扶正固本膏對(duì)正常小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用

孫慶弟 王京昆 陸 瑛

1．云南省藥物研究所，云南 昆明 650101;2．昆明醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650101

扶正固本膏是中藥復(fù)方制劑，具有培元固本、扶正祛邪之功效，主治腎陽(yáng)不足。臨床用于腎陽(yáng)不足引起的腰膝酸軟、畏寒肢冷、神疲乏力、性欲減退、夜尿頻多等癥。本研究采用正常小鼠連續(xù)灌胃給予扶正固本膏15天，觀察其對(duì)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 供試品

扶正固本膏，棕褐色稠厚半流體，批號(hào)20091227，10－15天為一個(gè)療程。供試品輔料對(duì)照:棕黃色流體，批號(hào):20100201。由本所科研管理部提供;給藥時(shí)，高劑量組直接使用，低、中劑量組用滅菌純化水配成約0.34g/ml、0.68g/ml的藥液，使用前充分混勻。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重29～32g，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK(滇)2005－0008，發(fā)證單位:云南省科學(xué)技術(shù)廳。

1.3 環(huán)境條件

溫度范圍:20～26℃ (日溫差范圍≤4℃);濕度范圍:40%～70%;換氣次數(shù):10－15次/h;氣流速度:0.1－0.2m/s;壓強(qiáng)梯度:20Pa;空氣潔凈度:10000級(jí);氨濃度(動(dòng)態(tài)):0mg/m3;照明:12h:12h明暗交替;動(dòng)物照度:18Lx;工作照度:376Lx;噪音:52dB。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施檢測(cè)報(bào)告編號(hào):J201003031，檢測(cè)單位:云南省醫(yī)療器械檢定所。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證:SYXK(滇)2005－0001，發(fā)證單位:云南省科學(xué)技術(shù)廳。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 L104型電子分析天平，梅特勒－托利多儀器 (上海)有限公司;JJ2000型電子天平，常熟雙杰測(cè)試儀器廠;1500全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，芬蘭Thermo electron corporation。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法 用SPSS17.0 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料正態(tài)分布、方差齊用單因素方差分析，偏態(tài)分布或方差不齊用秩和檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以x±SD表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。

2 分組及劑量

用Excel進(jìn)行隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法，分為陰性對(duì)照組、輔料對(duì)照組、扶正固本膏低、中、高劑量組，每組10只，雌雄各半。陰性對(duì)照組給予滅菌純化水，輔料對(duì)照組給予扶正固本膏輔料，給藥組按6.8、13.6、27.2g/kg給予扶正固本膏，各組均按20ml/kg連續(xù)給藥15天。

3 方法與結(jié)果

SPF級(jí)昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、輔料對(duì)照組、扶正固本膏低、中、高劑量組，每組10只。陰性對(duì)照組給予滅菌純化水，輔料對(duì)照組給予扶正固本膏輔料，給藥組按6.8、13.6、27.2g/kg給予扶正固本膏，連續(xù)給藥15天。末次給藥60min，按0.1 ml/10 g小鼠尾靜脈注射20%印度墨水，分別于注射后2、12 min用毛細(xì)管于小鼠眼眶靜脈叢取血10ul置于2ml 0.1%NaCO3溶液中混勻，用1500全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)680 nm處測(cè)定吸光度 (A);頸椎脫臼處死小鼠取肝、脾、胸腺稱(chēng)質(zhì)量，按公式計(jì)算廓清指數(shù) (K)、吞噬系數(shù) (a)和臟器系數(shù)。K=(lgA1－lgA2)/(t2－t1)=(lgA1－lgA2)/10，α =K1/3×體質(zhì)量/(肝質(zhì)量+脾質(zhì)量)，臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量［1］。

表1 對(duì)小鼠體重的影響 (n=10)

表2 對(duì)小鼠免疫器官的影響 (n=10)

表3 對(duì)小鼠碳粒廓清的影響 (n=10)

表1顯示，連續(xù)灌胃給予小鼠扶正固本膏15天，對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響，各組動(dòng)物體重組間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05);表2顯示，中、高劑量組脾臟指數(shù)與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異 (P＜0.05/P＜0.01)，說(shuō)明扶正固本膏可增加小鼠脾臟指數(shù);表3顯示，低、中、高劑量組廓清指數(shù)及吞噬系數(shù)與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異 (P＜0.05/P＜0.01)，說(shuō)明扶正固本膏能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，加速碳粒的清除。

4 討論

隨著社會(huì)的發(fā)展，現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，人們面臨的壓力也日益沉重，激烈的社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)使人心理應(yīng)激明顯增多。先天原因，后天原因:藥誤、久病、七情所傷、房勞、飲食等多種因素導(dǎo)致人群出現(xiàn)腎陽(yáng)虛。

