包膜賴(lài)氨酸對(duì)稚鱉生長(zhǎng)性能的影響及機(jī)理探討

浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所 欒兆雙 左安燕 胡彩虹＊

嘉興市凱越飼料有限公司 高振嶺 羅天生

中華鱉對(duì)蛋白質(zhì)的需要量較高，其飼料配制嚴(yán)重依賴(lài)魚(yú)粉。由于魚(yú)粉短缺，價(jià)格昂貴，目前大量研究開(kāi)始集中于用其他蛋白源替代魚(yú)粉。然而，當(dāng)魚(yú)粉蛋白被部分或全部替代勢(shì)必導(dǎo)致水生動(dòng)物對(duì)某些氨基酸缺乏。用合成氨基酸來(lái)平衡飼料中的氨基酸比例是提高飼料蛋白質(zhì)利用率和節(jié)約蛋白質(zhì)資源、降低飼料成本的有效途徑之一。飼料中添加游離態(tài)氨基酸，如晶體賴(lài)氨酸、蛋氨酸已普遍應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖。但大量研究表明，魚(yú)、蝦不能有效地利用游離氨基酸。微膠囊及各種包膜技術(shù)可以延緩營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的釋放，包膜氨基酸在魚(yú)蝦上的應(yīng)用已有較多報(bào)道 （遲淑艷等，2010；Alam等，2005；劉永堅(jiān)等，2002）。而包膜氨基酸在中華鱉上的應(yīng)用研究還鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)研究包膜賴(lài)氨酸對(duì)稚鱉生長(zhǎng)性能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 普通賴(lài)氨酸鹽酸鹽：純度98%，賴(lài)氨酸含量78%。包膜賴(lài)氨酸鹽酸鹽：自制，芯材賴(lài)氨酸含量35%，壁材組成為硬脂酸和甘油酯。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在正式試驗(yàn)開(kāi)始以前，對(duì)試驗(yàn)鱉進(jìn)行為期2周的人工馴化，以使其適應(yīng)試驗(yàn)期間的養(yǎng)殖環(huán)境、投喂制度和試驗(yàn)料，直到行為安逸，攝食正常，方可進(jìn)入正式試驗(yàn)期。選擇180只平均體重為18.40 g稚鱉隨機(jī)分為3組 （每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只），分別飼喂賴(lài)氨酸缺乏（賴(lài)氨酸水平1.51%），添加晶體賴(lài)氨酸和包膜賴(lài)氨酸（賴(lài)氨酸水平2.62%）的等能等氮半純合成餌料。試驗(yàn)餌料配方參考周小秋等（2001），見(jiàn)表1。試驗(yàn)餌料所添加的賴(lài)氨酸部分用谷氨酸等氮代替，除賴(lài)氨酸外其他氨基酸模式與中華鱉鱉體氨基酸組成模式一致，蛋白質(zhì)、微量元素、維生素需要參考NRC（1993）鰻魚(yú)的需要量。

表1 試驗(yàn)餌料組成及營(yíng)養(yǎng)水平

中華鱉飼養(yǎng)于80 cm×50 cm×50 cm的自動(dòng)控溫控氧的室內(nèi)水族箱中。水族箱底1/3鋪消毒后的河沙6 cm厚，水位高度保持9 cm，水溫恒定在（28.2±0.4）℃，自動(dòng)供氧。每天早上 8∶00 將粉狀餌料用水調(diào)濕成面團(tuán)狀放在離水面5 cm高的食臺(tái)上，保持安靜，鱉從木板橋爬到食臺(tái)上攝食。3天換水一次，換水量為總量的1/3。換水時(shí)將食臺(tái)消毒。試驗(yàn)期60 d。

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，中華鱉空腹24 h后，從每組隨機(jī)取鱉6只，采血制備分裝于eppendorf管，取肝臟樣品，置-70℃冰箱保存，備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 曬背率、驚嚇逃跑率、腐斑率和成活率在試驗(yàn)第20、40天和60天13∶00觀察食臺(tái)上鱉數(shù)，然后開(kāi)門(mén)驚嚇并記錄逃跑數(shù)。計(jì)算公式如下：曬背率、驚嚇逃跑率、腐斑率等。曬背率（食臺(tái)上鱉數(shù)/試驗(yàn)鱉數(shù)）；驚嚇逃跑率（驚嚇逃跑數(shù)量/食臺(tái)上總鱉數(shù)）；腐斑率（腐斑鱉數(shù)/觀察數(shù)）。

1.3.2 生長(zhǎng)性能

特定生長(zhǎng)率 （SGR）/%=（1nBWf-1nBWi）/T×100；

蛋白質(zhì)效率 （PER）＝（BWf-BWi）/（FI×PC）×100；

飼料轉(zhuǎn)化率（FCR）＝FI/（BWf+BWo-BWi）×100；

存活率（SR）/%＝SNf/SNi×100；

式中：BWf為終末重 （g）；BWi為初始重，g；BWO為死亡個(gè)體重，g；T 為飼養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)間，d；FI-中華鱉所攝取的日糧量，g；PC為日糧中的蛋白質(zhì)含量，g；SNi為初始存活數(shù)；SNf為終末存活數(shù)。

