非酒精性脂肪肝患者血清膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1、脂聯(lián)素變化及其意義①

殷漢華 李捷壯 古旭東

(河源市人民醫(yī)院 廣東河源 517000)

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指對肝脂類輸入或合成和其輸出或氧化之間平衡具有調(diào)控作用的局部或系統(tǒng)性因素的改變,導(dǎo)致甘油三酯在肝內(nèi)堆積超過肝臟濕重5%,使肝臟對此后的損害變得易感,最終導(dǎo)致肝細(xì)胞炎癥和纖維化的一種疾病,并除外酒精、病毒、代謝障礙等因素[1]。該病確切機(jī)制目前尚未闡明,醫(yī)學(xué)界比較公認(rèn)是所謂“二次打擊學(xué)說”,如果說胰島素所致甘油三酯堆積是對肝臟的第一次打擊,而在肝臟脂肪沉積基礎(chǔ)上所發(fā)生的氧應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化則形成二次打擊[2]。顯然,脂質(zhì)代謝障礙在NAFLD的發(fā)生、發(fā)展中占據(jù)重要地位[3],因此筆者通過檢測血清膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(Sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1)、脂聯(lián)素變化,探討其在NAFLD發(fā)病中的地位和意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料

30例來自于2008年10月至2010年10月河源市人民醫(yī)院門診及住院患者,其中男性28例,女性12例,平均年齡(46.31±11.29)歲,平均病程(3.19±1.24)年;選擇30名健康入學(xué)體檢大學(xué)生為正常對照組。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照中華醫(yī)學(xué)會肝臟病分會制定《非酒精性脂肪肝診療指南》明確NAFLD診斷需符合以下3項條件[4]:

(1)無飲酒史或飲酒折合乙醇量＜140g/周(女性<70g/周);

(2)除外病毒性肝炎、藥物性肝病、全胃腸外營養(yǎng)、肝豆?fàn)詈俗冃?、自身免疫性肝病等可?dǎo)致脂肪肝的特定疾病;

(3)肝臟影像學(xué)(CT)表現(xiàn)符合彌漫性脂肪肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)且無其他原因可供。即肝臟密度普遍降低,肝/脾CT值之比＜1.0。其中,肝/脾CT比值＜1.0但＞0.7者為輕度,≤0.7但＞0.5者為中度,≤0.5者為重度脂肪肝。

2 研究方法

2.1 觀察指標(biāo)

2.1.1 基線資料 性別,年齡,病程等。

2.1.2 SREBP-1、脂聯(lián)素 觀察SREBP-1、脂聯(lián)素變化。

2.2 指標(biāo)檢測

2.2.1 NAFLD患者SREBP-1、脂聯(lián)素變化 應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測治療前、后SREBP-1、脂聯(lián)素(購自武漢博士德生物試劑有限公司貨號)變化,實(shí)驗步驟嚴(yán)格按照試劑盒操作說明。

2.2.2 NAFLD患者SREBP-1、脂聯(lián)素mRNA表達(dá) 應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR法(Real-time PCR),以GAPDH為內(nèi)參,檢測SREBP-1、脂聯(lián)素mRNA表達(dá)。(具體步驟:組織總RNA提取-Primer5.0軟件設(shè)計引物-逆轉(zhuǎn)錄cDNA-Real time PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增-目的基因相對mRNA表達(dá)水平的計算分析)。SREBP-1、脂聯(lián)素引物序列,見表1。

表1 人SREBP-1、脂聯(lián)素及GAPDH引物序列

表2 SREBP-1、脂聯(lián)素含量變化[μg/mL,(±s)]

表2 SREBP-1、脂聯(lián)素含量變化[μg/mL,(±s)]

注:與正常組比較,*P<0.05,#P<0.05

組別 例數(shù) SREBP-1 脂聯(lián)素NAFLD組 30 76.31±21.98 3.27±1.46正常組 30 (21.49±9.43)* (18.16±12.42)#

表3 SREBP-1、脂聯(lián)素mRNA表達(dá)變化(±s)

