豬附紅細(xì)胞體病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究

劉桂麗

摘 要:豬附紅細(xì)胞體的檢測(cè)方法,包括光學(xué)顯微鏡檢查、電子顯微鏡檢查、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、熒光抗體試驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、DNA重組探針技術(shù)、DNA雜交技術(shù)、原位雜交技術(shù)等,為快速、準(zhǔn)確地診斷附紅細(xì)胞體病提供了參考。這種疾病一旦流行發(fā)生,會(huì)引起大量豬死亡,且診斷十分困難,隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)其是人畜共患的疾病,將是近段時(shí)間研究的熱點(diǎn)。

關(guān)鍵詞:附紅細(xì)胞體病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究

中圖分類號(hào):S8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-098X(2012)07(c)-0024-01

山東省沂源縣立足山草資源大力發(fā)展畜牧養(yǎng)殖業(yè),成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)村經(jīng)濟(jì)發(fā)展支柱產(chǎn)業(yè),其中養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展成為畜牧養(yǎng)殖業(yè)的龍頭。但近年來豬附紅細(xì)胞體病呈大面積暴發(fā)流行,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病是豬紅細(xì)胞感染附紅細(xì)胞體病毒引起的流行性病害,臨床以貧血、黃疸和發(fā)熱為主要癥狀,常與其他疾病同時(shí)發(fā)生,外部表現(xiàn)為體重增加速度慢,飼養(yǎng)周期長(zhǎng),種豬性能力測(cè)定下降,甚至喪失,且常規(guī)診斷比較困難。為了進(jìn)一步讓人們認(rèn)識(shí)和了解這種疾病,更有效的預(yù)防此類的疾病,就豬附紅細(xì)胞體病的臨床癥狀和一系列的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單介紹一下。

1 豬附紅細(xì)胞體病的流行病學(xué)

我們查閱了國(guó)內(nèi)外大量資料發(fā)現(xiàn)該病多發(fā)生于溫暖季節(jié),夏秋多雨季節(jié)最易發(fā)病,常呈地方流行性。據(jù)我們對(duì)全縣大型養(yǎng)殖場(chǎng)調(diào)查,懷孕的母豬最容易得病,哺乳期的仔豬死亡率最高,從調(diào)查數(shù)據(jù)看該病害可感染任何日齡的豬,表現(xiàn)隱性感染。由于該病是隱性感染,造成此病流行發(fā)生的途徑如下:(1)外來的感染病豬。(2)防疫、注射被血液污染的針頭,閹割時(shí)等被污染的剪刀等手術(shù)器械。(3)傳病介質(zhì)傳播。如寄生于體表的血虱、疥螨、蚊蠅等吸血的節(jié)肢動(dòng)物傳播。(3)配種傳播。交配時(shí)的互相傳播。

2 豬附紅細(xì)胞體病臨床癥狀

我們近幾年觀察在哺乳前期,由于無法由食物中獲取造血成分——鐵質(zhì),僅能由日糧以及鐵劑的注射來補(bǔ)充鐵質(zhì),然而這樣的鐵質(zhì)含量對(duì)于患豬附紅細(xì)胞體的仔豬是不夠的,因此小豬常常會(huì)有皮膚無血色、貧血以及黃疸等的癥狀。懷孕母豬:可分為急性以及慢性感染兩種,急性的癥狀有厭食、發(fā)燒(40～41.7℃)厭食可長(zhǎng)達(dá)1～3天之久,發(fā)燒通常發(fā)生在分娩前的母豬,持續(xù)至分娩過后,有時(shí)母豬也會(huì)有乳房以及陰部水腫的癥狀出現(xiàn)。分娩過后,母豬的產(chǎn)乳量降低,母性缺乏,所產(chǎn)下的仔豬發(fā)育不良,若無治療,母豬可于分娩后的第三天后自然痊愈。慢性感染的癥狀包括了配種成功率的降低、乏情、輕微貧血以及受孕率降低等。少數(shù)豬發(fā)病10d左右出現(xiàn)急性死亡,死亡時(shí)口腔出血,解剖胃出血。患該病精神差,喜臥,高熱,大部分發(fā)病豬全身皮膚發(fā)紅,個(gè)別豬中、后期皮膚黃染或蒼白,懷孕母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn),尤其是導(dǎo)致母豬的流產(chǎn)率、早產(chǎn)率、死胎率增高,有的即使產(chǎn)活仔,仔豬弱小,發(fā)病死亡率高。

