卵巢腫瘤患者血漿溶血磷脂酸測定及臨床意義

龐秋霞，張建紅，米志寬，王愛紅，郭賢利，魏曉麗

（1.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西延安716000；2.宜川縣人民醫(yī)院，陜西宜川716000）

卵巢腫瘤患者血漿溶血磷脂酸測定及臨床意義

龐秋霞1，張建紅2，米志寬1，王愛紅1，郭賢利1，魏曉麗1

（1.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院，陜西延安716000；2.宜川縣人民醫(yī)院，陜西宜川716000）

目的探討卵巢腫瘤患者血漿溶血磷脂酸（LPA）表達(dá)水平及其臨床意義。方法觀察LPA對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖力的影響；測定卵巢癌患者48例、卵巢良性腫瘤患者20例及14例健康婦女的血漿LPA水平，并作對(duì)比分析。結(jié)果LPA可增加細(xì)胞的增殖能力，且存在劑量依賴性。正常婦女和卵巢良性腫瘤患者血漿LPA水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；卵巢上皮性癌患者血漿LPA水平顯著高于正常婦女和良性卵巢上皮性腫瘤患者（P＜0.01）。結(jié)論LPA與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，對(duì)卵巢上皮性癌的診斷和病情監(jiān)測具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

溶血磷脂酸；卵巢腫瘤

溶血磷脂酸（Lys ophosphatidicacid，LPA）是具有細(xì)胞間信號(hào)傳遞作用的脂類小分子物質(zhì)，通過G蛋白受體介導(dǎo)的多種信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮其多種生物效應(yīng)［1］。20世紀(jì)90年代末，發(fā)現(xiàn)LPA可以刺激體內(nèi)外卵巢癌細(xì)胞的生長及增殖［2］，隨著研究的不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)LPA與腫瘤，尤其是與卵巢惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，特別是近兩年來，又發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者的腹水、血漿中存在較高濃度LPA。目前溶血磷脂酸在婦科腫瘤特別是卵巢癌方面的研究受到高度重視。本研究通過觀察LPA對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖力的影響，測定卵巢惡性腫瘤患者血漿LPA水平，探討LPA在卵巢惡性腫瘤診斷及病情監(jiān)測中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

卵巢癌細(xì)胞株SKOV3（由延安大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心保存）。所有血清均來自延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦科在2009.9-2011.9進(jìn)行手術(shù)治療的患者，其中卵巢上皮性癌48例，年齡平均51歲。病理類型：漿液性囊腺癌28例，黏液性囊腺癌12例，透明細(xì)胞癌3例，子宮內(nèi)膜樣癌5例；手術(shù)病理分期采用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIG0）2000年的分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期5例，Ⅱ期10例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例；病理分級(jí)：G17例，G215例，G326例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例；卵巢良性腫瘤20例，正常健康獻(xiàn)血婦女14例為對(duì)照組。

1.2 LPA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株增殖生長狀況的影響

卵巢癌細(xì)胞株SKOV3用RPMI1640（含15%小牛血清）培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)于37℃、5%CO2孵箱，隔日分瓶，培養(yǎng)3 d后，進(jìn)行細(xì)胞無血清培養(yǎng)，過夜約12 h后，分別加入不同濃度（5μM、20μM、80μM）的LPA，空白對(duì)照組加PBS液代替LPA，孵育24 h，觀察細(xì)胞生長狀況并進(jìn)行分析比較。

1.3 ELISA方法檢測血漿LPA水平

采集卵巢上皮性癌、卵巢良性腫瘤患者術(shù)前空腹外周靜脈血及正常健康婦女的外周靜脈血3 mL，離心分離血清置-80℃保存。嚴(yán)格按照LPA試劑盒（北京泰福仕科技開發(fā)有限公司）操作說明檢測血漿LPA水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行F檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 LPA對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖力的影響

LPA加入到卵巢癌細(xì)胞（SKOV3）后，可增加細(xì)胞的增殖能力，且存在劑量依賴關(guān)系，5μM LPA較空白對(duì)照組能促進(jìn)細(xì)胞增殖，20μM LPA較空白對(duì)照組促進(jìn)細(xì)胞生長、增殖明顯，80μM LPA較20μM LPA促進(jìn)細(xì)胞生長、增殖明顯。

