麻鴨Ⅰ型鴨疫里默氏桿菌與O78型大腸桿菌混合感染的診斷

艾地云 彭公寬 羅玲 王紅琳

摘要：湖北省漢川市某蛋鴨場(chǎng)發(fā)生了一起18日齡麻鴨精神沉郁、食欲減退、嗜睡、縮頸、拉稀及神經(jīng)癥狀為特點(diǎn)的疫病，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、病理剖檢、病原分離鑒定及動(dòng)物回歸試驗(yàn)確診為Ⅰ型鴨疫里默氏桿菌和O78型大腸桿菌混合感染。

關(guān)鍵詞：鴨疫里默氏桿菌；大腸桿菌；診斷

中圖分類號(hào)：S858.32文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007-273X（2012）11-0025-02

鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer，RA）和致病性大腸埃希氏菌（Escherichia coli，E. coli）是鴨場(chǎng)最常見(jiàn)的2種致病性細(xì)菌，它們?cè)谂R床上常表現(xiàn)為混合感染，對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)的危害較大[1-3]。禽類鴨疫里默氏桿菌存在多種血清型，致病性大腸埃希氏菌的血清型更多，且二者的血清型之間不存在交叉保護(hù)，均易產(chǎn)生耐藥性。而雛鴨感染這2種細(xì)菌后的臨床癥狀和病理變化極為相似，給臨床診斷和防治帶來(lái)困難，因此進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的鑒別診斷十分必要。

2011年6月湖北省漢川市某蛋鴨養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)生了一起疫病，以雛鴨出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退、嗜睡、縮頸、拉稀及神經(jīng)癥狀為特點(diǎn)，發(fā)病率和病死率均較高，經(jīng)對(duì)發(fā)病鴨群進(jìn)行臨床癥狀觀察、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷以及動(dòng)物回歸試驗(yàn)，診斷為Ⅰ型鴨疫里默氏桿菌與O78型大腸桿菌混合感染。

1發(fā)病情況

2011年6月，湖北省漢川市某蛋鴨養(yǎng)殖場(chǎng)的

6 000羽雛麻鴨于18日齡時(shí)先后發(fā)病，隨后陸續(xù)出現(xiàn)死亡，發(fā)病2 d后病鴨數(shù)達(dá)1 200羽，其中死亡860羽，發(fā)病率和死亡率分別為20.0%、14.3%。

2臨床癥狀

病鴨表現(xiàn)為精神沉郁、食欲不振、羽毛松亂、眼鼻有黏性分泌物、喜臥及縮頸、頭頸歪斜、步態(tài)不穩(wěn)以及共濟(jì)失調(diào)、拉稀或排黃綠色糞便。

3病理變化

對(duì)病死鴨進(jìn)行病理解剖發(fā)現(xiàn)其心包積液增多，渾濁，心包膜增厚、外覆蓋一層灰黃色的纖維素性滲出物；氣囊壁增厚、覆蓋一層灰黃色的纖維素性滲出物；肝腫大，表面有黃白色纖維素膜，厚薄不均，易剝離；表現(xiàn)為典型的纖維素性心包炎、氣囊炎病變。腦膜出血或充血。

4實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1細(xì)菌學(xué)診斷

無(wú)菌取病、死鴨的腦、肝組織劃線接種于TSA（含5%小牛血清）平板培養(yǎng)基，37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)24 h。可見(jiàn)圓形凸起、邊緣整齊、半透明、有光澤、奶油狀、直徑為0.5～1.5mm的菌落，用折射光觀察可見(jiàn)微弱的虹光，疑似為鴨疫里默氏桿菌。挑單個(gè)可疑菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)24 h，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。挑單個(gè)可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察呈陰性的短小桿菌，不運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢，單個(gè)或成雙存在，偶見(jiàn)有長(zhǎng)絲狀，符合RA形態(tài)特征。

同時(shí)無(wú)菌取病、死鴨的腦組織劃線接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h?？梢?jiàn)呈紅色、邊緣整齊、表面光滑、隆起、濕潤(rùn)不透明的圓形菌落，直徑約1.0～3.0 mm，疑似為大腸桿菌。挑選單個(gè)可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察呈陰性、兩端鈍圓的短桿菌，多呈單個(gè)或成雙存在，無(wú)芽胞，符合

E. coli形態(tài)特征。6份病料中分離并純化疑似RA、E. coli菌株各6株。

4.2生化試驗(yàn)