3 豬附紅細(xì)胞體病剖檢及病理變化

我們觀察發(fā)現(xiàn)病豬全身皮膚紅紫指壓不褪色,以耳、鼻、腹部嚴(yán)重,經(jīng)血液化驗(yàn)多為缺鐵性貧血,常表現(xiàn)黃疸,眼膜黃染或蒼白。我們課題組經(jīng)五年的剖檢發(fā)現(xiàn)病豬血液稀薄、色淡、放血后不易凝固;有胸水、心包積水、心外膜和心冠脂肪有出血點(diǎn);膽囊膨脹、膽汁粘稠;脾臟微腫、有黑色出血點(diǎn);肺臟、腎臟、淋巴結(jié)腫脹,有出血;淋巴結(jié)比正常豬質(zhì)地柔軟,作切面發(fā)現(xiàn)有灰白色壞死灶或出血斑點(diǎn),切面有汁呈土黃色。

4 檢測(cè)方法

我們采用實(shí)驗(yàn)室血涂片直接觀察法、血涂片染色觀察法、電鏡觀察法、免疫學(xué)方法四種檢測(cè)方法對(duì)病豬血漿進(jìn)行大量檢測(cè)觀察,具體操作方法如下。

4.1 血涂片直接觀察

取抗凝血1滴制作常規(guī)載玻片。放大400～600倍即可見震顫和變形的血球。放在油鏡下觀察紅細(xì)胞內(nèi)和血漿中可見呈現(xiàn)綠色熒光的球形、逗號(hào)形、條形、網(wǎng)球拍形或細(xì)小顆粒狀的附紅細(xì)胞體。

4.2 光學(xué)顯微鏡檢查

采用血涂片進(jìn)行姬姆薩氏染色法染色,放在油鏡觀察,呈紅色的是紅細(xì)胞,呈深藍(lán)色是附紅細(xì)胞體。

4.3 電子顯微鏡檢查

掃描電鏡下可以發(fā)現(xiàn),附紅細(xì)胞體大小不等,以球形為主的多形小體,直徑多為0.3～2.0微米,最大可達(dá)2.6微米,偶見短桿狀、半月形等不規(guī)則小體。附著有附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞變形嚴(yán)重,但不進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),可以單獨(dú)存在,也可以成簇寄生,體形較大的附紅細(xì)胞體可見纖絲,其纖絲可扒嵌在紅細(xì)胞表面,但其僅僅附著在紅細(xì)胞表面。

4.4 免疫學(xué)方法

4.4.1 間接血凝試驗(yàn)

Smith等將分離的附紅細(xì)胞體作為檢測(cè)抗原;從接種附紅細(xì)胞體康復(fù)豬體內(nèi)獲得作為檢測(cè)用抗體,用雙向瓊擴(kuò)檢測(cè)其抗原抗體特異性后進(jìn)行IHA試驗(yàn),結(jié)果接種效價(jià)達(dá)到1∶40以上,目前此種方法是一種常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法,此法能在一定程度上檢測(cè)出潛在感染病豬。

4.4.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

此法靈敏性較IHA高,可用于快速診斷,提高了檢測(cè)出潛在感染豬的幾率,特異性試驗(yàn)表明與胸膜肺炎、巴貝絲蟲、放線桿菌等無交叉反應(yīng),因此此法是目前用于檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體病一種常用的方法。

4.5 DNA重組探針技術(shù)

根據(jù)16SrRNA基因,設(shè)計(jì)一對(duì)引物,通過擴(kuò)增16SrRNA基因的PCR序列進(jìn)行鑒定。此法特異性強(qiáng)、靈敏性高,可用于臨床上檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體病,并有特異性和檢出率高的優(yōu)點(diǎn)。

5 結(jié)語(yǔ)

(1)附紅細(xì)胞體病由于常是隱性帶菌感染,癥狀并不明顯,一旦發(fā)生不但給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,而且給肉制品業(yè)帶來極大的安全隱患。預(yù)防本病的發(fā)生應(yīng)加強(qiáng)豬場(chǎng)的衛(wèi)生防疫,消除各種應(yīng)激因素,在易患病季節(jié)應(yīng)定期噴灑殺蟲劑,以殺滅蚊、蠅、跳蚤等吸血昆蟲,消除傳染媒介

(2)發(fā)病豬只要進(jìn)行及時(shí)有效的治療。對(duì)無治療價(jià)值的病豬應(yīng)及時(shí)進(jìn)行淘汰,以清除傳染源,陽(yáng)性豬群,飼料中可添加四環(huán)素等,就以消除隱性感染。期待廣大同仁今后不斷加大對(duì)該病的診斷、發(fā)病機(jī)理、檢測(cè)方法等方面的研究,共同造福于畜牧養(yǎng)殖業(yè)。