鼻咽癌血清或血漿標(biāo)志物研究進(jìn)展

周 丹綜述，何進(jìn)才審校

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳附屬醫(yī)院 深圳市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518033)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是發(fā)病率居首位的頭頸部惡性腫瘤，具有高度的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，好發(fā)于中國(guó)南部，特別是廣東為世界發(fā)病率最高的地區(qū)。大多數(shù)文獻(xiàn)研究認(rèn)為其發(fā)病與遺傳易感性、EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)慢性感染及環(huán)境暴露等相關(guān)，國(guó)際癌癥研究中心1999年對(duì)致癌因子的分類標(biāo)準(zhǔn)中，EB病毒已經(jīng)被明確列為人類致癌(尤其是鼻咽癌)因子之一[1]。目前最新研究還顯示miRNA與鼻咽癌亦存在緊密關(guān)聯(lián)。由于鼻咽部解剖位置隱蔽，鼻咽癌臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，早期癥狀不典型，極易漏診。因此，尋找高度敏感而特異的血清或血漿標(biāo)志物，對(duì)于提高鼻咽癌的診治水平具有重要臨床意義。本文就近年來鼻咽癌血清或血漿標(biāo)志物應(yīng)用研究進(jìn)展做一綜述。

1 與鼻咽癌相關(guān)的基因及其表達(dá)產(chǎn)物

鼻咽癌是一種多基因遺傳性疾病，其發(fā)生可能涉及多個(gè)細(xì)胞分裂、分化和凋亡相關(guān)的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的中斷，是癌基因、抑癌基因和調(diào)控基因等綜合作用的過程，同時(shí)還與遺傳和環(huán)境因素相關(guān)。研究已經(jīng)證實(shí)鼻咽癌的發(fā)生與多個(gè)基因的表達(dá)改變有關(guān)，如 c-myc、MDM2、p53、Ha-ras在鼻咽癌患者鼻咽部組織中高表達(dá)[2]。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道，c-myc和bcl-2蛋白可作為反映鼻咽癌放療效果和判斷預(yù)后的標(biāo)志物[3]。崔曉波等[4]在鼻咽癌相關(guān)腫瘤抗原基因篩選及鑒定研究中提到，通過篩選、鑒定所獲得的15個(gè)陽性克隆中，包括MAGE基因、CREM基因、β-2微球蛋白、核糖體蛋白等已知基因或EST，這些基因的表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，同時(shí)特別指出鼻咽癌患者中NPC-14、NPC-18表達(dá)抗體陽性率較高，表明這些基因表達(dá)產(chǎn)物具有較高的腫瘤特異性，有可能作為診斷鼻咽癌的血清分子標(biāo)志物。國(guó)內(nèi)有資料列舉了可能與鼻咽癌相關(guān)的癌基因(TX、NAG23/FBXO30、NAG18、c-erbB-2、met、bcl-2、Her2) 和抑癌基因 (NP9、ING1、FHIT、UBAP1、NGX6、NAG7、P35、P16、Rb)[5]，這些基因及其表達(dá)產(chǎn)物均可能成為鼻咽癌標(biāo)志物，有待我們進(jìn)一步研究。

2 與EB病毒相關(guān)的鼻咽癌標(biāo)志物

自從1966年Old等首次用免疫擴(kuò)散試驗(yàn)證明EB病毒和鼻咽癌的血清學(xué)有關(guān)以來，國(guó)內(nèi)外對(duì)EB病毒作了大量研究。EB病毒及其基因表達(dá)的相關(guān)抗原和抗體以及重組的EB病毒抗原成為研究鼻咽癌病因和相關(guān)血清標(biāo)志物的重要研究方向。

2.1 針對(duì)EB病毒抗原的特異性抗體檢測(cè)

EB病毒基因表達(dá)的蛋白比較復(fù)雜，在潛伏期病毒不進(jìn)行復(fù)制，細(xì)胞主要合成核心抗原(EB virus associated nuclear antigen,EBNA)和潛伏膜蛋白(latent membrane protein，LMP)，在裂解期病毒基因完全表達(dá)，細(xì)胞主要合成早期膜抗原、早期細(xì)胞內(nèi)抗原(early intracellular antigen，EA)，衣殼抗原(EB virus capsid antigen，VCA)。在臨床上和前瞻性流行病學(xué)調(diào)查中，用血清學(xué)方法檢測(cè)EB病毒特異性抗體，是早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌病人的重要手段。

