高效液相色譜法測定奧氮平的含量

黃 坤，郭慶東，謝 芳，王增明，郭 嘉，梅興國*

(1.武漢工程大學綠色化工過程教育部重點實驗室，湖北 武漢 430074；2.軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

0 引 言

口崩片作為一種新型片劑，具有服用簡單方便、在口腔中能迅速崩解或溶解、吸收起效快以及能避免肝臟首過效應等優(yōu)點[3]；由于其在精神疾病治療方面有著獨特的實用性，將抗精神病藥奧氮平制備成口崩片，能提高患者藥物治療的依從性，減少護理工作的負擔[4].

關于奧氮平藥代動力學的報道常見于文獻[5-8]，但關于其含量及有關物質(zhì)測定的報道不多[9-10]，同時中國藥典也未收錄該藥，因此缺乏相應的藥品標準.本文在參照最新美國藥典的基礎上建立了奧氮平原料藥及片劑含量測定的高效液相色譜法，同時應用于相應的質(zhì)量和穩(wěn)定性研究.實驗結果表明方法靈敏度高、重復性好、專屬性強，適合奧氮平及其片劑的含量測定和有關物質(zhì)檢查.

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(Degasser G1322A，Quat pump G1311A，ALS G1329A，TCC G1316A，VWD G1314D，美國Agilent公司)；Venusil ASB C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，北京艾杰爾科技有限公司)；分析天平(Sartorius BT125D型，德國賽多利斯公司)；超聲清洗儀(KS-120D型，新芝儀器廠).

奧氮平對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100948-200801)，奧氮平原料藥(軍事醫(yī)學科學院毒物藥物研究所合成，批號20110831、20110930、20111010)，奧氮平口崩片(自制，批號20111120、20111210、20111217)，乙腈、甲醇為色譜純，磷酸、磷酸二氫鈉、十二烷基硫酸鈉為分析純，水為雙蒸水.

1.2 實驗方法

1.2.1色譜條件 色譜柱：Venusil ASB C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：緩沖液(含質(zhì)量分數(shù)為0.69%磷酸二氫鈉和質(zhì)量分數(shù)為1.2%十二烷基硫酸鈉，磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5)-乙腈(45：55)；檢測波長：259 nm；柱溫：25 ℃；流速：1.5 mL·min-1；進樣量：20 μL.

1.2.2 溶液的配制 對照品溶液：精密稱取奧氮平對照品，流動相溶解、定容制成質(zhì)量濃度為100 μg·mL-1的溶液，作為對照品溶液.

奧氮平溶液：精密稱取奧氮平原料藥適量，配制方法同對照品溶液，作為原料藥溶液.

供試品溶液：取奧氮平口崩片20片，稱重，研細至粉末；精密稱取適量(相當于奧氮平30.00 mg)，流動相溶解后用0.45 μm的有機濾膜過濾.流動相將續(xù)濾液稀釋成100 μg·mL-1的溶液，作為供試品溶液.

1.2.3 專屬性試驗 酸破壞：取片劑研細粉末，流動相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.5 mol·L-1HCl溶液適量，室溫放置1 d，0.5 mol·L-1NaOH溶液中和后濾過，續(xù)濾液作為酸破壞樣品溶液.

堿破壞：取片劑研細粉末，流動相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.1 mol·L-1NaOH溶液適量，室溫放置2 d，0.1 mol·L-1HCl溶液中和后濾過，續(xù)濾液作為堿破壞樣品溶液.

氧化破壞：取片劑研細粉末，流動相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入30%的雙氧水適量，室溫放置5 d后濾過，續(xù)濾液作為氧化破壞樣品溶液.

高溫破壞：取片劑研細粉末，于60 ℃條件下放置1 d， 流動相稀釋定容制成濃度為100 μg·mL-1的溶液，濾過，續(xù)濾液作為高溫破壞樣品溶液.

光照破壞：取片劑研細粉末，于4 500 lx強光條件下照射5 d，流動相稀釋定容制成濃度為100 μg·mL-1的溶液，濾過，續(xù)濾液作為光照破壞樣品溶液.

分別取奧氮平溶液、流動相、各種破壞樣品溶液以及空白輔料溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定各溶液，記錄色譜圖至主峰保留時間的3倍.

1.2.4 線性關系 精密稱取奧氮平原料藥，流動相溶解、稀釋制備成濃度為20.33、50.83、81.32、101.65、121.98、152.48、203.30 μg·mL-1的系列標準溶液.按“2.1”項下的色譜條件測定各溶液，記錄峰面積.以峰面積對濃度進行線性回歸，計算標準方程及相關系數(shù).

1.2.5 重復性 取奧氮平原料藥和20111217批的片劑，按“2.2”項下的方法制備原料藥溶液和高、中、低9份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，計算以標示量為基準的片劑含量及其RSD.

1.2.6 中間精密度 更換測定時間、高效液相色譜檢測儀器和操作人員進行含量測定，具體試驗方案同“2.5.1”.

1.2.7 回收率 分別精密稱取奧氮平原料藥約8.00、10.00、12.00 mg，置于100 mL容量瓶中，加入處方量輔料，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備回收率試驗溶液.分別取該溶液及奧氮平原料藥溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄峰面積.按外標法計算方法的回收率及其RSD.