1.3.3 血清游離賴(lài)氨酸 取血清1.0 mL，加人2.0 mmol/L EDTA 0.5 mL，2%5-磺基水楊酸1.0 mL混勻，靜置l h后，4000 r/min，4℃ 條件下離心10 min。然后，取上清液0.25 mL，加人0.02 mol/L HCl 5 mL，0.22 μm聚乙烯濾膜過(guò)濾后用全自動(dòng)氨基酸分析儀（日立8800）測(cè)定。

1.3.4 肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性 肝臟樣品勻漿，參考Walton等（1984）的方法測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各處理間平均值的比較采用方差分析中的Duncan’s new multiple-range test，計(jì)算程序采用SAS（6.12）中的一般線性模式進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)鱉生活力的影響 由表2可見(jiàn)，賴(lài)氨酸缺乏的對(duì)照組中華鱉曬背率、驚嚇逃跑率較低，腐斑率較高，說(shuō)明賴(lài)氨酸缺乏降低了鱉生活力。添加晶體賴(lài)氨酸和包膜賴(lài)氨酸均提高了鱉曬背率、驚嚇逃跑率，鱉生活力得到提高，且包膜賴(lài)氨酸作用效果優(yōu)于晶體賴(lài)氨酸。

2.2 對(duì)生長(zhǎng)性能的影響 從表3可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加包膜賴(lài)氨酸組的中華鱉特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率和存活率分別顯著提高44.35%、35.88%和11.52%（P＜0.05）；餌料系數(shù)顯著降低9.14%（P＜0.05）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加晶體賴(lài)氨酸可提高中華鱉生長(zhǎng)性能，且包膜賴(lài)氨酸作用效果優(yōu)于晶體賴(lài)氨酸。

表2 賴(lài)氨酸對(duì)中華鱉生活力的影響 %

表3 賴(lài)氨酸對(duì)中華鱉生長(zhǎng)性能的影響

2.3 對(duì)肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性的影響 從表4可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，添加晶體賴(lài)氨酸和包膜賴(lài)氨酸，中華鱉肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性分別顯著提高20.35%（P＜0.05）和52.21%（P＜0.05）。由此結(jié)果可見(jiàn)，包膜賴(lài)氨酸作用效果優(yōu)于晶體賴(lài)氨酸。

表4 賴(lài)氨酸對(duì)中華鱉肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性的影響

2.4 對(duì)血清游離賴(lài)氨酸的影響 由圖1可見(jiàn)，賴(lài)氨酸缺乏的對(duì)照組和晶體賴(lài)氨酸組鱉攝食后6 h內(nèi)血清游離賴(lài)氨酸在2 h左右達(dá)到高峰水平，而包膜賴(lài)氨酸組在4 h左右達(dá)到高峰水平，由此可見(jiàn)，包膜賴(lài)氨酸可延緩血清游離賴(lài)氨酸達(dá)到高峰濃度的時(shí)間，促進(jìn)機(jī)體組織氨基酸的有效利用。

3 討論

目前，關(guān)于鱉賴(lài)氨酸需要量的研究報(bào)道較少。鱉賴(lài)氨酸需要量一般借鑒鰻賴(lài)氨酸需要量（Arai，1972）。周曉秋等（2001）研究了稚鱉賴(lài)氨酸營(yíng)養(yǎng)的需要量，確定的其需要量為2.40%。本試驗(yàn)對(duì)照組含賴(lài)氨酸1.51%，應(yīng)為賴(lài)氨酸營(yíng)養(yǎng)缺乏。結(jié)果表明，賴(lài)氨酸缺乏可引起鱉生活力下降、生長(zhǎng)受阻、肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性下降，這與周曉秋等（2001）的報(bào)道一致。其他研究認(rèn)為，賴(lài)氨酸缺乏將增加蝦的死亡率、攝餌量下降和生長(zhǎng)受阻（Milamena等，1998），降低虹鱒肝臟賴(lài)氨酸-α-酮戊二酸還原酶活性（Walton等，1984）。

在水產(chǎn)動(dòng)物飼料中添加晶體氨基酸效果較差，其主要原因是：晶體氨基酸在水中浸泡流失；游離態(tài)和結(jié)合態(tài)氨基酸在體內(nèi)吸收不同步，存在消化吸收時(shí)間差，導(dǎo)致實(shí)際利用率低（劉永堅(jiān)等，2002；Berge等，1994）。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)氨基酸進(jìn)行包被，結(jié)果表明，添加包膜賴(lài)氨酸顯著提高了鱉生活力、增重和蛋白質(zhì)效率，作用效果優(yōu)于晶體賴(lài)氨酸。趙春蓉（2005）研究表明,穩(wěn)定化賴(lài)氨酸能提高幼建鯉全期和各階段增重和飼料利用率，與晶體形式賴(lài)氨酸鹽酸鹽相比，增重提高14%。本試驗(yàn)結(jié)果與此結(jié)果一致。穩(wěn)定化氨基酸能提高水生動(dòng)物生長(zhǎng)速度，可能原因在于經(jīng)穩(wěn)定化處理的氨基酸，能降低游離氨基酸的溶解和吸收速度，增加氨基酸在腸道的滯留時(shí)間，利于氨基酸吸收平衡，更多的氨基酸可用于合成蛋白質(zhì)，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)（劉永堅(jiān)等，2002）。本試驗(yàn)也證實(shí)了包膜賴(lài)氨酸可延緩血清游離賴(lài)氨酸達(dá)到高峰濃度的時(shí)間，促進(jìn)機(jī)體組織氨基酸的有效利用和蛋白質(zhì)的合成。

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