高效液相色譜法測(cè)定急肝退黃膠囊中鹽酸小檗堿含量

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(1.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

急肝退黃膠囊為茵陳、黃柏、板藍(lán)根、白茅根、蒼術(shù)、郁金、秦艽、蒲公英、車前草、黃芩、麥芽、大黃、梔子諸藥組成的復(fù)方制劑，用于急性黃疸型肝炎。該制劑收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中成藥制劑第2冊(cè),無(wú)含量測(cè)定方法[1-2]。本文采用高效液相色譜法測(cè)定該制劑中黃柏的鹽酸小檗堿含量，結(jié)果表明，本法簡(jiǎn)便、迅速、結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

2010AHT高效液相色譜儀(日本島津),Class-vp工作站，SPD-M10AVP型紫外可見(jiàn)檢測(cè)器(日本島津)；KQ-50B超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713-200208供含量測(cè)定用)；急肝退黃膠囊(貴州省安康)；乙腈為色譜醇，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)[5];流動(dòng)相：乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)；流速：1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：264 nm;柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10～20 μL。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰記不低于4 000。鹽酸小檗堿與相鄰的雜質(zhì)峰的分離度為1.54。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在100 ℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL中含鹽酸小檗堿0.1 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物約3 g,精密稱定，置錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)40 min,放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，蒸干，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按急肝退黃膠囊處方比例稱取缺黃柏的陰性樣品適量，按供試品溶液的制備方法提取陰性對(duì)照溶液。

2.5 干擾試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按上述色譜條件依法測(cè)定，結(jié)果樣品色譜圖中與對(duì)照品溶液有相同保留時(shí)間(tR=19.2 min)的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無(wú)此峰，說(shuō)明急肝退黃膠囊的其他成分對(duì)鹽酸小檗堿的測(cè)定無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液(每1 mL含0.0 966 mg)4、6、8、12、16、20 μL注入色譜儀，以上述色譜條件測(cè)定峰面積值，以峰面積為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：Y=-168 112.656 1+362 288 5.366X，r=0.999 7，結(jié)果表明線性關(guān)系良好。線性范圍為0.386 4～1.932 0 μg。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，每次20 μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。得峰面積平均值27 892 03(n=7)，RSD為2.75%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，測(cè)得平均峰面積為29 441 87(n=6)，RSD為1.87%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品6分，按照供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理，依上述色譜條件依法進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算含量，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為0.203 mg/粒。

2.10 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)，精密稱取已知含量的樣品6分(各約1.5 g)，精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.096 6 mg/mL)10 mL，按照供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理,依上述色譜條件依法進(jìn)行測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果平均為98.20%，RSD為1.41%。

2.11 樣品測(cè)定 取5個(gè)批號(hào)的樣品，按照供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理，依上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每批測(cè)定2次，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 5批樣品含量結(jié)果 mg/粒

3 結(jié)論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取鹽酸小檗堿對(duì)照品的甲醇溶液，在190～370 nm范圍內(nèi)掃描，其定測(cè)定波長(zhǎng)為264 nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 經(jīng)多種流動(dòng)相選擇，認(rèn)為乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)為最佳。

3.3 提取方法的選擇 采用鹽酸-甲醇(1∶100)為溶劑超聲處理30 min的提取方法良好，且操作簡(jiǎn)便[3-4]。

[1]唐德智.HPLC法測(cè)定急肝退黃膠囊中綠原酸含量[J].中國(guó)藥師,2009(10):60.

[2]李伯軍,白巖,李鐵強(qiáng),等.高效液相色譜法測(cè)定急肝退黃膠囊中黃芩苷的含量[J].中國(guó)藥事，2006(11):39.

[3]丁海昕,王效民,梁玉景.HPLC法測(cè)定抗饑消渴片中鹽酸小檗堿的含量[J].安徽醫(yī)藥，2008(3):42.

[4]袁常青,邢亮,李長(zhǎng)富,等.用高效液相法測(cè)定腎特康膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].中國(guó)職業(yè)藥師，2011(9):51.