3種化學發(fā)光檢測系統(tǒng)測定血清糖鏈抗原125的比較

顏 威，張巧娣，謝而付（.江蘇省徐州睢寧縣官山鎮(zhèn)黃圩衛(wèi)生院 00；.南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院 009）

很多的學者研究發(fā)現(xiàn)糖鏈抗原125（CA125）不僅在卵巢癌患者外周血會升高，在消化系統(tǒng)腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤以及白血病均會升高，且與腫瘤的化療耐受相關，對腫瘤患者具有一定的臨床應用價值［1-5］。目前，常用于CA125檢測的方法有酶標記法、放射免疫法以及化學發(fā)光法，因化學發(fā)光法檢測CA125具有高度敏感性和特異性在臨床廣泛應用。許多大的試劑廠商都會開發(fā)CA125化學發(fā)光檢測試劑盒。由于缺乏可溯源的一級標準品，同時不同廠商的檢測系統(tǒng)采用不同的檢測方法，所使用的發(fā)光底物也不同，這就可能造成相同的樣品在不同系統(tǒng)檢測時結(jié)果不一致，對臨床疾病的診斷及預后判斷帶來不便。因此，本研究的目的是對本科室3種常用的CA125檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果進行比較，并確定其相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院門診及住院患者100例，其中男4例，女96例，年齡21～98歲，中位年齡36歲。

1.2 標本收集 所有患者早晨空腹抽取靜脈血3 mL，放入帶有分離膠的干燥管，檢測前進行3 000 r／min離心5min。

1.3 試劑與儀器 CA125化學發(fā)光法檢測試劑盒分別為Beckman公司、Roche公司和Siemens Immulite公司商品化產(chǎn)品，分別采用各自廠家的配套檢測系統(tǒng)進行檢測，其方法分別為化學發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）、電化學發(fā)光免疫檢測法（ECLIA）和直接發(fā)光免疫分析法（CLIA），所使用儀器的型號分別為Beckman UniCel DXI 800、Roche MODULAR E 170和Siemens Immulite 1000，儀器的校準分別采用各自廠家的校準物進行校準。

1.4 血清CA125檢測 不同廠家的化學發(fā)光分析系統(tǒng)均按照每個儀器的標準操作規(guī)程進行操作，每個檢測系統(tǒng)會按照校準曲線自動算出血清CA125的含量，所有的患者血清標本在采血當天進行檢測，每日標本檢測前，均進行室內(nèi)質(zhì)控品檢測，室內(nèi)質(zhì)控品在控后再進行臨床樣本檢測，3種CA125檢測系統(tǒng)的生物參考區(qū)間均為小于35 U／mL。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用STATA 9.0軟件進行統(tǒng)計學處理，因為各組檢測結(jié)果均為非正態(tài)分布，因此等級相關采用Spearman秩相關分析，兩組樣本中位數(shù)比較采用Mann－Whitney U檢驗，多組樣本間中位數(shù)比較采用Kruskal－Wallis H檢驗，各組樣本間陽性率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 3種檢測系統(tǒng)的相關性 分別對3種檢測系統(tǒng)的數(shù)據(jù)進行Spearman秩相關性分析，結(jié)果顯示3組結(jié)果中任意兩組之間均存在相關性，其中CLEIA組與ECLIA組的相關系數(shù)為0.948（P＜0.05），CLEIA 組與 CLIA 組的相關系數(shù)為0.932（P＜0.05），ECLIA組與 CLIA組的相關系數(shù)為0.947（P＜0.05）。

2.2 3種檢測系統(tǒng)的結(jié)果比較 CA125在患者中呈偏態(tài)分布，因此采用Kruskal－Wallis檢驗對3組樣本間中位數(shù)進行比較，結(jié)果顯示3組之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），進一步采用Mann－Whitney檢驗對3組樣本中位數(shù)進行兩兩比較，結(jié)果顯示CLEIA組顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而ECLIA組與CLIA組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.3 3種檢測系統(tǒng)陽性率比較 以CA125＜35 U／mL為正常參考區(qū)間，≥35 U／mL即判斷為陽性，對100例檢測結(jié)果進行分析，CLEIA組有76例陽性，陽性率為76%（76／100），ECLIA組有58例陽性，陽性率為58%（58／100），CLIA組有53例陽性，陽性率為53%（53／100），CLEIA組陽性率顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而ECLIA組CLIA組陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3 討 論