分別將純化的6株疑似RA菌株接種到微量發(fā)酵管觀察其生化反應(yīng)。結(jié)果顯示，葡萄糖、蔗糖、木糖、肌醇、衛(wèi)茅醇、硫化氫、檸檬酸鹽反應(yīng)皆為陰性，符合RA生化特性。

分別將純化的6株疑似E. coli菌株接種到微量發(fā)酵管觀察其生化反應(yīng)。結(jié)果顯示，葡萄搪、麥芽糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖反應(yīng)皆為陽(yáng)性，肌醇、蔗糖、水楊苷、棉子糖、明膠、硫化氫、淀粉、檸檬酸鹽、氧化酶反應(yīng)皆為陰性，衛(wèi)茅醇不確定，符合E. coli生化特性。

根據(jù)以上培養(yǎng)特性、形態(tài)特征及生化特性，初步確定分離菌為鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌。

4.3血清學(xué)鑒定

用鴨疫里默氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清做玻板凝集試驗(yàn)確定其血清型[1，3]。結(jié)果顯示6株鴨疫里默氏桿菌血清型皆為Ⅰ型。

用大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，先通過(guò)玻板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初步血清學(xué)鑒定，再通過(guò)試管凝集試驗(yàn)確定大腸桿菌的O型血清型[1，4]。結(jié)果顯示6株大腸桿菌血清型皆為O78型。

5動(dòng)物回歸試驗(yàn)

分別將純化培養(yǎng)的6株RA菌株、6株E. coli菌株混合接種到TSB（含10% FCS）培養(yǎng)液中，37℃，120r/min培養(yǎng)20 h，根據(jù)平均數(shù)法計(jì)算細(xì)菌數(shù)，再分別將病原菌懸液稀釋到109CFU/mL，以備攻毒動(dòng)物用。將18只14日齡健康麻鴨分為3組，6只/組，其中2個(gè)為試驗(yàn)組，1個(gè)為對(duì)照組。試驗(yàn)1組每只鴨胸肌注射0.5 mL RA懸液，試驗(yàn)2組每只鴨胸肌注射0.5 mL E. coli懸液，對(duì)照組每只鴨胸肌注射0.5 mL TSB（含10%FCS）培養(yǎng)液。結(jié)果發(fā)現(xiàn)攻毒后24 h試驗(yàn)組鴨精神沉郁，行動(dòng)遲緩，排綠色稀糞，共濟(jì)失調(diào)，頭頸震顫和昏迷。感染后48 h內(nèi)試驗(yàn)1組鴨全部死亡，試驗(yàn)2組鴨死亡5只。解剖病、死鴨，可見(jiàn)其心包積水、渾濁，心包壁增厚、氣囊壁增厚、肝腫大、腦腫大，無(wú)菌取試驗(yàn)組鴨腦組織可分別分離到RA和E. coli。對(duì)照組鴨全部健活。說(shuō)明分離菌為本次發(fā)病鴨的病原。

6討論

根據(jù)雛鴨發(fā)病情況、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室診斷及動(dòng)物回歸試驗(yàn)可確診該病例為Ⅰ型鴨疫里默氏桿菌和O78型大腸桿菌混合感染。

鴨疫里默氏桿菌病和鴨大腸桿菌病是臨床上最常見(jiàn)的2種細(xì)菌性疾病，一年四季均可發(fā)生，鴨舍及周邊衛(wèi)生條件差、外界環(huán)境變化大時(shí)更易誘發(fā)。預(yù)防該病應(yīng)做好以下幾點(diǎn)：①加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保障飼料營(yíng)養(yǎng)，保持鴨舍通風(fēng)良好，防潮濕，勤換墊草。②堅(jiān)持嚴(yán)格的衛(wèi)生防疫、消毒措施和全進(jìn)全出制，對(duì)發(fā)病場(chǎng)所及各種污染物用生石灰進(jìn)行徹底消毒。③采用疫苗預(yù)防。雛鴨在5～7日齡時(shí)注射1次鴨疫里默氏桿菌-大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗，其保護(hù)率達(dá)85%以上[5]。因RA和E. coli各血清型之間無(wú)交叉保護(hù)性，最好選用與病原菌相同血清型的菌株做疫苗效果較好。目前湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所已研制出鴨疫里默氏桿菌-大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗，對(duì)雛鴨有較高的保護(hù)率。

治療該病應(yīng)注意：①通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物進(jìn)行治療，以避免無(wú)效用藥。②采取聯(lián)合、輪換、交叉等用藥形式，以避免細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，達(dá)到好的治療效果。

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