膽結(jié)石患者外周血T淋巴細(xì)胞的變化及意義

李 平，葉 軍，張立新，丁小平，陳靜波，欒正云

(泰州市人民醫(yī)院普外科，江蘇 泰州 225300)

膽結(jié)石是一種常見病，可發(fā)生于膽囊、肝內(nèi)膽管或膽總管。其發(fā)病因素與種族、遺傳、地理、飲食等因素而不同[1-3]。細(xì)胞免疫功能在人體抗感染及內(nèi)環(huán)境自身穩(wěn)定中具有極其重要的作用。膽結(jié)石患者細(xì)胞免疫功能有顯著性變化，其局部病理改變與外周血T細(xì)胞的變化有明顯關(guān)系，我們對90例膽結(jié)石患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行分析，以了解膽結(jié)石患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 非結(jié)石性膽囊炎23例、膽結(jié)石急性發(fā)作49例均來源于我院2011年6～12月門診及住院患者。其中膽囊炎組男14例，女9例，平均(37.8±19.3)歲；膽結(jié)石急性組男28例，女21例，平均(32.5±11.7)歲。正常對照組31例、膽結(jié)石未發(fā)作41例均來源于我院體檢中心。其中正常對照組男22例，女9例，平均(35.6±13.6)歲；膽結(jié)石未發(fā)作組男26例，女15例，平均(34.3±14.1)歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器 FACSCalibur流式細(xì)胞儀 美國BD公司產(chǎn)品，用CELLQuest軟件(BD公司)獲取和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。鞘液用Systmex公司的Cellpack血細(xì)胞稀釋液。

1.2.2試劑 CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC(Cat No：340499t)由BD公司提供。

1.2.3 流式細(xì)胞儀標(biāo)本處理 所有受試者均于當(dāng)天抽取外周靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，標(biāo)本在6 h之內(nèi)測定。將試管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD-APC 20 μl，將標(biāo)本充分混勻，加50 μl標(biāo)本，震蕩器上充分混勻，避光放置15 min；加入溶血素2 ml，充分震蕩，避光放置10 min。1 500 r/min離心5 min棄上清，加入生理鹽水2 ml震蕩，1 500 r/min離心5 min棄上清，加入生理鹽水100μl，充分震蕩混勻，待測。

1.2.4 流式細(xì)胞儀器設(shè)置及數(shù)據(jù)分析 用FACSComp調(diào)整儀器FSC、SSC、FL1、FL2、FL3、FL4的電壓及補(bǔ)償。用CELLQuest軟件獲取20 000個淋巴細(xì)胞，分析CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SigmaPlot12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組樣本間采用t檢驗(yàn)，三組樣本間比較采用One Way ANOVA Rank Sum Test分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石急性組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T細(xì)胞比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.597，P=0.542，P=0.705)；與正常對照組比較，急性組、未發(fā)作組CD3+T細(xì)胞差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.611，P<0.01；t=7.022，P<0.01)；膽結(jié)石急性組、膽結(jié)石未發(fā)作組CD3+CD8+T細(xì)胞差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.823，P<0.01；t=2.700，P=0.008)；膽結(jié)石急性組、膽結(jié)石未發(fā)作組CD4/CD8細(xì)胞差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.611，P=0.110；t=2.207，P=0.058)；膽結(jié)石急性組和膽結(jié)石未發(fā)作組比較CD3+、CD3+CD8+T差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.896，P<0.01；t=7.181，P<0.01)，CD4/CD8比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.229，P<0.01)，見表1。

表1 正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石組T淋巴細(xì)胞亞群的比較（±s）

表1 正常對照組、膽囊炎組、膽結(jié)石組T淋巴細(xì)胞亞群的比較（±s）

注：與正常對照組比較，#P<0.01；與正常對照組比較，*P<0.01；與急性組比較，△P<0.01。

項(xiàng)目 例數(shù)CD3+T細(xì)胞CD3+CD4+T細(xì)胞CD3+CD8+T細(xì)胞正常對照膽囊炎組膽結(jié)石組膽結(jié)石急性組膽結(jié)石未發(fā)作組31 23 90 49 41 70.71±5.75 71.61±9.69 69.70±9.08 76.44±5.11#61.66±5.51#△37.23±5.73 37.73±9.37 36.18±6.38 37.05±6.86 35.13±5.65 28.40±4.15 30.44±13.21 29.72±9.52 34.64±9.17#23.83±5.95*△

3 討論

白細(xì)胞是人體的免疫細(xì)胞，其通過不同方式、不同機(jī)制消滅病原體，消除過敏原和產(chǎn)生免疫反應(yīng)、產(chǎn)生抗體。白細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)特征可分為粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，它不僅具有識別抗原和排除抗原能力，而且對免疫應(yīng)答起重要調(diào)節(jié)作用。其主要包括T淋巴細(xì)胞(CD3+)、B淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞中包括誘導(dǎo)性/輔助性T細(xì)胞(CD3+CD4+)和抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD3+CD8+)。CD3+CD4+T細(xì)胞為免疫應(yīng)答中的主要反應(yīng)細(xì)胞，CD3+CD8+T細(xì)胞可對靶細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，同時(shí)對CD3+CD4+T細(xì)胞具有調(diào)節(jié)性抑制作用。CD3+CD4+T細(xì)胞與CD3+CD8+T細(xì)胞的作用相互平衡，導(dǎo)致正常免疫應(yīng)答。CD3+CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的失平衡導(dǎo)致免疫病理的發(fā)生。

