中藥金銀花質(zhì)量控制研究

陳 軍 舒 翔 余南才

（湖北省武漢市第一醫(yī)院，武漢430022）

中藥金銀花質(zhì)量控制研究

陳 軍 舒 翔 余南才

（湖北省武漢市第一醫(yī)院，武漢430022）

目的 建立以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行金銀花的質(zhì)量控制方法。方法 薄層色譜鑒定金銀花中綠原酸，HPLC測定金銀花中綠原酸含量。結(jié)果 金銀花藥材供試品和綠原酸對照品在硅膠H板上展開后Rf值相等，顯示相同的熒光斑點(diǎn)。HPLC測定三產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量分別是4.35%、4.32%、4.29%。結(jié)論 HPLC方法測定金銀花中綠原酸含量方法簡單快捷，重復(fù)性好。

綠原酸；金銀花；質(zhì)量

金銀花（Flos Lonicerae）又名銀花、雙花，是忍冬科植物忍冬、山銀花、紅腺忍冬的干燥花蕾或初開的花。性寒，味甘，歸脾、胃、心經(jīng)，有疏散風(fēng)熱、清熱解表、解毒的作用，主治外感風(fēng)熱、咳嗽、發(fā)熱等癥[1]。李時(shí)珍的《本草綱目》中清晰記載：“金銀花對一切腫毒，敗毒托里，散氣活血，其功能獨(dú)勝”[2]。金銀花中的主要活性成分是綠原酸，因此有必要對金銀花藥材中含量很高的綠原酸進(jìn)行鑒別和質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號20101108）；硅膠H薄層板（青島海洋化工廠）；AB104-N電子天平（托力多有限公司）；高效液相色譜儀（美國Waters公司）；LC-295紫外檢測器；MTPERS BDS C18色譜柱；金銀花的花蕾（山東青島、河南密縣、重慶南川縣三產(chǎn)地的種植基地）；乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 硅膠薄層鑒定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對照品5.0mg，用甲醇超聲溶解，完全溶解后用甲醇定容于5ml的容量瓶中，即得1mg/ml的綠原酸對照品溶液，放置于4℃冰箱。

2.1.2 樣品溶液的制備 精密稱取金銀花干燥藥材1g，放置于50ml的圓底燒瓶中，加入蒸餾水25ml煎煮20min。過濾，精密量取濾液10ml于30ml的容量瓶中，加入乙酸乙酯定容，振搖，蒸干，將殘?jiān)蛹状?ml使其完全溶解，即得樣品溶液。

2.1.3 薄層鑒定結(jié)果 按照2010年中國藥典附錄VIB薄層鑒定的操作進(jìn)行，吸取對照品溶液和樣品溶液各2ul，點(diǎn)于硅膠薄層板上，用乙酸乙酯-甲酸-水（7:3:3）展開劑展開，取出，在紫外燈365nm下檢測。結(jié)果綠原酸對照品和樣品溶液展開后斑點(diǎn)位置在同一水平線上，Rf值相等，在紫外線下均顯示藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。

2.2 HPLC測定綠原酸含量

2.2.1 色譜條件考察 Hypersil ODS色譜柱（250mm× 4.6mm，5um），流動相：乙腈:0.2%醋酸水=3:7，洗脫流速0.8ml/min，檢測波長327nm，柱溫30℃。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取對照品5mg，置于10ml容量瓶中，用50%甲醇超聲溶解，完全溶解后用50%甲醇定容，即得0.5ml/ml的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將該配制的母液稀釋成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 準(zhǔn)備量取金銀花中提取純化后的濃縮液1ml，置于10ml容量瓶中，加50%的甲醇超聲溶解，定容，備用。

2.2.4 線性關(guān)系考察 將以上配制的一系列對照品標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μL分別注入高效液相中，按照上述的色譜條件進(jìn)行操作，測定峰面積，得出線性回歸方程Y=516350X＋183433，r=0.9958，n=5，表明在0.5～2.5μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對照品的母液10μL，進(jìn)行高效液相色譜，進(jìn)樣5次，測的精密度RSD=0.84%。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取6份上述配制的供試品溶液10μL，分別放置0、1、2、4、8、12小時(shí)后進(jìn)高效液相，測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD=0.58%。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知綠原酸含量的供試品溶液3份，分別加入對照品溶液適量，在同一水平條件下測定3次，測得平均回收率99.48%，RSD=1.24%。

2.2.8 樣品測定 取出不同批號的三產(chǎn)地金銀花樣品溶液，按照含量測定的方法及色譜條件進(jìn)行測定，按照外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸含量。結(jié)果見表1。

表1 三產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量測定結(jié)果 （%）

3 討論

中藥衛(wèi)生部頒發(fā)標(biāo)準(zhǔn)對金銀花藥材的鑒別用薄層色譜是硅膠H板，展開劑是苯:甲酸乙酯:甲酸（3:1.5:0.1），本研究采用該展開劑發(fā)現(xiàn)綠原酸對照品樣品未展開。改用乙酸乙酯:甲酸:水（7:3:3）展開劑展開，展開效果較好，對照品斑點(diǎn)和樣品斑點(diǎn)的Rf=0.58。2010年版《中國藥典》規(guī)定，金銀花中綠原酸的含量不能低于1.5%[3]。本研究中三產(chǎn)地收集的金銀花樣本中，綠原酸含量最高的是山東青島產(chǎn)地的，綠原酸含量是4.35%，最低的是重慶南川4.29%，均符合藥典規(guī)定。HPLC方法具有分離效能高，分析速度快，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于于化學(xué)研究領(lǐng)域。本研究中建立HPLC方法測定金銀花中綠原酸含量方法簡單、快捷、可靠。

[1] 王天志,李永梅.金銀花的研究進(jìn)展[J].華西藥學(xué)雜志,2000,15(4):292-298.

[2] 趙國玲,劉佳佳,林丹.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中成藥,2002, 24(12):973-976.

[3] 王力川.金銀花的化學(xué)成分及功效研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(5): 20 36-2037.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.15.105

1672-2779（2012）-15-0160-02

蘇玲

2012-05-15）