水通道蛋白1在結(jié)直腸癌中的表達及其與臨床病理的相關(guān)性研究

中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院急診科 （沈陽110032） 王萌煒 賈 浩 吳 偉

水通道蛋白（aquaporin，AQP）屬于龐大的跨膜通道蛋白家族，于1988首次發(fā)現(xiàn)，到目前共發(fā)現(xiàn)14個家族成員［1］。AQPs的主要功能是調(diào)控細胞內(nèi)水的進出，使 細 胞 處 于 穩(wěn) 定 的 環(huán) 境。 最 近 研 究 發(fā) 現(xiàn)［2，3］，AQP1在乳腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、食管癌等組織中呈高表達，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。為此，本研究采用免疫組織化學(xué)方法對81例結(jié)直腸癌標(biāo)本及其癌旁正常結(jié)直腸組織中AQP1進行檢測，現(xiàn)報告如下。

對象與方法

1 一般資料 選擇2010年1月至2012年1月在我院醫(yī)院病理科確診為結(jié)直腸癌和癌旁正常結(jié)直腸組織各81例。結(jié)直腸癌患者男45例、女36例；年齡32～76歲，中位年齡54歲；Dukes分期：A期20例、B期24例、C期22例、D期15例；細胞分化程度；高分化27例、中分化42例、低分化12例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例。所有患者手術(shù)前均未進行任何治療。

2 試 劑 鼠抗人AQP1單克隆抗體購自美國ABCam公司，SP免疫組化試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司，DAB顯色液為Maixin產(chǎn)品，購自購自福州邁新生物公司。

3 免疫組織化學(xué)方法 切片經(jīng)脫蠟、脫水后，EDTA抗原修復(fù)，滴加3～5滴過氧化氫水，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，加100μl一抗4℃過夜后，PBS代替一抗作為陰性對照，順序滴加適量的聚合物增強劑及酶標(biāo)二抗，用新鮮配制的DAB溶液顯色。免疫組化結(jié)果在高倍鏡下隨機選擇具有代表性的10個視野，每個區(qū)域觀察100個腫瘤細胞，以胞膜或胞漿有棕黃色染色者為陽性細胞，陽性細胞比例＞30%為高表達，＜30%為低表達。

4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件采用SPSS13.0，組間北京采用χ2檢驗。

結(jié) 果

1 AQP1在結(jié)直腸癌及癌旁正常結(jié)直腸組織中的表達：結(jié)直腸癌組織AQP1的高表達率明顯高于癌旁正常結(jié)直腸組織（P＜0.05），見表1。

2 AQP1與結(jié)直腸癌Dukes分期的關(guān)系：結(jié)直腸癌組織AQP1的高表達率隨分期的增加不斷升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 AQP1在結(jié)直腸癌及癌旁正常結(jié)直腸組織中的表達

表2 AQP1與結(jié)直腸癌Dukes分期的關(guān)系

3 AQP1與結(jié)直腸癌細胞分化程度的關(guān)系：結(jié)直腸癌組織AQP1的高表達與細胞分化程度無明顯相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 AQP1與結(jié)直腸癌細胞分化程度的關(guān)系

4 AQP1與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系：結(jié)直腸癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者AQP1的高表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 AQP1與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

討 論

AQPs是一組糖蛋白，一級結(jié)構(gòu)為跨越細胞膜6次的單膚鏈，含有2個胞內(nèi)環(huán)和3個胞外環(huán)，其氨基和梭基末端位于細胞內(nèi)，B環(huán)和E環(huán)上的天冬酞胺－哺氨酸－丙氨酸基元的同源性最高，是AQPs家族成員的特征性結(jié)構(gòu)［4］。AQPs廣泛分布于機體內(nèi)，同一臟器可存在多種AQPs，而同一種AQP也可分布于多個臟器，多數(shù)選擇性分布在與體液有關(guān)的上皮細胞和協(xié)同跨細胞轉(zhuǎn)運的內(nèi)皮細胞中，以滿足各組織和細胞的需求［5］。AQPs的調(diào)節(jié)主要分為兩種［6］：一種是通過調(diào)節(jié)AQPs活性，磷酸化為cAMP依賴性，激活腺苷酸環(huán)化酶，活化蛋白激酶，從而催化AQPs上的絲氨酸磷酸化，從而增加膜對水的通透性；二是通過糖皮質(zhì)激素、皮生長因子，腫瘤壞死因子α等改變細胞上AQPs的含量來調(diào)節(jié)跨膜水流動。

近年來研究發(fā)現(xiàn)［7］，AQPs表達或功能改變不僅可對水分子的傳輸產(chǎn)生影響，而且還對細胞的生命活動至關(guān)重要。AQP1是第1個被鑒定出來的AQP，幾乎遍及全身各組織，對于水分迅速進入血管和淋巴管床，調(diào)控血管體積的流體靜壓和細胞間液體量與膠體膨脹壓間的平衡［8］。2010年李琦等［9］收集30例鼻咽部活檢標(biāo)本，分別采用免疫組織化學(xué)及實時熒光定量PCR檢測組織中AQP1的表達，并與VEGF的表達進行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中AQP1、VEGF的表達強于癌旁正常組織，且兩者存在一定相關(guān)性，推測AQP1在鼻咽癌中可能通過VEGF參與血管的生成，促進腫瘤生長、轉(zhuǎn)移。2012年毛春蓉等［10］采用免疫組織化學(xué)方法檢測上皮性卵巢良性、交界性、惡性腫瘤中AQP1的表達，發(fā)現(xiàn)AQP1表達明顯高于良性腫瘤者，卵巢癌患者中有腹水（尤其是腹水量≥1000ml）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者AQP1的表達明顯高于無腹水者，提示腹膜組織上AQP1的高表達與腫瘤盆腔擴散和腹水生成有關(guān)。張紅旭等［11］研究發(fā)現(xiàn)，通過siRNA抑制AQP1的表達，發(fā)現(xiàn)AQP1能夠明顯降低腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移，推測AQP1與腫瘤血管通透性增加具有密切關(guān)系，能夠促進腫瘤血管生成，增強腫瘤的侵襲能力。Zahn等［12］應(yīng)用實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、DNA微點陣分析、免疫組化法檢測潰瘍性結(jié)腸炎患者末端回腸和橫結(jié)腸粘膜AQPs的表達，發(fā)現(xiàn)橫結(jié)腸AQP1表達上升，提示AQPs在潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸粘膜上皮細胞過度表達，引起脫水和腸壁附著粘液層的高粘度，最終破壞粘液屏障和腸腔內(nèi)共生細菌持續(xù)攻擊粘膜。2012年趙子偉等［13］檢測55例結(jié)直腸癌組織及其對照的20例癌旁組織中的AQP1表達，發(fā)現(xiàn)AQP1能夠誘發(fā)的局部組織缺氧會促進HIF－1α的局部表達，促進腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織AQP1的高表達率明顯高于癌旁正常結(jié)直腸組織，并且AQP1的表達與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著相關(guān)性。

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