中成藥中非法添加吲哚美辛檢測(cè)方法的研究

楊景柳

（北京市房山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，北京 102400）

·論 著·

中成藥中非法添加吲哚美辛檢測(cè)方法的研究

楊景柳

（北京市房山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，北京 102400）

目的探討并建立中成藥中非法添加吲哚美辛的檢測(cè)方法。方法采用化學(xué)反應(yīng)鑒別方法及薄層色譜法，對(duì)抗風(fēng)濕類中成藥中非法添加的吲哚美辛進(jìn)行快速檢測(cè)，并采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)果化學(xué)反應(yīng)鑒別及薄層色譜法檢測(cè)抗風(fēng)濕類中成藥中非法添加的吲哚美辛重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，HPLC法吲哚美辛對(duì)照品線性范圍79.5～715.5mg/L（r=0.999 8），平均回收率為99. 27%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.08%（n=6）。結(jié)論采用化學(xué)反應(yīng)鑒別方法及薄層色譜法對(duì)中成藥中非法添加的吲哚美辛進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單、方便，且專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可作為中成藥中非法添加吲哚美辛的初步檢測(cè)。

中成藥；吲哚美辛；色譜法，薄層

處理時(shí)間長(zhǎng)，有諸多不便，因此，中成藥便成了人們的首選［1］。為了提高中成藥的治療效果，部分中成藥制劑中添加了化學(xué)藥品，嚴(yán)重威害了人們的用藥安全。吲哚美辛具有止痛和消炎的特性，但易導(dǎo)致消化性潰瘍、出血、穿孔、高鉀血癥、高鈉血癥、高血壓等不良反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡［2］。研究人員從市場(chǎng)中抽檢的中成藥樣品中含有吲哚美辛。本研究采用化學(xué)鑒別方法及薄層色譜法，對(duì)模擬添加了吲哚美辛的抗風(fēng)濕類中成藥進(jìn)行檢測(cè)，并以高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法進(jìn)一步驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥：高效液相色譜儀（Agilent 1200型），紫外檢測(cè)器（G1314BVWD），Agilent LC系統(tǒng)化學(xué)工作站；高效液相色譜儀（Waters 1525型），紫外檢測(cè)器（Waters 2487），Breeze3.0化學(xué)工作站；電子天平（德國BP211DSartorius）和FAl004電子天平均為萬分之一；SK250LHC型超聲波清洗器；929型薄層鋪板儀，20%氫氧化鈉溶液，0.03%重鉻酸鉀溶液，0.1%亞硝酸溶液［3］；色譜純，乙腈，甲醇；分析純。

1.2 試驗(yàn)用樣品：風(fēng)濕定膠囊，小活絡(luò)丸及舒筋活血片，將一次服用量加入約1/10的2.5mg吲哚美辛研細(xì)作為自制陽性樣品。市場(chǎng)抽得的風(fēng)濕定膠囊、腰息痛膠囊、風(fēng)痛安膠囊、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎片、小活絡(luò)丸、骨龍膠囊及舒筋活血片作為試驗(yàn)用陰性樣品。

1.3 化學(xué)鑒定方法

1.3.1 試驗(yàn)方法：膠囊劑、顆粒劑、片劑或丸劑供試品者，取1次最大服用量研細(xì)，然后加10mL氯仿進(jìn)行超聲處理5min，靜置約10min，然后過濾，蒸干濾液；口服液供試品者，取10mL置分液漏斗中，加入40mL氯仿分2次萃取，分取氯仿液蒸干。取上述殘?jiān)铀?0mL，并加入2滴氫氧化鈉溶液即制得供試液［4］；取3mL制得的供試液，加0.3mL重鉻酸鉀溶液，加熱至溶液沸騰，放冷后加3滴硫酸，置水溶上加熱，若溶液顯示為紫色，則判定其中有可能含有吲哚美辛［5］。另取3mL供試液，加0.3mL亞硝酸鈉溶液，同法加熱至溶液沸騰并放冷，然后加入0.5mL鹽酸，溶液即刻變成綠色，放置約3min后，漸變成黃色，則判定其中有可能含有吲哚美辛。對(duì)于可疑吲朵美辛陽性的應(yīng)采用薄層色譜法和HPLC法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.2 方法驗(yàn)證