表3 SREBP-1、脂聯(lián)素mRNA表達(dá)變化(±s)

注:與正常組比較,*P<0.05,#P<0.05

組別 例數(shù) SREBP-1 脂聯(lián)素NAFLD組 30 3.41±1.17 0.84±0.25正常組 30 (1.26±0.49)* (2.21±0.37)#

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

3 研究結(jié)果

3.1 NAFLD患者SREBP-1、脂聯(lián)素含量結(jié)果

與正常組相比,NAFLD患者SREBP-1含量增加,脂聯(lián)素含量減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

3.2 NAFLD患者SREBP-1、脂聯(lián)素mRNA結(jié)果

NAFLD患者SREBP-1 mRNA表達(dá)呈上升趨勢,脂聯(lián)素表達(dá)呈下降趨勢,與正常組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

4 討論

隨著社會老齡化以及病毒性肝炎等其他肝病的有效控制,NAFLD已成為越來越嚴(yán)重的健康問題。盡管NAFLD機(jī)制不明,但是甘油三酯在肝內(nèi)堆積占肝臟濕重的5%是NAFLD定義的重要標(biāo)準(zhǔn)。因此,如何調(diào)控甘油三酯體內(nèi)代謝,減少甘油三酯在肝內(nèi)堆積是防治NAFLD思路之一。本研究結(jié)果揭示NAFLD患者促進(jìn)脂肪氧化分解脂聯(lián)素含量減少,mRNA表達(dá)呈下降趨勢;而促進(jìn)甘油三酯合成、積聚的SREBP-1含量增多,mRNA表達(dá)呈上升趨勢。

脂聯(lián)素是由脂肪細(xì)胞分泌的脂肪因子之一,是體內(nèi)目前被證實(shí)的唯一做作為一種保護(hù)性細(xì)胞因子,其分泌無晝夜節(jié)律,正常情況下血漿含量為(5～30)μg/mL,約占總血漿蛋白量的0.01%,在血液存在3種形式,即三聚體、六聚體和高分子量形式,其中高分子量的形式在體內(nèi)起主要的活性作用,具有抑制肝臟脂肪合成,促進(jìn)脂肪氧分解,增強(qiáng)周圍組織對胰島素的敏感性,抑制炎癥因子產(chǎn)生,對抗氧化應(yīng)激和纖維化等生物學(xué)效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn),體內(nèi)注入重組或內(nèi)源性的全長脂聯(lián)素,可迅速地降低血糖水平,能加速攝入高脂飲食后血漿脂質(zhì)的清除;長期給予脂聯(lián)素能夠通過減少肝糖輸出,增加肌肉組織脂肪酸消耗,而改善胰島素抵抗動物的胰島素敏感性和血糖水平。

SREBPs是控制膽固醇、脂肪酸、甘油三脂、磷酸生物合成最為重要的轉(zhuǎn)錄因子超家族,其中SREBP-1可能通過調(diào)控脂肪酸合成酶及乙酰輔酶A羧基化,從而參與甘油三酯合成、積聚,同時在肝臟組織中表達(dá)的主要是SREBP-1,因此SREBP-1與肝脂質(zhì)代謝密切相關(guān)。本研究提示,NAFLD患者SREBP-1含量及其mRNA呈高表達(dá)變化,與正常組比較,有統(tǒng)計學(xué)差異。這意味著阻斷SREBP-1表達(dá)可能對于NAFLD防治是有益的。

[1]Day CP.Non-alcoholic fatty liver disease:a massive problem[J].Clin Med,2011,11(2):176～178.

[2]Pascale A,Pais R,Ratziu V.An overview of nonalcoholic steatohepatitis:past,present and future directions[J].J Gastrointestin Liver Dis,2010,19(4):415～423.

[3]Erridge C.Diet,commensals and the intestine as sources of pathogen-associated molecular patterns in atherosclerosis,type 2 diabetes and non-alcoholic fatty liver disease[J].Atherosclerosis,2011,26.

[4]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性脂肪性肝病診療指南.肝臟,2006,11(1):57～65.