次日以1.5%戊巴比妥鈉溶液2 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠,下腔靜脈取血5 mL,3 000 r/min離心30 min,取血清備用;取出肝臟,稱重后,取肝左葉用4%中性甲醛溶液固定進(jìn)行病理學(xué)檢查,右葉肝用4℃生理鹽水制備成10%肝勻漿(冰浴,1 000 r/min,1 min),離心取上清-20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

    2.4 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

    測(cè)定肝指數(shù),即肝重與體重之比值;測(cè)定ALT,AST,AKP和TG等血液生化指標(biāo);測(cè)定TG,MDA和SOD等肝組織生化指標(biāo);肝組織病理學(xué)檢查通過HE染色觀察肝臟脂肪變性的程度。

    3 結(jié)果

    3.1 肝組織病理學(xué)改變

    正常對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)正常,肝小葉清晰,中央靜脈位于肝小葉中心,肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈單層放射狀排列。肝細(xì)胞胞漿豐富,細(xì)胞核圓形,大小正常,位于細(xì)胞中央,無炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

    模型組超過1/2的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大小不一的脂滴空泡(中、重度脂肪變性),肝血竇擴(kuò)張充血,間質(zhì)內(nèi)可見少量淋巴細(xì)胞等慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

    安絡(luò)化纖丸高劑量組肝細(xì)胞脂肪變性明顯改善,僅少數(shù)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)查見少量脂滴空泡,肝血竇擴(kuò)張;中劑量組肝細(xì)胞脂肪變性明顯改善,僅少數(shù)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)查見少量脂滴空泡,肝血竇擴(kuò)張;低劑量組肝細(xì)胞脂肪變性改善,少于1/3的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)查見脂滴空泡,肝血竇擴(kuò)張,間質(zhì)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

    美他多辛陽性對(duì)照組肝細(xì)胞脂肪變性有改善,僅少量肝細(xì)胞胞漿內(nèi)查見少量脂滴空泡。

    總之,模型組出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞變性(中~重度),安絡(luò)化纖丸高、中劑量組對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性明顯改善,尤其是高劑量組。低劑量組對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性亦有改善,但不如中、高劑量組明顯。美他多辛陽性對(duì)照組對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性有改善。見圖1。

    3.2 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠肝指數(shù)及血清ALT、AST水平的影響

    結(jié)果見表1。與正常組相比,AFLD模型組肝指數(shù)及血清ALT和AST水平明顯升高,顯示AFLD模型制備成功。與AFLD模型組相比,安絡(luò)化纖丸各預(yù)防組及美他多辛組明顯降低AFLD大鼠的肝指數(shù)及血清ALT、AST水平。

    3.3 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠血清AKP、TG及肝組織TG含量的影響

    結(jié)果見表2。與正常組相比,AFLD模型組大鼠血清AKP、TG含量,肝組織TG含量均明顯升高(P<0.05或0.01),說明模型制備成功。與 AFLD 模型組相比,安絡(luò)化纖丸各預(yù)防組及美他多辛組可不同程度地降低AFLD大鼠血清AKP、TG及肝組織TG含量。

    3.4 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠肝組織MDA及SOD含量的影響

    結(jié)果見表2。與正常對(duì)照組相比,AFLD模型組MDA水平明顯升高,SOD活性降低。與AFLD模型組相比,安絡(luò)化纖丸各預(yù)防組和美他多辛均可明顯降A(chǔ)FLD大鼠肝組織MDA含量,提高SOD活性,與

    圖1 肝組織病理學(xué)檢查(HE染色)(200×)Fig.1 Liver histopathological examination(HE staining)(200 × )

    表1 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠肝指數(shù)及血清ALT、AST水平的影響(± s,n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s,n=9)

    表1 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠肝指數(shù)及血清ALT、AST水平的影響(± s,n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s,n=9)

    組 別 劑量/(mg/kg) 肝指數(shù)/% ALT/(u/L) AST/(u/L)正常對(duì)照組 -0.030 ±0.002 23.20 ±4.16 36.10 ±2.93 AFLD 模型組 - 0.046±0.0032 35.50±2.721 89.88±12.552安絡(luò)化纖丸組 2 160 0.034 ±0.0023 24.43 ±4.893 55.00 ±6.624 1 080 0.035 ±0.0043 26.00 ±4.903 68.27 ±8.383 540 0.038 ±0.0023 28.43 ±5.583 71.15 ±7.023美他多辛組 135 0.036 ±0.0033 24.63 ±4.504 56.88 ±11.754

