血府逐瘀顆粒薄層色譜鑒別方法的研究*

劉征輝 ，葉挺祥 ，趙琳琳 ，郭永澤 ，程 奕 ，羅國安

（1.天津海世達(dá)檢測技術(shù)有限公司，天津 300381；2.天津市現(xiàn)代中藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心，天津 300381；3.清華大學(xué)化學(xué)系，北京 100084）

血府逐瘀顆粒薄層色譜鑒別方法的研究*

劉征輝1，2，葉挺祥1，2，趙琳琳1，2，郭永澤1，2，程 奕1，2，羅國安3

（1.天津海世達(dá)檢測技術(shù)有限公司，天津 300381；2.天津市現(xiàn)代中藥質(zhì)量檢驗(yàn)中心，天津 300381；3.清華大學(xué)化學(xué)系，北京 100084）

[目的]研究改進(jìn)血府逐瘀顆粒的薄層色譜鑒別方法。[方法]采用薄層色譜法對(duì)成藥中的當(dāng)歸、川芎、甘草、牛膝、枳殼進(jìn)行定性鑒別。[結(jié)果]薄層色譜鑒別的色譜斑點(diǎn)清晰，陰性空白無干擾。[結(jié)論]所建立的鑒別方法專屬性強(qiáng)，方法可靠，可作為血府逐瘀顆粒的定性控制方法。

當(dāng)歸；川芎；甘草；牛膝；枳殼；薄層色譜法

血府逐瘀顆粒由柴胡、當(dāng)歸、生地、桃仁、紅花、赤芍、枳殼、桔梗、牛膝、川芎、甘草等11味藥組成，具有活血化瘀，行氣止痛功效。用于治療瘀血內(nèi)阻引起的頭痛、胸痛、內(nèi)熱憋悶、失眠多夢、心悸、怔忡、急躁易怒等癥[1]?，F(xiàn)行部頒標(biāo)準(zhǔn)由天津市藥檢所起草，只有橙皮苷定性鑒別及芍藥苷含量測定，為了提高標(biāo)準(zhǔn)，研究建立了當(dāng)歸﹑川芎﹑甘草﹑牛膝﹑枳殼的薄層鑒別方法[2-5]，以期實(shí)現(xiàn)該中藥質(zhì)量的可控性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 瑞士CAMAG Linomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀；CAMAG ADC2薄層展開系統(tǒng)；CAMAG Reprostar3數(shù)碼成像系統(tǒng)；CAMAG TLC Scanner3薄層色譜掃描儀。

1.2 試劑 硅膠G高效板10.0 cm×10.0 cm（批號(hào)：100613，青島海洋化工廠），甲醇（批號(hào)：LOT NO.106535，色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司），乙腈（批號(hào)：LOTNO.105743，色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司），磷酸（批號(hào)：2010年4月29日，色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），水為MilliQ超純水，0.22μm微孔濾膜。其他試劑均為分析純。

1.3 藥品 當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)：120927-200512，供TLC鑒別用）、川芎對(duì)照藥材（批號(hào)：120918-200507，供TLC鑒別用）、牛膝對(duì)照藥材（批號(hào)：121066-200504，供TLC鑒別用）、甘草對(duì)照藥材（批號(hào)：120904-200511，供TLC鑒別用），以上對(duì)照品均購于中國藥品生物制品檢定所。血府逐瘀顆粒（批號(hào)：090413、090614、090619，江蘇晨牌藥業(yè)有限公司）。

2 定性鑒別

2.1 當(dāng)歸、川芎的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物1.0 g，加乙醚20mL，超聲處理10min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對(duì)照藥材各0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再按供試品溶液制備方法制得陰性空白對(duì)照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VIB）實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4∶1）作為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈光（366 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾，結(jié)果見圖1。

2.2 甘草的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2.0 g，加乙醚40mL，加熱回流1 h，濾過，棄去濾液；取殘?jiān)蛹状?0mL加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，每次20mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為對(duì)照品溶液。另取甘草對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再按供試品溶液制備方法制得陰性空白對(duì)照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B）實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）為展開劑，在另槽加入等體積的濃氨試液，預(yù)飽和15min后，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈光（366 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾，結(jié)果見圖2。