CA125自1981年被發(fā)現(xiàn)后，其檢測方法從經(jīng)典的放射免疫分析和酶免疫分析技術，發(fā)展到今天已被廣泛應用的化學發(fā)光免疫分析技術，也有學者使用生物素－親和素檢測系統(tǒng)，其實質(zhì)都屬于免疫標記檢測技術范疇，只是所標記的檢測基團不同［6］。但是，迄今為止，各臨床實驗室尚未能建立起標準化的免疫檢測系統(tǒng)，這也就限制了各實驗系統(tǒng)的檢測結(jié)果的統(tǒng)一。此外，腫瘤患者體內(nèi)其他的高濃度糖鏈蛋白可能會產(chǎn)生交叉反應，不同試劑抗體中其抗原結(jié)合位點特異性識別能力的高低，以及患者體內(nèi)存在嗜異性抗體可競爭性結(jié)合CA125，而不同檢測系統(tǒng)排除上述干擾的能力差異也較大，從而導致測定值的差異。這種差異不僅限制了臨床資料的對比分析，同時也困擾著臨床實踐指導方針的統(tǒng)一制定。

本研究中，作者應用3種常用的化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)，平行測定100份臨床患者的空腹血清CA125水平，從統(tǒng)計描述來看，測定結(jié)果在不同的系統(tǒng)之間差異有統(tǒng)計學意義，CLEIA系統(tǒng)組顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計學意義，而ECLIA組與CLIA組之間差異無統(tǒng)計學意義。但是該3種檢測系統(tǒng)測定結(jié)果之間又具有密切的相關性，相關系數(shù)r的范圍為0.932～0.948，與國外報道相近［7］，這說明 CLEIA 檢測系統(tǒng)在檢測CA125的水平明顯高于其他檢測系統(tǒng)，在臨床應用上與另外兩種檢測系統(tǒng)缺乏可比性，不能互相通用。

隨后，作者使用3種檢測系統(tǒng)，以CA125＜35 U／mL為正常參考區(qū)間，對100例患者的CA125檢測結(jié)果進行分析，CLEIA組陽性率為76%（76／100），ECLIA組陽性率為58%（58／100），CLIA組陽性率為53%（53／100），CLEIA 組陽性率顯著高于ECLIA組與CLIA組，這說明CLEIA法檢測CA125的檢測敏感性高于其他組，但這并不意味著對于疾病的診斷敏感性高于其他方法，因為這需要結(jié)合患者的臨床資料進行判斷，因為可能會存在假陽性結(jié)果。

國外的研究表明，造成不同的檢測系統(tǒng)之間的檢測數(shù)據(jù)不同的原因是多方面的，主要有檢測系統(tǒng)的分析靈敏度、特異性、線性范圍以及基質(zhì)效應等因素。解決措施需要建立和完善高度標準化、特異性的檢測參考系統(tǒng)，以及使用各檢測系統(tǒng)與參考方法進行比對，這也成為相關研究領域的熱點。

綜上所述，由于現(xiàn)有的CA125檢測系統(tǒng)之間數(shù)據(jù)一致性不是很好，作者建議對CA125建立標準化的參考方法，現(xiàn)有的檢測系統(tǒng)應與標準化的參考系統(tǒng)進行比對，使得各檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果趨于統(tǒng)一，從而更好地在臨床上使用。

［1］Lloyd KO，Yin BW，Kudryashov V.Isolation and characterization of ovarian cancer antigen CA 125 using a new monoclonal antibody（VK－8）：Identification as a mucintype molecule［J］.Int J Cancer，1997，71（5）：842－850.

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［3］Berthiot G，Marechal F，Cattan A，et al.Serum Levels of CA－50，CA－19.9，CA 125，neuron specific enolase and carcinoembryonic antigen in lung cancer and benign diseases of the lung［J］.Biomed Pharmacother，1989，43（8）：613－620.

［4］Acín P，Besses C，Centelles M，et al.Elevated serum CA125 tumor marker in chronic lymphocytic leukemia with mesothelial involvement［J］.Am J Hematol，1996，53（4）：281.

［5］張秀萍，熊新華，瞿少剛.晚期NSCLC患者血清CA125、CEA水平與化療耐受的關系及意義［J］.實用醫(yī)學雜志，2011，26（14）：2536－2538.

［6］曾昭偉，王學謙，李會強.CA125的生物素－親和素酶聯(lián)免疫檢測方法的建立［J］.實用醫(yī)學雜志，2011，26（9）：1675－1678.

［7］Mongia SK，Rawlins ML，Owen WE，et al.Performance characteristics of seven automated CA 125 assays［J］.Am J Clin Pathol，2006，125（6）：921－927.