阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者腭咽組織中IL－6的表達(dá)及意義

西北大學(xué)醫(yī)院（西安710069） 張曉斌 趙繼元

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）是指睡眠時(shí)上氣道塌陷阻塞引起呼吸暫停和低通氣，通常伴有打鼾、睡眠結(jié)構(gòu)紊亂，頻繁發(fā)生血氧飽和度下降，白天嗜睡、注意力不集中等病癥，并可能導(dǎo)致高血壓、冠心病、Ⅱ型糖尿病等多器官多系統(tǒng)損害［1］。據(jù)研究，OSAHS能夠引起城市公交司機(jī)的情緒低落，從而導(dǎo)致惡性交通事故的發(fā)生［2］。其在世界范圍內(nèi)的患病率估計(jì)為2%～10%［3］。OSAHS的病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今仍未完全明了。本實(shí)驗(yàn)從組織層面出發(fā)，試圖揭示IL－6在OSAHS的發(fā)生、發(fā)展中所扮演的重要角色。

資料與方法

1 一般資料 選取西安交通大學(xué)第一、二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科2010年10月～2011年5月手術(shù)治療的36例OSAHS患者作為實(shí)驗(yàn)組，其中男性34例，女性2例，42～57歲，平均48.12±5.81歲，平均體重指數(shù)（BMI）29.23±1.86，平均睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）32.78±6.23；所有患者均行多導(dǎo)睡眠監(jiān)測(cè)（PSG），符合 OSAHS的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。另外選擇同期在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科住院手術(shù)治療的20例慢性扁桃體炎患者作為對(duì)照組，其中男性19例，女性1例，38～55歲，平均45.32±6.28歲，平均體重指數(shù)（BMI）27.58±3.46，平均睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）2.53±1.24；所有患者均無睡眠時(shí)打鼾、憋氣等臨床病史，并經(jīng)PSG監(jiān)測(cè)排除OSAHS診斷。兩組患者性別、年齡、體重指數(shù)均無顯著性差異（P ﹥0.05），AHI有顯著性差異（P ﹤0.01）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 取材：實(shí)驗(yàn)組：UPPP術(shù)后可見切除的腭咽軟組織肥厚、松弛，懸雍垂水腫、肥大，將該組織放入事先準(zhǔn)備好的裝有15%甲醛溶液的廣口瓶內(nèi)，加蓋固定48h，倒掉甲醛溶液，加入自來水浸泡24h（其間換2～3次水），倒掉自來水，加入80%的酒精，待用。對(duì)照組：所有受試者在局麻下行扁桃體摘除術(shù)時(shí)取其少許扁桃體周圍組織作為研究對(duì)象，然后固定標(biāo)本（過程同上）。

2.2 免疫組化染色：石蠟包埋，6mm厚度切片；常規(guī)脫蠟，乙醇梯度水化；蒸餾水沖洗，PBS液浸泡5min；抗原修復(fù)后PBS液漂洗；3%H2O2去離子水孵育15min；滴加試劑A室溫孵育15min，傾去，勿洗；滴加一抗于組織上，4℃過夜；PBS液沖洗后滴加試劑B，37℃孵育15min；PBS液沖洗后滴加試劑C，37℃孵育15min；PBS液沖洗后DAB顯色3～8min；自來水沖洗，梯度酒精脫水后二甲苯透明浸泡5min左右；中性塑膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。每批均設(shè)嚴(yán)格的陽性及陰性對(duì)照，IL－6多克隆抗體，DAB顯色試劑盒及SP免疫組化試劑盒均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

2.3 圖像分析：免疫組化染色結(jié)果采用Gel Doc 2000圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析，用平均光密度值（AOD）表示。

結(jié) 果

1 IL－6免疫組化染色觀察結(jié)果 IL－6在 OSAHS組及對(duì)照組腭咽軟組織的粘膜層、粘膜下小血管壁和部分小唾液腺腺泡周圍均有陽性表達(dá)，而IL－6在OSAHS組呈高表達(dá)。圖像及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示兩組表達(dá)量有顯著性差異（P＜0.05），見附表。

附表 IL－6免疫組化染色結(jié)果［平均光密度值（AOD），（ˉx±s）］

2 OSAHS組IL－6與睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）之間的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析后表明：IL－6與 AHI呈顯著正相關(guān)（r＝＋0.818，P＜0.001）。

討 論

OSAHS是一種嚴(yán)重危害人類健康，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量和危及生命的睡眠呼吸障礙性疾病，現(xiàn)已引起各國學(xué)者的廣泛關(guān)注。近年來，隨著對(duì)OSAHS研究的不斷深入，各種細(xì)胞因子逐漸成為人們的研究熱點(diǎn)，IL－6就是其中最具代表意義的一種細(xì)胞因子。