1.2.8 溶液穩(wěn)定性 取奧氮平片劑研細粉末，按“2.2”項下供試品溶液的制備方法制備穩(wěn)定性試驗溶液.將其置于室溫條件下，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h取該溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄峰面積.計算峰面積的RSD，考察24 h內(nèi)溶液的穩(wěn)定性.

1.2.9 檢測限與定量限 取“2.2”項下對照品溶液，用流動相逐步稀釋，按“2.1”項下的色譜條件測定，按S/N=2計算檢測限，按S/N=10計算定量限.

1.2.10 含量測定與有關物質(zhì)檢查 含量測定：分別取“2.2”項下的對照品溶液、原料藥溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，記錄峰面積，按外標法計算原料藥和片劑的含量.

有關物質(zhì)檢查：取奧氮平原料藥和片劑研碎粉末，按“2.2”項下原料藥溶液和供試品溶液的配制方法制備成濃度為500 μg·mL-1供試品溶液.精密量取供試品溶液用流動相稀釋成質(zhì)量濃度為7.5 μg·mL-1的對照溶液.按“2.1”項下的色譜條件測定各溶液，記錄供試品溶液的色譜圖至主峰保留時間的3倍，計算雜質(zhì)峰面積的總和(不包含溶劑峰和輔料峰)，用主成分自身對照法計算原料藥和片劑的有關物質(zhì)含量.

2 結果與討論

2.1 結果

2.1.1 專屬性試驗 表明在此色譜條件下，輔料與流動相對測定無干擾，主藥能與破壞產(chǎn)生的降解產(chǎn)物有效分離(R>1.5)，方法的專屬性良好，結果見圖1.

2.1.2 線性回歸得標準方程：Y=84.465X-92.104，R=0.999 8(n=7)；表明質(zhì)量濃度在20.33～203.3 μg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關系.重復性試驗測得片劑的平均含量為標示量的98.54%，RSD為0.61%，表明該方法重復性良好；中間精密度試驗測得片劑的平均含量為標示量的98.07%，RSD為0.89%，證明該分析方法的中間精密度良好.

圖1 奧氮平與降解產(chǎn)物的HPLC色譜圖Fig. 1 Chromatograms of olanzapine and degradation products 注：a. 空白輔料；b. 流動相；c. 奧氮平溶液；d. 酸降解；e. 堿降解；f. 氧化降解；g. 高溫降解；h. 光照降解；1-奧氮平峰.

2.1.3 回收率試驗 按外標法計算得到方法的平均回收率為100.12%，RSD為0.33%，表明方法準確度良好，結果見表1.

表1 奧氮平回收率試驗結果

2.1.4 穩(wěn)定性試驗測得峰面積的RSD為0.18%，說明在24 h內(nèi)溶液的穩(wěn)定性良好.檢測限與定量限試驗測得奧氮平的檢測限為1 ng，定量限為5 ng，表明方法靈敏度高.

2.1.5 含量測定結果表明三批原料藥的含量均在98.0%～102.0%之間，三批片劑的含量均在標示量的90.0%～110.0%之間，原料藥與片劑的含量符合美國藥典要求.有關物質(zhì)檢查結果表明三批原料藥的總雜質(zhì)質(zhì)量分數(shù)均小于0.4%，三批片劑的總雜質(zhì)質(zhì)量分數(shù)均小于1.5%，原料藥與片劑的雜質(zhì)質(zhì)量分數(shù)符合美國藥典要求.結果見表2.

表2 奧氮平含量測定與有關物質(zhì)檢查試驗結果

2.2 討 論

a.本實驗進行了相應的破壞性試驗，結果表明奧氮平在酸、堿、氧化、高溫和光照的條件下均有不同程度的降解；所產(chǎn)生的雜質(zhì)均能與主藥較好的分離，分離度大于1.5.同時試驗結果表明在主藥峰之后未出現(xiàn)其他雜質(zhì)峰，因此在有關物質(zhì)檢查時可以適當縮短分析時間.

b.本實驗考察了不同的柱溫(25～35 ℃)、不同流速(1～1.5 mL·min-1)、緩沖液與有機相不同配比(1∶1～1∶1.5)(體積比)的流動相系統(tǒng)，結果表明柱溫為25 ℃、流動相為緩沖液(含質(zhì)量分數(shù)0.69%磷酸二氫鈉和質(zhì)量分數(shù)1.2%十二烷基硫酸鈉， pH值為2.5)-乙腈(45∶55)(體積比)、流速為1.5 mL·min-1時，柱效較高，保留時間為6.2 min，主藥峰與雜質(zhì)峰能夠有效的分離.

c.本實驗還考察了另一種測定奧氮平的流動相體系：緩沖液(含質(zhì)量分數(shù)0.68%磷酸二氫鉀和質(zhì)量分數(shù)1%三乙胺， pH值為6.0)-甲醇-乙腈.實驗結果表明其分離效果與“3.2”項下所采用方法相差不大，“3.2”項下流動相體系更為簡單，因此采用其作為奧氮平HPLC含量測定方法的流動相.

3 結 語

本研究在綜合相關參考文獻和藥典的基礎上，建立了一種簡單的測定非經(jīng)典抗精神病藥奧氮平及其片劑的HPLC法，方法學驗證結果表明方法靈敏度高、重復性好、專屬性強，適合藥物的含量測定和有關物質(zhì)檢查.該方法曾用于奧氮平的處方優(yōu)化和質(zhì)量研究，結果表明該方法簡單快捷，適合藥物的相關分析.

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