雞傳染性鼻炎血清分離試驗(yàn)

孫曉媛 張旭 王贏

中圖分類號(hào)：Ｓ８５８．３１文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０12）09-0020-02

雞傳染性鼻炎（ＩＣ）是由副雞嗜血桿菌引起的雞的一種急性或亞急性上呼吸道疾病，其特征是眼結(jié)膜和鼻黏膜發(fā)炎、流淚、流鼻涕、打噴嚏，臉部水腫和眶下竇腫脹，有時(shí)伴有下呼吸道（氣管和氣囊）的炎癥。

該病的病理變化主要是面部、眼瞼、肉髯明顯水腫，有時(shí)眼、鼻流出惡臭的黏性、膿性分泌物，并在鼻孔周圍形成痂皮。鼻腔和鼻竇黏膜呈急性卡他性炎，充血腫脹，表面覆有大量黏液、竇內(nèi)有滲出物凝塊，逐漸成為干酪樣壞死物。常見卡他性結(jié)膜炎，結(jié)膜充血腫脹，臉部及肉髯皮下水腫。發(fā)生結(jié)膜炎時(shí)，結(jié)膜充血腫脹，嚴(yán)重的可引起眼睛失明。鼻竇、眶下竇內(nèi)積有多量的黃色干酪樣物。氣管和支氣管可見滲出物，嚴(yán)重者因干酪樣物質(zhì)阻塞呼吸道而造成肺炎和氣囊炎。育成雞發(fā)病死亡較少；產(chǎn)蛋雞輸卵管內(nèi)有黃色干酪樣分泌物，卵泡松軟、血腫、壞死或萎縮，引發(fā)腹膜炎；公雞睪丸萎縮。

１材料與方法

１．１試驗(yàn)材料

１．１．１病料來源 發(fā)病雞來自錦州巿某種雞場(chǎng)。用棉拭子采集眶下竇及氣管病樣。

１．１．２實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 １月齡健康雞（１２只）購(gòu)自遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

１．１．３血清樣品錦州市發(fā)病雞場(chǎng)的疑似病雞采集血清。

１．１．４試劑鄰苯二酚、瓊脂粉、無水乙醇、酚、氯仿、吐溫－２０等為分析純。

１．２試驗(yàn)方法

１．２．１臨床觀察觀察發(fā)病雞群臨床癥狀，同時(shí)對(duì)病死雞進(jìn)行剖檢，觀察其病理變化，詳實(shí)記錄。

１．２．２病料接種染色鏡檢將采集的病雞眶下竇及氣管病料分別劃線接種于雞血清肉湯瓊脂及巧克力瓊脂上，用ＣＯ２培養(yǎng)箱３７℃培養(yǎng)３６ｈ，挑選灰白色、針尖大小菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，同時(shí)涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

１．２．３動(dòng)物試驗(yàn)將純化的菌落接種于雞血清肉湯中培養(yǎng)２４ｈ，用肉湯培養(yǎng)物接種5只１月齡健康雞（未免疫雞），每只雞眶下竇注射０．２ｍＬ（約２×108 ＣＦＵ／ｍＬ），同時(shí)設(shè)對(duì)照組。觀察雞的臨床表現(xiàn)，對(duì)有典型癥狀的雞，無菌采集眶下竇病樣接種雞血清肉湯瓊脂，進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。

１．２．４雞胚接種試驗(yàn)培養(yǎng)的菌落接種于雞血清肉湯中培養(yǎng)２４ｈ，用肉湯培養(yǎng)物接種10只８日齡健康雞胚卵黃囊，每只接種０．１ｍＬ，同時(shí)設(shè)對(duì)照組，接種后置孵化箱繼續(xù)孵化。每６ｈ照檢１次，雞胚死亡后置４℃冷藏２４ｈ，采集尿囊液和卵黃囊液，分別接種血瓊脂，進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。

１．２．５血清平板凝集試驗(yàn)在潔凈載波片上分別滴加０．０５ｍＬ的Ａ、Ｂ、Ｃ 3個(gè)血清型的標(biāo)準(zhǔn)抗原，再分別加０．０５ｍＬ被檢血清，同時(shí)設(shè)抗原對(duì)照、陽性、陰性血清對(duì)照。加樣后用牙簽攪勻，使抗原與血清充分混合，以３～５ｍｉｎ出現(xiàn)凝集者為陽性，反之為陰性。