2.2 卵巢腫瘤患者與健康婦女血漿LPA水平

表1 不同分組血漿LPA（μmol／L）水平比較（s）

表1 不同分組血漿LPA（μmol／L）水平比較（s）

組別 n 血漿LPA卵巢上皮性癌組14 1.74±0.71 48 6.48±1.61卵巢良性腫瘤組 20 2.85±0.95正常對(duì)照組

對(duì)三組之間血漿LPA水平進(jìn)行方差分析，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝3.92，P＜0.05），進(jìn)一步行兩兩比較，卵巢上皮性癌組血漿LPA水平顯著高于卵巢良性腫瘤組（P＜0.05）與正常對(duì)照組（P＜0.01），而在卵巢良性腫瘤組與正常對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 血漿LPA水平與臨床病理因素之間的關(guān)系

不同病理類型血漿LPA水平無差異，卵巢上皮癌患者血漿LPA水平與腫瘤的進(jìn)展似乎有相關(guān)性，Ⅲ-Ⅳ期高于Ⅰ-Ⅱ期，但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者血漿LPA高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者（P＜0.05），見表2。

表2 血漿LPA與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系

按照說明書操作要求及標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算結(jié)果：LPA＞3.2μmol／L為陽性，LPA≤3.2μmol／L為陰性。

3 討論

LPA是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有生長因子樣活性的脂質(zhì)分子，它作為細(xì)胞間的多功能磷脂信使，通過G蛋白受體介導(dǎo)的多種信號(hào)途徑，發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，LPA可誘導(dǎo)多種細(xì)胞發(fā)生增生性和形態(tài)學(xué)改變。正常人血中LPA水平很低，卵巢癌患者的腹水及血漿中LPA水平顯著升高，而其他腫瘤患者如白血病、乳癌血漿LPA增高不明顯，因而認(rèn)為卵巢癌細(xì)胞可以產(chǎn)生LPA［3］。LPA能增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的粘附，遷移，和浸潤，是卵巢癌的潛在的標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)［4］，且有望成為卵巢癌早期診斷指標(biāo)及卵巢腫瘤術(shù)前良、惡性鑒別指標(biāo)之一［5］。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)LPA能通過增強(qiáng)細(xì)胞周期蛋白D1啟動(dòng)子活性而提高卵巢癌細(xì)胞周期蛋白D1的蛋白水平，從而通過改變細(xì)胞周期進(jìn)展促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖［6］。國內(nèi)學(xué)者觀察不同濃度LPA對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響，并且合用MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路的特異性阻斷劑PD98059，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)阻斷MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路后，LPA促增殖作用被明顯抑制，提示LPA是通過激活MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖［7］。Sutphen等［8］測定卵巢上皮性癌患者及正常對(duì)照組血漿LPA表達(dá)水平，結(jié)果顯示卵巢上皮性癌患者術(shù)前血漿LPA水平明顯高于正常對(duì)照組，且檢測卵巢上皮性癌的敏感性為91.1%，特異性為92.6%。提示血漿LPA對(duì)卵巢上皮性癌的診斷具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LPA能增加卵巢癌細(xì)胞的增殖能力；在卵巢上皮癌患者中LPA高表達(dá)，且明顯高于卵巢良性腫瘤組及正常對(duì)照組，而卵巢上皮癌患者血漿LPA水平與腫瘤的進(jìn)展似乎有相關(guān)性，提示LPA與卵巢癌的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移過程相關(guān)。

［1］Sakamoto S，Yokoyama M，Zhang X，et al.Increased expression of CYR61，an extracellular matrix signaling protein，in human benign prostatic hyperplasia and its regulation by lysophosphatidic acid［J］.Endocrinology，2004，145（6）：2929-2940.

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Detection and clinical significance of serum level of lysophosphatidic acid in patients w ith ovarian tumor

PANGQiu-xia1，ZHANG Jian-hong2，MIZhi-kuan1，WANG Ai-hong1，GUO Xian-li1，WEIXiao-li1

（1.Medical College of Yan＇an University，Yan'an 716000 China；2.YiChuan county's Hospital，716200 China）

ObjectiveTo study the serum levels of lysophosphatidic acid（LPA）in patientswith ovarian tumor and its clinical significance.M ethods Observe the proliferation ability of the ovarian cancer cell by LPA deal with；48 patients with ovarian tumor，20 patientswith benign ovarian tumors and 14 normalwomen were subjected to detect the serum levels of LPA and for comparative analysis.Results LPA promotes cell proliferation showing a dose-dependency.Levels of serum LPA in patients with epithelial ovarian cancer were higher significantly than those of normal women and benign cases（P＜0.01）.ConclusionLPA is related to the development of ovarian cancer.LPA may have a potential value for diagnosis of epithelial ovarian cancer.

Lysophosphatidic acid；Ovarian tumor

R737.31

A

1672－2639（2012）02－0004－03

2012－04－15；責(zé)任編輯 趙菊梅］

項(xiàng)目來源：延安市科技計(jì)劃項(xiàng)目，2011ks-33