IL－6是由單核／巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生，近年來發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞也可以分泌IL－6。它是一種多功能細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，在機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、腫瘤免疫以及造血調(diào)控中均起重要作用，是炎癥細(xì)胞因子家族中的關(guān)鍵成分，與組織損傷以及動(dòng)脈壁炎癥反應(yīng)關(guān)系密切。目前許多研究發(fā)現(xiàn)OSAHS患者存在高IL－6血癥，且認(rèn)為OSAHS可能是IL－6分泌異常的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。但Kohler［4］等研究后卻發(fā)現(xiàn)IL－6等炎性因子似乎與OSAHS關(guān)系不大，亦不受經(jīng)鼻持續(xù)正壓通氣（nCPAP）的影響。由此可見IL－6與OSAHS的關(guān)系研究尚無定論，且以上研究均是在血液層面開展的，缺乏組織層面的研究。本實(shí)驗(yàn)充分匹配了性別、年齡、BMI等混雜因素后，發(fā)現(xiàn)IL－6在OSAHS患者腭咽組織中較對(duì)照組明顯呈高表達(dá)。且發(fā)現(xiàn)在OSAHS組IL－6和AHI呈顯著正相關(guān)，即隨著病情程度的加重IL－6的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。

OSAHS患者腭咽軟組織中IL－6呈高表達(dá)的具體機(jī)制尚不清楚，考慮可能與下列因素有關(guān)：①OSAHS患者夜間睡眠時(shí)反復(fù)出現(xiàn)呼吸暫停和低通氣，導(dǎo)致低氧血癥和高碳酸血癥，使得交感神經(jīng)興奮性增高，血中兒茶酚胺類物質(zhì)增多，而IL－6的產(chǎn)生受兒茶酚胺類物質(zhì)的調(diào)節(jié)，因此出現(xiàn)了IL－6在OSAHS患者腭咽軟組織中的高表達(dá)。②缺氧負(fù)荷導(dǎo)致了炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生增多［5］。缺氧可改變中性粒細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)而使其變形性下降，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞在肺內(nèi)大量聚集而被激活，它可釋放大量活性氧，成為肺內(nèi)氧化應(yīng)激的主要來源，進(jìn)而導(dǎo)致IL－6在OSAHS患者腭咽軟組織的高表達(dá)。③睡眠質(zhì)量對(duì)IL－6的分泌存在影響。OSAHS患者夜間睡眠中反復(fù)出現(xiàn)微覺醒和睡眠剝奪，從而導(dǎo)致睡眠質(zhì)量的明顯下降。而IL－6是睡眠的主要介導(dǎo)者，睡眠質(zhì)量和IL－6的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)［6］。④OSAHS患者多伴有肥胖和脂質(zhì)代謝紊亂，而脂肪細(xì)胞可自身分泌和刺激IL－6的分泌，從而引起其在組織里的高表達(dá)。上述因素中，缺氧是引起IL－6在OSAHS患者腭咽組織中高表達(dá)的主要原因，因此抗氧化治療可降低其在組織里的表達(dá)水平。

綜上所述，IL－6在OSAHS患者腭咽組織中呈高表達(dá)，提示OSAHS患者體內(nèi)可能存在炎性病理反應(yīng)。IL－6和AHI呈正相關(guān)，因此其在腭咽組織的表達(dá)情況可以作為衡量OSAHS患者病情嚴(yán)重程度的新指標(biāo)。

［1］ 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會(huì)咽喉學(xué)組.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診斷和外科治療指南［J］.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2009，44（2）：95－96.

［2］ Ruberto M，Liotti F.Obstructive Sleep Apnoea Syndrome（OSAS）and mood disorders in a population of public transport drivers［J］.Mlavoro Edicinadel，2011，102（2）：201－207.

［3］ Lam，Jamie C M，Sharma S K，Lam B.Obstructive sleep apnoea：definitions，epidemiology and natural history［J］.India J Med Res，2010，131：165－70.

［4］ Kohler M，Ayers L，Pepperell J C，etal.Effects of continuous positive airway pressure on systemic inflammation in patients with moderate to severe obstructive sleep apnoea：arandomized controlled trial［J］.Thorax，2009，64，（1）：67－73.

［5］ Tamaki S，Yamauchi M，F(xiàn)ukuoka A，etal.Production of inflammatory mediators by monocytes in patients with obstructive sleep apnea syndrome［J］.Intern Med，2009，48（15）：1255－1262.

［6］ Mills PD，Von Kanel，Noman D，etal.Inflammation and sleep in healthy individuals［J］.Sleep，2007，30（6）：729－735.