１．２．６病原菌分離培養(yǎng)將竇內(nèi)物于血瓊脂平板培養(yǎng)基上作平行劃線接種，再用葡萄球菌與原先的劃線作垂直交叉接種，CO2培養(yǎng)箱３７℃培養(yǎng)２４～４８ｈ，觀察結(jié)果。

２結(jié)果與分析

２．１培養(yǎng)特性及細(xì)菌形態(tài)

從眶下竇和氣管病樣中均分離到革蘭氏陰性的小球桿菌，有的呈兩極著色、單個(gè)、成對(duì)或呈短鏈狀排列，菌落在巧克力瓊脂上為灰白色、邊緣整齊、細(xì)小露滴樣菌落。在雞血清肉湯瓊脂平板上為灰白色、半透明、邊緣整齊的針尖大小菌落，符合副雞嗜血桿菌的菌落特征。

２．２動(dòng)物試驗(yàn)

試驗(yàn)雞接種４ｄ后出現(xiàn)流鼻液等發(fā)病癥狀，８ｄ后，５只雞出現(xiàn)面部腫脹，呼吸困難，對(duì)照組雞正常，從感染發(fā)病雞的眶下竇病樣品中分離到該菌。

２．３雞胚接種試驗(yàn)

接種３６ｈ后，１０只胚中有３只死亡，４８ｈ后，１０只胚全部死亡，死胚呈全身彌漫性出血，尤以頭部出血嚴(yán)重，對(duì)照組雞胚正常，未見死亡。從死亡雞胚的尿囊液中均分離到該菌，說明該菌對(duì)雞胚有較強(qiáng)的致病力。

２．４血清平板凝集試驗(yàn)

血清檢測(cè)結(jié)果為Ｈｐｇ血清Ａ型。

２．５病原菌分離培養(yǎng)結(jié)果

在葡萄球菌菌落附近可見許多無色透明針尖大小露珠樣菌落，呈衛(wèi)星現(xiàn)象。

３小結(jié)與討論

本試驗(yàn)對(duì)所分離的菌株通過涂片、染色、鏡檢、分離培養(yǎng)、動(dòng)物試驗(yàn)、雞胚接種試驗(yàn)、血清平板凝集試驗(yàn)及病原菌分離培養(yǎng)，確認(rèn)該菌為副雞嗜血桿菌。所分離的副雞嗜血桿菌菌株血清檢測(cè)結(jié)果為Ｈｐｇ血清Ａ型。在生產(chǎn)實(shí)際中，應(yīng)采取以下措施進(jìn)行防范。

３．１免疫接種

應(yīng)用副雞嗜血桿菌菌苗預(yù)防該病有一定效果。目前國(guó)內(nèi)已研制出含Ａ型和Ｃ型副雞嗜血桿菌的二價(jià)油乳劑滅活疫苗使用效果較好。種雞和蛋雞一般采用二次免疫，第一次在３０～４０日齡、第二次在１１０～１２０日齡接種，可以保護(hù)雞群度過整個(gè)產(chǎn)蛋周期。副雞嗜血桿菌各血清型之間不存在交叉免疫保護(hù)或交叉保護(hù)性很弱，故最好選用本場(chǎng)或本地區(qū)分離的菌株來制作疫苗。

３．２飼養(yǎng)管理

雞舍要注意防寒防濕，通風(fēng)良好，雞群不能過分擁擠，搞好雞舍內(nèi)外清潔衛(wèi)生，保持用具干凈。注意飼料的營(yíng)養(yǎng)全價(jià)，并多喂一些富含維生素Ａ的飼料。不要從外場(chǎng)購(gòu)入帶菌雞。雞群中一旦發(fā)現(xiàn)病雞應(yīng)及時(shí)隔離治療。病雞康復(fù)后可能成為長(zhǎng)期帶菌者，不能留作種用，應(yīng)與健康雞群分開飼養(yǎng)或淘汰處理，以免傳播病菌。