一例豬大腸桿菌病的診斷及防治研究

錢 峰

（江蘇省泰興市古溪鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 泰興 225417）

1 豬大腸桿菌病的特征

1.1 病原及臨床癥狀

1.1.1 病原 本屬菌呈革蘭氏染色陰性，無芽孢，一般有數(shù)根鞭毛，常無莢膜，兩端鈍圓。從病豬身上分離到的大腸桿菌有溶血性或非溶血性兩類，其O型抗原因不同地域和時(shí)期而有變化。多數(shù)病原菌株都有菌毛吸著因子并產(chǎn)生腸毒素，已知吸著因子（也稱粘著因子）有K88、K99、987P、F41 4 種，且各具獨(dú)特的抗原性。

1.1.2 臨床癥狀 臨床上以排灰白色粥樣稀便為主要特征，發(fā)病率高而致死率低。神經(jīng)癥狀表現(xiàn)為盲目行走或轉(zhuǎn)圈，共濟(jì)失調(diào)，口吐白沫，叫聲嘶啞，進(jìn)而倒地抽搐，四肢呈游泳狀，逐漸發(fā)生后軀麻痹，臥地不起，在昏迷狀態(tài)中死亡。體溫在病初可能升高，很快降至常溫或偏低。眼瞼或結(jié)膜及其他部位水腫，病程在數(shù)小時(shí)至1～2 d，潛伏期短，一般在24 h左右，長的也僅有1～3d，個(gè)別病例到7日齡左右發(fā)病。

1.2 病理變化 尸體脫水，表現(xiàn)為皮膚干燥、皺縮，口腔黏膜蒼白。最顯著的病變?yōu)槟c道有急性卡他性炎癥，其中以十二指腸最為嚴(yán)重。全身多處組織水腫，特別是胃壁黏膜水腫是本病的特征。大腸腸系膜水腫，結(jié)腸腸系膜膠凍狀水腫亦很常見。此外，大腸壁、全身淋巴結(jié)、眼瞼和頭頸部皮下亦有不同程度的水腫。除了水腫病變外，胃底和小腸黏膜、淋巴結(jié)等有不同程度的充血。心包、胸腔和腹腔有程度不等的積液。

2 病原分離及鑒定

2.1 試驗(yàn)材料 大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)O抗原（O1-O163），購自中國獸藥監(jiān)察所，病料分別來自江蘇泰興市14個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，編號為：長生（CS）、古溪(GX)、黃橋（HQ）、泰興（TX）、溪橋（XQ）、河失（HS）、橫垛（HD）、橫巷（HX）、劉陳（LC）、廣陵（GL）、曲霞（QH）、寧界（NJ）、元竹（YZ）、大生（DS）。所有病料均為典型腸炎病死豬的肝、脾、淋巴結(jié)和胃壁水腫液；實(shí)驗(yàn)動物購自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心，為60日齡左右的健康小白鼠。

2.2 細(xì)菌分離及培養(yǎng)試驗(yàn) 無菌采取病料接種于麥康凱瓊脂平板上培養(yǎng)24h，挑取紅色中等大小光滑菌落接種于普通肉湯，再劃線于麥康凱瓊脂平板上培養(yǎng)24h，然后挑取單個(gè)菌落將其接種于鮮血瓊脂上培養(yǎng)，并觀察是否有溶血現(xiàn)象。分離菌分別接種于普通瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、伊紅美藍(lán)瓊脂平板、普通肉湯培養(yǎng)基，于37℃有氧條件下培養(yǎng)；同時(shí)設(shè)立另一組于厭氧條件下培養(yǎng)，并觀察其生長表現(xiàn)。

2.3 生化試驗(yàn) 參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》進(jìn)行鑒定，分別進(jìn)行了吲哚試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、尿素試驗(yàn)、葡萄糖、麥芽糖等發(fā)酵試驗(yàn)。

2.4 血清型鑒定及細(xì)菌毒素試驗(yàn) 將待檢菌株接種于營養(yǎng)斜面，37℃培養(yǎng)24h，用生理鹽水制成濃菌液。均參照中國獸藥監(jiān)察所抗O血清試劑說明書操作。