1.3.2.1 樣本的干擾試驗(yàn)：取陰性樣品按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)后，結(jié)果均呈陰性，即判斷樣品中不含有吲朵美辛。取自制陽性樣品按照上述試驗(yàn)方法中的方法進(jìn)行試驗(yàn)后，結(jié)果均呈陽性，即判斷樣品中可能含有吲朵美辛。

1.3.2.2 方法的專屬試驗(yàn)：取1/3服用量的萘普生、保泰構(gòu)、吲哚美辛、布洛芬及美洛昔康的對(duì)照品，按上述方法進(jìn)行試驗(yàn)［6］。

1.3.3 薄層色譜法

1.3.3.1 供試品溶液的制備：取一次服用量的樣品研細(xì)，置入50mL錐形瓶中（有瓶塞），將10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取3mL濾液濃縮至1mL，即制得供試品溶液。

1.3.3.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取適量吲朵美辛對(duì)照品，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），制成每1mL混合溶液中含1mg吲哚美辛的溶液即對(duì)照品溶液［7］。

1.3.3.3 陽性對(duì)照溶液的制備：取一次服用量自制陽性樣品加約 10mg對(duì)照品適量，研細(xì)，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取3mL濾液濃縮至1mL，即制得陽性對(duì)照溶液。

1.3.3.4 陰性對(duì)照溶液的制備：取一次服用量的陰性樣品研細(xì)，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取濾液即制備陰性對(duì)照溶液。

1.3.4 高效液相色譜法

1.3.4.1 色譜條件：Kromasil C18柱為色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈（57）/冰醋酸溶液（43）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm；流速為1.0mL/min，柱溫為25℃；理論板數(shù)6 901；T 0.985。

1.3.4.2 供液品溶液的制備：取一次服用量的片劑或丸劑供試品研細(xì)，加入15mL甲醇超聲提取，10min后濾過，取濾液置于25mL量瓶中，加適量流動(dòng)量稀釋至刻度，混勻，即制備供試品溶液。取一次服用量膠囊內(nèi)容物研細(xì)，以同法制得。

1.3.4.3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取適量吲朵美辛對(duì)照品，加甲醇超聲溶解，制備300mg/L對(duì)照品貯備液，取3mL置于10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻。

1.3.4.4 線性關(guān)系考察：取1、3、5、7、9mL吲哚美辛對(duì)照品貯備液（0.795ng/L），置于10mL量瓶中，加入流動(dòng)量稀釋至刻度，混勻，分別取10μL注入高液液相色譜儀，以濃度和峰面積分別作為橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

1.3.4.5 精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液進(jìn)樣6次，并測(cè)定峰面積。

1.3.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)：取自制陽性品6份，制得供試品溶液，分別測(cè)定峰面積。

1.3.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取自制陽性樣品6份，制得供試品溶液，在0、0.5、1、3、5、24min時(shí)分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。

1.3.4.8 空白試驗(yàn)：取陰性樣品制得供試品溶液，按要求注入液相色譜儀。

1.3.4.9 回收率試驗(yàn)：精密稱取適量陰性樣品，加入約10mg吲朵美辛對(duì)照品，制備供試品溶液，測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。

2 結(jié) 果

2.1 方法驗(yàn)證結(jié)果：吲朵美辛呈陽性，其他均呈陰性，即本試驗(yàn)方法檢測(cè)吲朵美辛專屬性強(qiáng)。

2.2 薄層色譜法結(jié)果：經(jīng)陰性對(duì)照試驗(yàn)及20批樣品試驗(yàn)觀察［8］，確認(rèn)本法可行。

2.3 高效液相色譜法結(jié)果：Y=2.750 876×10X+ 4.850 003×10，r=0.999 8，吲朵美辛對(duì)照品濃度在79.5～715.5mg/L時(shí)，線性關(guān)系良好。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為0.20%，即本法精密度良好。RSD為0.51%，即本法重復(fù)性良好。RSD為0.36%，即本法穩(wěn)定性良好。對(duì)照品溶液成分色譜峰的位置上未出現(xiàn)其他色譜峰，即在該色譜條件下，雜質(zhì)無干擾。平均回收率為99.27%，RSD為1.08%（n=6）。