膽結(jié)石的病因迄今尚未完全明了，一般認(rèn)為該病是多種因素綜合作用的結(jié)果[4-5]。周玉寶等[6]報(bào)道在正常膽囊組織中未見免疫復(fù)合物(IC)，在非結(jié)石性慢性膽囊炎中有l(wèi)例有IC沉積，而83%的膽囊結(jié)石患者可見膽囊膜基底部有IC沉積。IC在損傷基底膜處的沉積以及膽囊結(jié)石組的黏膜損傷更為嚴(yán)重，提示膽石病(尤其膽囊結(jié)石)發(fā)生在膽囊的病理改變不同于普通的慢性炎癥，可能有體液免疫應(yīng)答的參與[7-8]。肝膽管結(jié)石時(shí)，肝匯管區(qū)的T細(xì)胞明顯高于正常，并大量圍繞在小膽管、動脈、靜脈周圍，提示細(xì)胞免疫反應(yīng)介入了該病的病理過程。

結(jié)石的產(chǎn)生會出現(xiàn)長期的炎癥刺激，膽道引流不暢及細(xì)菌毒素的作用，使膽道上皮細(xì)胞的抗原組分暴露，加之變性的膠原組織作用，使T淋巴細(xì)胞參與炎癥免疫應(yīng)答。這些T淋巴細(xì)胞一部分在炎癥局部參與炎癥反應(yīng)，另一部分參與全身血流循環(huán)。由于參加淋巴細(xì)胞再循環(huán)的細(xì)胞大多為T淋巴細(xì)胞，因此血中以T淋巴細(xì)胞為主活化的淋巴細(xì)胞以及記憶細(xì)胞順淋巴再循環(huán)再次進(jìn)入肝組織局部，再次增殖、分化變?yōu)樾?yīng)細(xì)胞，加重局部炎癥反應(yīng)。不斷的炎癥刺激，使外周血中活化的并具增殖能力的T淋巴細(xì)胞持續(xù)增高，形成惡性循環(huán)導(dǎo)致膽結(jié)石患者組織局部的病變不斷加重。我們對23例非結(jié)石性膽囊炎、90例膽結(jié)石患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群分析顯示，膽囊炎和膽結(jié)石患者外周血中T淋巴細(xì)胞各種亞群組份與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但膽結(jié)石未發(fā)作組CD3+、CD3+CD8+T細(xì)胞均顯著低于正常對照組，而急性組CD3+、CD3+CD8+T細(xì)胞均顯著高于正常對照組及慢性組。可能是結(jié)石未發(fā)作組，長期的慢性炎癥狀態(tài)，使T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞長期募集到炎癥部位，使機(jī)體循環(huán)的CD3+CD8+T細(xì)胞減少。而在結(jié)石急性期，機(jī)體應(yīng)激性的使CD3+CD8+T細(xì)胞升高，免疫應(yīng)答增強(qiáng)，從而加重炎癥的狀態(tài)。提示外周血中CD3+CD8+T細(xì)胞對膽結(jié)石患者炎癥狀態(tài)起重要作用，可能直接影響患者的臨床表現(xiàn)，通過測定膽結(jié)石患者外周血循環(huán)可了解病變局部的免疫反應(yīng)和病理改變的趨勢。

[1] 莊 勛,李立明.膽石癥危險(xiǎn)因素的流行病學(xué)研究[J].中華流行病學(xué)雜志,1999,20(3):245-247.

[2] Jakubik JJ,Saifuddin M,Takefman DM,et al.Immune complexes containing human immunodeficiency virus type 1 primary isolates bind to lymphoid tissue B lymphocytes and are infectious for T lymphocytes[J].J Virol,2000,74(1):552-555.

[3] Gorgani NN,Altin JG,Parish CR.Histidine-rich glycoprotein prevents the formation of insoluble immune complexes by rheumatoid factor[J].Immunology,1999,98(3):456-463.

[4] Cipolletta L,Costamagna G,Bianco MA,et al.Endoscopic mechanical lithotripsy of difficult common bile duct stones[J].Br J Surg,1997,84(10):1407-1409.

[5] Cheung MT.Postoperative choledochoscopic removal of intrahepatic stones via a T tube tract[J].Br J Surg,1997,84(9):1224-1228.

[6] 周玉寶,許昌泰,潘伯榮.膽石癥手術(shù)患者CIC、Ig、T淋巴細(xì)胞亞群和膽石中細(xì)菌感染及IgG型IC變化[J].中國誤診學(xué)雜志,2001,1(5):654-656.

[7] 方馳華,楊繼震.膽囊結(jié)石需氧菌和厭氧菌分子生物學(xué)研究及意義[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1998,19(6):681-690.

[8] Buckland J,Pennington DJ,Bruno L,et al.Co-ordination of the expression of the protein tyrosine kinase p56(lck)with the pre-T cell receptor during thymocyte development[J].Eur J Immunol,2000,30(1):8-18.