2.3 牛膝的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2.0 g，加甲醇20mL，加熱回流40min，靜置，取上清液10mL，加鹽酸1mL，加熱回流1 h，濃縮至約5mL，加水10mL，用石油醚（60～90℃）20mL提取，提取液蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對(duì)照品，加乙醇制成1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。再按供試品溶液制備方法制得陰性空白對(duì)照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（40∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸試液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈光（366 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色斑點(diǎn)，且陰性無干擾，結(jié)果見圖3。

2.4 枳殼的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物1.0 g，加甲醇20mL，超聲處理15min，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液。另取枳殼對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取柚皮苷對(duì)照品加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。再按供試品溶液制備方法制得陰性空白對(duì)照溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8∶2∶1）為展開劑，在另槽加入等體積的濃氨試液，預(yù)飽和15min后，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈光（366 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無干擾，結(jié)果見圖4。

3 討論

TLC鑒別實(shí)驗(yàn)中，因枳殼《中國藥典》藥材項(xiàng)下中無薄層鑒別方法，本研究借鑒了陳皮的薄層鑒別方法，以枳殼的指標(biāo)成分柚皮苷做為對(duì)照品進(jìn)行鑒別方法考察。原方法為甲醇加熱回流提取，本實(shí)驗(yàn)改用超聲處理，結(jié)果表明超聲方法簡便易行，效果好。斑點(diǎn)偶有拖尾現(xiàn)象，本實(shí)驗(yàn)采用濃氨試液飽和15min，目的是用濃氨的堿性預(yù)飽和硅膠薄層板的弱酸性，使樣品斑點(diǎn)得到了很好的分離，目標(biāo)斑點(diǎn)也很清晰。

鑒于方中藥味較多，為了達(dá)到全面控制藥品質(zhì)量的目的，本實(shí)驗(yàn)選取了5味藥材進(jìn)行鑒別能夠多指標(biāo)綜合反應(yīng)藥品的內(nèi)在質(zhì)量，并為該處方的研究開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。該實(shí)驗(yàn)所提供的鑒別方法具有簡便易行，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。

[1]中華人民共和國藥典委員會(huì).中華人民共和國典一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]王桂英，王 齊，謝希鈞，等.血府逐瘀膠囊方解及功效[J].天津藥學(xué)，1997，9（1）：37－38.

[3]中華人民共和國藥典委員會(huì).《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中成藥第十五冊(cè)）[S].北京：中華人民共和國藥典委員會(huì)，1997.

[4]周 娟，王 穎，伍丕娥，等.血府逐瘀軟膠囊中藥材的鑒別及芍藥苷的含量測定[J].華西藥學(xué)雜志，2006，21（5）：475－477.

[5]李 丹.血府逐瘀丸質(zhì)量控制方法和金屬元素測定研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2008.

Identification of Xuefu Zhuyu granulewith TLCmethod

LIUZheng-hui1,2,YETing-xiang1,2,ZHAO Lin-lin1,2,GUOYong-ze1,2,CHENGYi1,2,LUOGuo-an3
（1.Tianjin Highshida Quality Testing Limited Company，Tianjin 300381,China；2.Tianjin Center forQuality Testingof TCM，Tianjin 300381,China； 3.DepartmentofChemistry,Qinghua University,Beijing 100084,Chin a）

[Objective]To improve the differentiatingmethod of Xuefu Zhuyu granulewith TLC.[Methods]Radix Angelica Sinensis,Rhizoma Chuanxiong,RadixGlycyrrhiza,Radix Achyranthis Bidentatae,Fructusaurantiiin Xuefu Zhuyu granulewere identified by TLC.[Results]The developed TLC spotswerequite clearand the negative blank solution had no interference.[Conclusion]Themethod of identification isspecific,reliable,and can beaquality-controllingmethod for thisgranule.

Radix Angelica Sinensis;Rhizoma Chuanxiong;Radix Glycyrrhiza;Radix AchyranthisBidentatae;Fructusaurantii;TLC

R284.1

A

1672-1519（2012）03-0292-03

天津市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（05SYSYGX25000）。

劉征輝（1982-），男，研究實(shí)習(xí)員，主要從事中藥質(zhì)量控制及化學(xué)計(jì)量學(xué)方面的研究。

2012-02-24）