將純種菌接種于普通肉湯內(nèi)常溫培養(yǎng)24h，菌液先用比濁法進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后倍比稀釋。取不同濃度菌液涂布平板培養(yǎng)24h后進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后將菌液稀釋至18億CFU/mL備用。將備制的菌液用0.22μm濾膜過濾，取無菌液尾靜脈注射小白鼠，0.1mL/只，注射5只；空白對照組5只，注射滅菌肉湯（0.1mL/只），觀察注射后的小白鼠發(fā)病及死亡癥狀，對死亡的立即剖檢，并取肝、脾、淋巴結(jié)等涂片鏡檢。

2.5 動物致病性試驗(yàn) 將以上菌液腹腔注射小白鼠，0.2mL/只，對照組腹腔注射普通肉湯0.2mL/只。對注射后的小白鼠進(jìn)行隔離飼養(yǎng)并觀察其發(fā)病及死亡情況，對死亡的立即進(jìn)行剖檢，并取肝、脾、淋巴結(jié)等涂片鏡檢。

2.6 結(jié)果

2.6.1 細(xì)菌分離及形態(tài) 從14個(gè)疑似病料樣品中分離到大腸桿菌12株，在血瓊脂上均可見明顯的溶血現(xiàn)象。分離菌為革蘭氏陰性，兩端略圓、中等大小的桿菌，無芽孢單個(gè)存在。

2.6.2 生化及培養(yǎng)特性 參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》的判定標(biāo)準(zhǔn)，分離菌均符合大腸埃希氏菌的特征；分離菌為兼性厭氧菌，在巧克力瓊脂平板上形成邊緣整齊的白色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上形成黑色帶金色的菌落，在普通肉湯培養(yǎng)基內(nèi)生長的液體渾濁，管壁有菌環(huán)。

2.6.3 血清型鑒定結(jié)果 共有6個(gè)血清型，其中O139有 3株（LC、TX、XQ），O138有 4株（HQ、HD、GX、YZ），O48有 2株（GL、QX），O8、O54、O141 各有 1株（分別是 LJ、HX、DS）。

一般認(rèn)為，仔豬大腸桿菌感染通常以出生仔豬的黃痢、哺乳仔豬的白痢以及斷奶前后的水腫病這3種形式出現(xiàn)，而我們分離菌株的病豬所表現(xiàn)的癥狀和剖檢變化也明顯有別于仔豬黃痢、白痢和水腫病，提示該菌株不同于引起豬大腸桿菌病的大腸埃希氏菌的某些血清型，可能另有所屬。對照《中國人獸共患病學(xué)》有關(guān)資料記載，認(rèn)定該病原屬出血性大腸桿菌這一群。

2.7 診斷 根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化及上述病原分離結(jié)果，初步認(rèn)定該病屬出血性大腸桿菌引起的腹瀉病。

2.8 藥敏試驗(yàn) 取典型菌落均勻涂布于普通瓊脂平板上進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果該菌對氯霉素、丁胺卡那、環(huán)丙沙星高敏，對磺胺嘧啶、土霉素中敏，對青霉素、氨芐青霉素、鏈霉素低敏。

2.9 防治

2.9.1 西醫(yī)治療 立即將圈舍清洗干凈并用1%百毒殺消毒，停喂飼料半天。每頭豬口腔灌注0.1%高錳酸鉀溶液20mL；每頭豬腹腔注射5%葡萄糖氯化鈉20mL；每頭豬肌注“6542”注射液5mg；板蘭根注射液10mL+維生素B125mL+100萬單位鏈霉素1支，靜脈注射。

2.9.2 中醫(yī)療法 中藥組方：焦山楂20g、焦六曲20g、牡蠣 30g、半支蓮 30g、垂盆草 30g、雞骨草 10g、黃芪50g、白芍 30g、熟地 30g、甘草 15g、茵陳 20g、薏苡仁15 g、陳皮20 g，共研細(xì)末拌料飼喂，每日一次，連用3 d。效果：當(dāng)天止瀉，3d后痊愈。