2.1.1 臨床常用的EB病毒血清抗體

目前已廣泛用于臨床的有血清VCA-IgA、VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgA、EA-IgG、EBNA-I-gA、EBNA-IgG等抗體的檢測(cè)。周鷹[6]等在血清EB病毒抗體檢測(cè)對(duì)鼻咽癌的臨床診斷價(jià)值研究中報(bào)道，3562例就診患者中，確證鼻咽癌患者(試驗(yàn)組)145例，檢測(cè)VCA-IgA陽性率達(dá)91.0%，3507例非鼻咽癌患者 (對(duì)照組)中VCA-IgA檢測(cè)陽性率為18.9%，說明VCA-IgA檢測(cè)具有較高靈敏度，但仍有一部分鼻咽癌患者表現(xiàn)為陰性，如在分化好的鱗狀細(xì)胞癌患者中VCA-IgA并不表現(xiàn)為陽性，而在部分VCA-IgA陽性的患者并不表現(xiàn)為鼻咽癌，可見單獨(dú)一項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)不宜作為鼻咽癌的診斷指標(biāo)。EA-IgA，EA-IgG抗體的靈敏度低于VCAIgA，但特異度高于VCA-IgA，三項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合測(cè)定能夠有效地降低漏診率和誤診率，對(duì)于其中任意兩項(xiàng)陽性的患者成為高危人群，醫(yī)師應(yīng)高度重視。

2.1.2 抗EB病毒特異性胸腺嘧啶脫氧核苷激酶(TK)抗體

TK是一種催化胸苷磷酸生成胸苷酸的酶，在DNA的合成調(diào)控中起重要作用。Connolly等[7]用ELISA法檢測(cè)人血清中針對(duì)EB病毒編碼TK的IgA抗體，證實(shí)此抗體是一個(gè)良好的鼻咽癌標(biāo)志物，與VCA-IgA和EA-IgA相比，具有更高的檢測(cè)靈敏度和相似或更高的特異性。

2.1.3 抗EB病毒編碼的Z蛋白(Zebra)抗體和Rta蛋白抗體

Zebra蛋白是調(diào)節(jié)EB病毒從潛伏狀態(tài)進(jìn)入復(fù)制狀態(tài)的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，Rta蛋白是EB病毒進(jìn)入裂解復(fù)制狀態(tài)必需的激活元件，研究表明二者在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。Dardari等[8]研究報(bào)道聯(lián)合檢測(cè) Zebra–IgG、VCA-IgA、EA-IgA 等可早期診斷鼻咽癌，還發(fā)現(xiàn)大部分EA-IgA陰性者Zebra–IgG滴度很高，尤其是年輕患者，進(jìn)而推測(cè)Zebra–IgG可作為年輕鼻咽癌患者的生物標(biāo)記物。湯敏中等[9]在鼻咽癌高發(fā)區(qū)采用ELISA法對(duì)鼻咽癌新發(fā)病例進(jìn)行血清中Zebra–IgG抗體檢測(cè)，研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組(試驗(yàn)組)Zebra–IgG抗體檢出率達(dá)92.7%，VCA-IgA抗體陽性及 EB病毒VCA-IgA抗體陰性兩組非癌對(duì)照組中，Zebra–IgG陽性率分別為14.8%和2.0%，證實(shí)重組的Zebra–IgG抗體有良好的特異性和靈敏度，作為鼻咽癌血清學(xué)診斷指標(biāo)有良好的應(yīng)用前景。任軍等[10]在以Rtac2/3為抗原用于鼻咽癌病人檢測(cè)的初步研究中證實(shí)，抗Rta-IgG可以作為診斷鼻咽癌的標(biāo)志物，其與Zebra抗體檢測(cè)聯(lián)合使用，可以進(jìn)一步提高鼻咽癌篩選和診斷的特異性和靈敏度。

2.2 EB病毒DNA

近年來大量研究證實(shí)，EB病毒DNA是一種良好的鼻咽癌標(biāo)志物，可廣泛用于鼻咽癌早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測(cè)、預(yù)后判斷等各個(gè)方面。鼻咽癌患者血液循環(huán)中的EB病毒DNA是一種游離的DNA片斷，并不是完整的病毒顆粒。Chan和Lo通過定量分析研究后發(fā)現(xiàn)約80%的這種DNA片斷長(zhǎng)度在180bp以內(nèi)，通過檢測(cè)血漿DNA水平來進(jìn)行診斷鼻咽癌以及觀察療效明顯優(yōu)于外周血細(xì)胞中EB病毒DNA[11]。買世娟等[12]以BamH1W片段為模板進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在鼻咽癌患者的血漿或血清中EB病毒DNA檢出率為84.85%，明顯高于健康人(10.34%)。血漿或血清EB病毒DNA檢測(cè)方法的敏感度高于VCA-IgA(1:40)檢測(cè)，特異性相同。血漿或血清EB病毒DNA和VCA-IgA(1:40)雙陽性的正確率、陽性試驗(yàn)預(yù)測(cè)值和優(yōu)勢(shì)比單獨(dú)血漿或血清EB病毒DNA或單獨(dú)檢測(cè)VCA-IgA高。曹素梅等[13]在血漿EB病毒游離DNA檢測(cè)對(duì)檢測(cè)鼻咽癌患者預(yù)后的意義的研究中證實(shí)，不同預(yù)后患者的血漿EBV-DNA含量中位數(shù)有顯著性差異，預(yù)后越差者其EBA-DNA水平越高，而VCA-IgA、EAIgA的水平卻未見有明顯變化。國(guó)外也有報(bào)道血漿EBV-DNA診斷鼻咽癌的靈敏度和特異性分別為96%和93%，并可用于鼻咽癌分期、預(yù)測(cè)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等檢測(cè)。Leung[14]在163例鼻咽癌患者和178例正常人對(duì)照組中通過聯(lián)合檢測(cè)EB病毒DNA和VCA-IgA兩種鼻咽癌血清標(biāo)志物得出結(jié)論，單獨(dú)檢測(cè)EB病毒DNA和VCA-IgA的敏感性分別為95%和81%，而二者聯(lián)合檢測(cè)后敏感性達(dá)99%，并且在36例VCA-IgA檢測(cè)陽性的正常人中，通過EB病毒DNA檢測(cè)還鑒定出其中27例VCA-IgA為假陽性，由此可知，兩種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)大大提高了鼻咽癌篩查的準(zhǔn)確性。