扶正固本膏具有培元固本、扶正祛邪之功效，主治腎陽(yáng)不足。臨床用于腎陽(yáng)不足引起的腰膝酸軟、畏寒肢冷、神疲乏力、性欲減退、夜尿頻多等癥。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎為先天之本，腎藏精是腎的主要生理功能之一。精是構(gòu)成人體的基本物質(zhì)，也是人體各種功能活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。精能化氣，腎精所化之氣稱(chēng)為“腎氣”。腎的精氣盛衰，關(guān)系到生殖和生長(zhǎng)發(fā)育的能力。故古代醫(yī)家認(rèn)為腎為五臟之本［2］。腎臟有病必影響其他臟腑之功能，反之臟腑有病，久必及腎。因此，腎氣盛衰決定著人體的健康狀況。腎氣充盛，則五臟六腑功能正常，人體正氣充盛則健康無(wú)?。?］。所謂正氣就是人體的功能活動(dòng)和對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，是抗病能力和康復(fù)能力，是機(jī)體識(shí)別和排除外源性異物維持自身生理平衡與穩(wěn)定的能力。而現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，人體的免疫功能表現(xiàn)為防御、自穩(wěn)、監(jiān)視3個(gè)方面。因此，正氣與現(xiàn)代免疫理論密切相關(guān)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎為先天之本，為正氣之根，說(shuō)明了腎與免疫功能關(guān)系更為密切。大量研究表明，腎虛患者常有免疫功能的紊亂，而補(bǔ)腎藥有一定的免疫調(diào)節(jié)作用［4］。

人體免疫是人體對(duì)外界的病原微生物等的防御機(jī)能，或者說(shuō)是防御系統(tǒng)。在正常情況下，它能夠保證人體不受外界病原微生物的侵害。通常說(shuō)的人體免疫力就是指人體的免疫系統(tǒng)抵御外來(lái)病原微生物等侵害的能力。在人體免疫力正常的情況下，人體自身能夠抵御相當(dāng)多的病菌的侵害，避免對(duì)人體造成損傷［5］。

機(jī)體的免疫系統(tǒng)是由非特異性免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫共同構(gòu)成的防御系統(tǒng)，它通過(guò)識(shí)別、吞噬、呈遞和分泌細(xì)胞因子或形成抗體來(lái)清除外來(lái)病原微生物和體內(nèi)的異常細(xì)胞，對(duì)于維護(hù)體內(nèi)環(huán)境具有十分重要的意義［6］。脾、胸腺是小鼠重要的免疫器官，觀察其質(zhì)量的變化，可以直接地反應(yīng)小鼠免疫功能的變化;碳粒廓清實(shí)驗(yàn)是通過(guò)靜脈注射一定大小的顆粒物質(zhì)，其迅速被肝、脾等器官內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬而使其在血漿濃度降低，從而可以了解整個(gè)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能［7］。

脾在胚胎期是重要的造血器官，出生后造血功能停止，但仍然是血細(xì)胞尤其是淋巴細(xì)胞的再循環(huán)場(chǎng)所，脾還是發(fā)生免疫應(yīng)答的重要基地。此外，脾還有兩個(gè)顯著的特點(diǎn):(1)產(chǎn)生抗體，脾富含B細(xì)胞和漿細(xì)胞，因此是全身最大的抗體產(chǎn)生器官，尤其是產(chǎn)生IgM和IgG，其數(shù)量對(duì)調(diào)節(jié)血清抗體水平起很大作用;(2)分泌體液因子，脾可以合成補(bǔ)體 (C5和C8等)和備解素等重要的免疫效應(yīng)分子。長(zhǎng)期以來(lái)人們對(duì)胸腺的功能不甚了解，直到60年代初Miller和Good分別用切除新生小鼠和家兔胸腺的辦法證明了胸腺的免疫功能。胸腺能訓(xùn)化T細(xì)胞、分泌胸腺激素、促進(jìn)肥大細(xì)胞發(fā)育、調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫平衡，維持自身的免疫穩(wěn)定性，是重要的中樞免疫器官，也是T淋巴細(xì)胞分化成熟的場(chǎng)所。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，扶正固本膏可增加正常小鼠脾臟質(zhì)量，能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，加速碳粒的清除。提示，扶正固本膏對(duì)小鼠體液免疫和非特異性免疫均有一定增強(qiáng)作用。

［1］岑曉江，侯思名等．海楓藤水煎液對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27(6)．

［2］沈自尹．從腎本質(zhì)研究到證本質(zhì)研究的思考與實(shí)踐［J］．上海中醫(yī)藥雜志，2000(4):44－47．

［3］顏亭祥，李震，陶漢華等．“勞倦過(guò)度房室不節(jié)”腎陽(yáng)虛模型小鼠免疫功能的觀察［J］．山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，31(1):79－81．

［4］魯珽，潘永明．抗衰老片對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎陽(yáng)虛小鼠免疫功能的影響［J］．甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28(2)．

［5］徐志毅．復(fù)方枸杞袋泡茶對(duì)免疫力低下小鼠免疫功能的影響［J］．臨床合理用藥，2011，4(3C):27．

［6］韓峰，陳建萍，謝婷等．益甘顆粒劑對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2004，15(4):124－126．

［7］吳克楓等．不同劑量環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠的免疫毒性研究［J］．貴州醫(yī)藥，1999，23(2):92－93．