3 小結(jié)與討論

3.1 豬大腸桿菌病是危害仔豬生長發(fā)育的常見病、多發(fā)病，是引起仔豬死亡的主要原因之一。臨床上對該病的治療通常使用抗生素，如：痢菌凈、鏈霉素、慶大霉素、痢特靈、環(huán)丙沙星等藥。而常見病原菌耐藥菌的傳播又使很多抗生素在治療該疾病時(shí)效果不明顯，常引發(fā)人們過量用藥的錯誤治療行為，致使細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)或出現(xiàn)大量變異菌株，從而加重了病原耐藥菌的傳播，對畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的影響，且嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。目前防治此類疾病的藥品往往都是偏重治療且功效單一，雖能解決一些問題，但卻忽視了整體性及相關(guān)器官功能的平衡與協(xié)調(diào)關(guān)系，并容易因此掩蓋其他問題甚至是實(shí)質(zhì)性問題，進(jìn)而導(dǎo)致更嚴(yán)重的后果。

3.2 口腔灌注0.1%高錳酸鉀溶液20mL，是為了凈化胃腸環(huán)境；停止采食半天，是為了讓腸胃充分休息以及恢復(fù)、調(diào)整腸胃功能。

3.3 本中藥組方藥理是：焦山楂、焦六曲、薏苡仁、陳皮、雞骨草、甘草有健脾、養(yǎng)胃、助消化等作用，主治食積腹脹、菌痢腹瀉；半支蓮、垂盆草、雞骨草有清熱解毒、涼血消腫等作用，主治急慢性肝炎；黃芪有補(bǔ)氣固表、生肌利尿等作用。

3.4 本中藥組方打破了傳統(tǒng)的以痢治痢的治療方法，通過提高脾胃的運(yùn)化功能達(dá)到燥濕、健脾、保肝、潤腸的功能，對腸黏膜有收斂和吸附作用，從而有效地保護(hù)消化道黏膜減少細(xì)菌毒素及食物異常發(fā)酵產(chǎn)物的侵蝕，使炎癥得以緩解，達(dá)到清熱解毒、開胃消積、祛濕健脾、保肝止瀉的目的。充分體現(xiàn)了中醫(yī)藥的整體觀念和優(yōu)勢，使藥效和功能更為全面達(dá)到標(biāo)本兼治，從而拓開了中醫(yī)藥辯癥施治的具體內(nèi)容和應(yīng)用范圍。

3.5 中藥在我國資源豐富，應(yīng)用歷史悠久，價(jià)格低廉，并具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調(diào)節(jié)和提高生產(chǎn)性能等多方面作用，且毒副作用小，在治療仔豬腹瀉方面，能與抗生素媲美，它一般不受大腸桿菌血清型的影響，不存在耐藥性問題。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中作為抗生素的替代品，在營養(yǎng)、保健、提高免疫力、抗應(yīng)激、抗氧化和改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等多方面的應(yīng)用已越來越受到人們的重視。而傳統(tǒng)的對仔豬進(jìn)行抓捕注射，不僅勞動強(qiáng)度大，還易對病豬造成各種應(yīng)激反應(yīng)；中藥喂服投藥簡便省工、安全實(shí)惠，療程短、療效高、保護(hù)率高、克服了打針灌藥的困難，易于在生產(chǎn)中推廣。

3.6 仔豬消化道未發(fā)育成熟，消化機(jī)能不健全、消化腺不發(fā)達(dá)，體溫調(diào)節(jié)及應(yīng)急能力差，再加上飼養(yǎng)管理粗放、圈舍骯臟潮濕導(dǎo)致仔豬消化機(jī)能紊亂是引發(fā)本病的主要原因。病豬喜舔食糞便污水，致使病原體在整個(gè)消化道形成惡性循環(huán)，故而必須首先清理胃腸。

3.7“6542”注射液有抑制腺體分泌、解除胃腸平滑肌痙攣的作用，因此運(yùn)用該藥治療在本案中能起到很好的協(xié)同療效。

3.8 長期劇烈的腹瀉使機(jī)體體液減少，鈉離子大量喪失，體內(nèi)電解質(zhì)失衡，引起機(jī)體等滲性脫水，因此必須補(bǔ)水。引起腹瀉的原因很多，有細(xì)菌性、病毒性、寄生蟲性等，往往是混合存在相互促進(jìn)誘發(fā)，因此治療時(shí)必須有一個(gè)綜合全面的措施。

4 結(jié)語

本病只要正確診斷，及時(shí)做好中西醫(yī)結(jié)合治療，采取消毒隔離、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等綜合性防治措施，是可以控制的。建議獸醫(yī)人員在實(shí)際工作中應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行病死豬的剖檢，特別是在基層化驗(yàn)條件有限的情況下，此項(xiàng)工作對任何疾病的診斷尤為重要。

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