    與正常對(duì)照組比較:1P <0.05,2P <0.01;與AFLD 模型組比較:3P <0.05,4P <0.05

    1P <0.05,2P <0.01 vs control group;3P <0.05,4P <0.01 vs AFLD model group

    表2 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠血清AKP、TG及肝組織TG、MDA及SOD含量的影響(± s,n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP,TG in serum and the content of TG,MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s,n=9)

    表2 安絡(luò)化纖丸對(duì)AFLD大鼠血清AKP、TG及肝組織TG、MDA及SOD含量的影響(± s,n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP,TG in serum and the content of TG,MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s,n=9)

    與正常對(duì)照組比較:1P <0.05,2P <0.01;與 AFLD 模型組比較:3P <0.05,4P <0.011P <0.05,2P <0.01 vs control group;3P <0.05,4P <0.01 vs AFLD model group

    組 別 劑量/(mg/kg)AKP/(金氏單位/100 mL)血清TG/(mmol/L)肝組織TG/(mmol/L)肝組織MDA/(nmol/mg prot)肝組織SOD/(u/mg prot)正常對(duì)照組 - 22.86±4.85 0.73±0.15 0.68±0.17 3.23±0.54 302.53 ±34.43脂肪肝模型組 - 41.13±5.632 1.54±0.252 1.34±0.301 4.72±1.041 202.83±27.852安絡(luò)化纖丸組 2 160 30.32 ±5.284 0.89 ±0.274 0.83 ±0.284 3.26 ±0.263 303.54 ±16.033 1 080 31.32 ±4.003 1.12 ±0.213 0.91 ±0.213 2.86 ±0.204 293.52 ±7.173 5 40 32.57 ±4.713 1.23 ±0.233 1.02 ±0.234 2.52 ±0.364 302.77 ±52.833美他多辛組 135 29.09 ±5.313 1.03 ±0.234 0.82 ±0.214 1.91 ±0.234 332.38 ±30.594

    AFLD模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    4 討論

    長(zhǎng)期的過度飲酒,通過乙醇本身和其衍生物乙醛,可使肝細(xì)胞反復(fù)發(fā)生脂肪變性、壞死和再生,而導(dǎo)致酒精性肝病。乙醛為高活性化合物,能干擾肝

    細(xì)胞多方面的功能,如影響線粒體對(duì)ATP的產(chǎn)生,蛋白質(zhì)的生物合成和排泌,損害微管,使蛋白、脂肪排泌障礙而在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積,導(dǎo)致AFLD。安絡(luò)化纖丸是純中藥制劑,根據(jù)疏通化纖機(jī)制,組方科學(xué)獨(dú)特,具有消除肝臟脂肪淤滯,改變肝臟微循環(huán),增加血流量,促使肝臟增生纖維結(jié)締組織吸收。改善肝細(xì)胞膜的通透性及代謝,從而從根本上恢復(fù)肝細(xì)胞的功能的作用。

    本研究發(fā)現(xiàn),大鼠AFLD形成的同時(shí),血清中ALT、AST的活性明顯增強(qiáng),而安絡(luò)化纖丸預(yù)防給藥后大鼠血清中ALT、AST的水平明顯低于模型組,而且呈較好的劑量相關(guān)性。應(yīng)用各種劑量的安絡(luò)化纖丸干預(yù)后,大鼠血清AKP、TG含量,大鼠肝組織TG含量較模型組明顯下降,表明安絡(luò)化纖丸可有效防治大鼠肝細(xì)胞的脂肪變性和肝臟損傷,促進(jìn)肝內(nèi)脂質(zhì)代謝。另外,安絡(luò)化纖丸還能夠顯著降低AFLD大鼠血清MDA含量,明顯增強(qiáng)AFLD大鼠SOD活性,說明安絡(luò)化纖丸對(duì)預(yù)防大鼠AFLD,阻止脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生有明顯的作用。

    [1]付 好,但自力,唐望先,等.全反式維甲酸對(duì)慢性酒精性肝損傷大鼠肝臟 TGF-β1、CTGF 和 Collal表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志,2006,14:179-183.

    [2]張岫美,張 斌,魏欣冰,等.安絡(luò)化纖丸對(duì)急慢性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)生化藥物雜志,1999,20(1):27-29.

    [3]魏欣冰,張岫美,張 斌,等.安絡(luò)化纖丸對(duì)免疫功能的影響[J].中國(guó)生化藥物雜志,2002,23(3):137-139.

    [4]相妍笑,婁海燕,張岫美,等.安絡(luò)化纖丸對(duì)大鼠酒精性脂肪肝的治療作用[J].中國(guó)生化藥物雜志,2011,32(6):440-443.

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