3 討 論

根據(jù)吲哚美辛在各種溶液中的溶解性情況，分別對(duì)氯仿、丙酮與乙醇及丙酮與乙醇的混合液作為提取劑進(jìn)行考察。由于抗風(fēng)濕類中成藥成分較為復(fù)雜，干擾因素眾多，而氯仿提取的樣品相對(duì)其他提取劑而言，干擾相對(duì)較少，因此，本研究采用氯仿作為提取溶劑，以使提取出來的吲朵美辛干擾成分盡可能減少［9］，而且使提取過程變得更為簡(jiǎn)單，易于操作，適于在基層開展快速檢測(cè)。本研究結(jié)果顯示，超聲在3min以上，勻在5min以上，即超聲效果較好，由于吲朵美辛可以略溶于氯仿，本研究便將超聲時(shí)間設(shè)置為5min，以使吲朵美辛提取更為完全。研究［10］表明，吲哚美辛的氫氧化鈉與重鉻酸鉀溶液可與硫酸反應(yīng)，呈紫色；與亞硝酸鈉及鹽酸溶液反應(yīng)先呈綠色，可漸變至黃色。這也是本研究判斷樣品中是否含有吲朵美辛的理論依據(jù)。

在本研究中取吲哚美辛對(duì)照品加適量甲醇超聲溶解，再加適量流動(dòng)相制成濃度為13mg/L的溶液，并設(shè)相應(yīng)的空白對(duì)照溶液進(jìn)行分光光度測(cè)定時(shí)，在200～400nm范圍內(nèi)掃描得到的紫外線吸收?qǐng)D譜顯示吲哚美辛在波長(zhǎng)為257nm時(shí)有最大吸收，故選擇257nm為分析波長(zhǎng)。

綜上所述，采有化學(xué)反應(yīng)鑒別方法及薄層色譜法和HPLC法可對(duì)抗風(fēng)溫類中成藥中的吲哚美辛成分進(jìn)行初步篩查，操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)性性好，專屬性強(qiáng)，但是若要明確結(jié)論，還需要對(duì)可疑組分提取純化并進(jìn)行鑒定［11］。

［1］ 徐軍輝，李存金，王仕平，等.中成藥中非法添加化學(xué)藥品吲哚美辛檢測(cè)方法的研究［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11（6）：416-420.

［2］ 徐軍輝，李存金，王仕平，等.中成藥中非法添加吲哚美辛檢測(cè)方法的研究［J］.中國藥事，2010，24（9）：894-897.

［3］ 李文霞，朱妙飛，陳勇，等.DAD光譜庫在中成藥非法添加化學(xué)成分檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.中國藥師，2011，14（3）：321-324.

［4］ 呂長(zhǎng)淮.吲哚美辛片有關(guān)物質(zhì)檢查方法改進(jìn)［J］.中國藥房，2007，18（28）：2216-2217.

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［7］ 周艷，胡琳，張宏祥，等.檢查天麻膠囊中添加吲哚美辛的方法研究［J］.中國藥事，2006，20（10）：612-613.

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［10］ 張曉璐，戴夕娣，丁建.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方吲哚美辛乳膏中吲哚美辛的含量［J］.藥物分析雜志，2007，27（8）：1269.

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（本文編輯：趙麗潔）

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1007-3205（2012）09-1089-03目前，多數(shù)人認(rèn)為中藥不良反應(yīng)小，所以許多人應(yīng)用中藥治療疾病，但是一般中藥需要熬制成湯劑，

2012-07-03；

2012-08-30

楊景柳（1968-），男，北京人，北京市房山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院副主任藥師，從事藥學(xué)管理研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.040