3 與鼻咽癌相關(guān)的微小RNA(micro RNA)

微小RNA(micro RNA)是一種內(nèi)源性非編碼小RNA，調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化、增殖和凋亡，影響疾病的發(fā)生發(fā)展。國(guó)內(nèi)外已有多項(xiàng)研究表明，miRNA在患者血液和尿液等體液中有表達(dá)，與腫瘤等疾病有關(guān)，可能扮演著分子標(biāo)志物的角色[15]。目前觀點(diǎn)認(rèn)為循環(huán)miRNA可能是來自于凋亡和壞死的細(xì)胞，細(xì)胞的主動(dòng)釋放，或者循環(huán)細(xì)胞的裂解。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)研究表明，血清中miRNA比較穩(wěn)定，血清中miRNA不但可以抵抗酶的消化，而且耐酸耐堿，更不受溫度變化及留置時(shí)間的影響，比一般的蛋白更適宜作為腫瘤標(biāo)志物，對(duì)腫瘤患者診斷具有較好的敏感性及特異性，加上取材的相對(duì)無創(chuàng)性，顯示出了其作為腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)[16-17]。

羅鵬輝等[18]研究報(bào)道m(xù)iR29c在鼻咽癌患者血清中低表達(dá)，可能與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，在研究鼻咽癌的早期診斷、預(yù)后判斷以及基因治療方面可能具有重要價(jià)值。多項(xiàng)研究表明miR29c在鼻咽癌細(xì)胞中低表達(dá)，抑制VEGF、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等表達(dá)，阻止鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移[19-21]。因此在鼻咽癌血漿或血清標(biāo)志物的研究中，尋找和驗(yàn)證鼻咽癌特異性miRNA是我們努力的方向。此外，與腫瘤發(fā)生相關(guān)的一些糖類物質(zhì)、糖蛋白、氨基酸及其代謝產(chǎn)物、細(xì)胞因子、細(xì)胞分化抗原等也被運(yùn)用于鼻咽癌的輔助診斷。如血清唾液酸(SA)，有研究報(bào)道EBVCA-IgA聯(lián)合SA檢測(cè)，可明顯提高鼻咽癌患者的陽性檢出率，也可以作為鼻咽癌病情變化的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)[22-23]。又如骨橋蛋白(OPN)，其與鼻咽癌晚期轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有望作為一種檢測(cè)鼻咽癌發(fā)病和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物[24]。再如腫瘤相關(guān)物質(zhì)群 (TSGF)、細(xì)胞角蛋白19的片段(Cyfra21-1)，可用于廣譜腫瘤的篩查，但是這兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可明顯提高鼻咽癌陽性檢出率，也可用于評(píng)估鼻咽癌的預(yù)后和監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移[25-27]。也有資料顯示 CD10、CD80、CD86、CD138 等 CD 分子的表達(dá)與鼻咽癌的預(yù)后密切相關(guān)，有可能成為評(píng)價(jià)其預(yù)后和療效的標(biāo)志物[28-30]。

隨著新方法、新技術(shù)的應(yīng)用，不斷地有新的鼻咽癌標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)和運(yùn)用，但是對(duì)于在不同臨床分級(jí)和分期鼻咽癌如何選擇合適的標(biāo)志物還待我們?nèi)パ芯亢涂偨Y(jié)，同時(shí)我們也可以看到單一的標(biāo)志物檢測(cè)存在不同程度的缺陷，選擇幾種合適的鼻咽癌標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于提高鼻咽癌的診治水平十分必要。尋找更加敏感而特異的血清或血漿標(biāo)志物，如miRNA可能也將是我們今后努力的方向。

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