茅梅提取物對(duì)肝損傷保護(hù)作用的研究

宋志遠(yuǎn),孔 棣，宋書輝，劉 斌

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300073;2.天津市南開醫(yī)院，天津 300100)

茅梅rubusparvifolius為薔薇科懸鉤子屬植物，落葉小灌木，資源豐富，分布于河北、山西、陜西、四川及華東各省區(qū)[1]。茅梅是一種傳統(tǒng)民間中藥，據(jù)醫(yī)學(xué)古籍《本草拾遺》記載，該植物具有“止血活血、散瘀定痛、清熱解毒之功效，可內(nèi)服、外敷”[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究[2]表明，茅梅具有止血、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗菌、抗腦缺血等作用。其化學(xué)成分包含黃酮苷、糖類、酚類等多種成分。本文主要對(duì)茅梅提取物對(duì)肝損傷的檢測指標(biāo)及病理學(xué)改變的影響進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 大鼠50只,體質(zhì)量(200±20) g，北京維通利華試驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(京)2007-0001。

1.2 藥物與試劑 茅梅醇提物(用50%乙醇提取配制成1 mL相當(dāng)于生藥1 g)，由天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備；18a-甘草酸二銨(甘利欣)，江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20091105；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)臨床診斷試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)20100122。

1.3 儀器 高速低溫離心機(jī)；JY92-2D型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝科器研究所)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 方法 取40只大鼠，用40%的CCl4花生油溶液皮下注射，每日1次，給藥體積均為10 mL/kg，連續(xù)9 d；其后將小鼠隨機(jī)分為4組:模型組、甘利欣組(5 mL/kg)、茅梅醇提取物高劑量組(5 mL/kg)、茅梅醇提取低劑量組(2.5 mL/kg)，各組分別灌胃給藥，每日1次，連續(xù)9 d。

2.2 指標(biāo)檢測 末次給藥后2 h摘眼球取血，靜置，3 000 r/min，離心15 min，取血清，低溫保存[3]。用自動(dòng)生化分析儀測定血清生化指標(biāo)的活性。采血后處死動(dòng)物,立即解剖取肝臟進(jìn)行病理檢查。

2.2.1 肝臟指標(biāo)的變化 檢測血清中ALT、AST、ALP、GGT活性并記錄數(shù)據(jù),檢測結(jié)果與模型組比較，見表1。

2.2.2 組織學(xué)檢查 取肝臟組織經(jīng)石蠟切片、HE染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查，根據(jù)肝臟組織病變形態(tài)程度的差異，將其病變分為，-：正常；++：間質(zhì)水腫，少量炎細(xì)胞浸潤；+++：間質(zhì)水腫，大量炎細(xì)胞浸潤，細(xì)胞變性；++++：間質(zhì)水腫，大量炎細(xì)胞浸潤，細(xì)胞變性，散在細(xì)胞壞死[5]，見表2。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)CCl4花生油溶液所致肝損傷模型小鼠肝指標(biāo)的影響 見表1。

3.2 對(duì)40%的CCl4花生油溶液所致肝損傷模型大鼠肝臟組織學(xué)的影響 模型對(duì)照組肝臟明顯增大，與組織黏連較重，部分組織表面可見暗紅色或灰白色片狀結(jié)節(jié)，組織切片可見間質(zhì)水腫，大量炎細(xì)胞浸潤，細(xì)胞變性，散在細(xì)胞壞死。茅梅大、小劑量組肝臟體積輕度到中度增大，與周圍組織僅有輕度黏連;肝臟較柔軟，表面有光澤，但肝臟較正常組織有不同程度的腫脹;肝臟細(xì)胞間質(zhì)充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤及少量細(xì)胞變性，但與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與甘利欣組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 茅梅醇提取物對(duì)CCl4大鼠肝損傷的影響(±s，n=10) U/L

表2 茅梅醇提取物對(duì)CC14花生油溶液所致肝損傷模型大鼠肝臟組織學(xué)的影響(n=10)

4 討論

CCl4急性肝損傷模型是一種經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性肝損傷動(dòng)物模型，此模型能準(zhǔn)確反映肝細(xì)胞的功能、代謝及形態(tài)學(xué)變化，一直是篩選具有保肝降酶作用藥物的常用模型之一。肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復(fù)雜過程。CCl4在體內(nèi)對(duì)肝細(xì)胞親和力大，自由基的形成及引發(fā)的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是CCl4損傷肝組織的主要機(jī)制[5]。一般認(rèn)為CCl4損傷肝組織機(jī)制是CCl4經(jīng)肝細(xì)胞色素P450代謝激活后生成三氯甲基自由基(·CCl)和氯自由基(·Cl)，引起生物膜脂質(zhì)過氧化，當(dāng)自由基增加到一定程度時(shí)，清除自由基的特異酶類的活性就降低，造成膜結(jié)構(gòu)和功能損傷，蛋白質(zhì)等物質(zhì)合成代謝發(fā)生障礙，導(dǎo)致胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶滲入血液,肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化或壞死[6]。這與病毒性肝炎的病理解剖、病理生理諸方面的改變和表現(xiàn)出來的癥狀及肝功能檢測的指標(biāo)等方面具有相似性[7]。

茅梅前期的實(shí)驗(yàn)研究和調(diào)查中就已顯示其具有較好的抗肝損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦顯示,1)茅梅提取物能明顯降低CCl4所致的肝損傷大鼠肝指數(shù)的升高(P<0.05)。因此茅梅具有明顯的抗肝損傷的作用，茅梅高劑量組的效果最好，低劑量組次之。2)推測其抗肝損傷的機(jī)制可能與茅梅能增強(qiáng)大鼠清除自由基、抑制自由基啟動(dòng)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、肝細(xì)胞受到自由基攻擊時(shí)可因其過度消耗而減少有關(guān)[8]。3)D-GalN可引起肝彌漫性壞死[9]，D-GalN是肝細(xì)胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，它進(jìn)入機(jī)體后與磷酸尿苷(UDP)結(jié)合，形成UDP-D-GalN,消耗體內(nèi)的UDP，影響細(xì)胞器及酶生成物質(zhì)核酸、糖蛋白、脂糖等的合成，使細(xì)胞器受損、膜損害，致肝細(xì)胞壞死[10]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，茅梅提取物能減輕D-GalN所致的肝損傷程度，可能是其具有促進(jìn)體內(nèi)尿嘧啶核苷酸的合成，拮抗D-GalN干擾的功能，從而起到保護(hù)肝臟的作用。

目前，茅梅的抗肝損傷作用尚未深入研究。本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行的系統(tǒng)研究，將對(duì)開發(fā)茅梅成為新的抗肝損傷的藥物具有極大的參考價(jià)值。

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