正交設(shè)計優(yōu)選活血貼的最佳提取工藝

張曉旭，張英華，王 沛*

(1.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006;2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

活血貼是以當歸、透骨草、伸筋草、劉寄奴、川芎、草烏、花椒、防風(fēng)、姜黃、紅花、威靈仙、艾葉等為主要原料制成的復(fù)方純中藥組成的醫(yī)院制劑,具有活血化瘀的功效[1]。本研究采用正交設(shè)計方法，以方中主藥當歸中的阿魏酸含量為參考指標對該臨床組方的提取工藝進行了研究。

1 儀器與試劑

電光分析天平，HC-TP11-2型，上海精科天平廠；數(shù)顯恒溫水浴鍋，HH-2型，國華電器有限公司；循環(huán)水多用真空泵，型號:SHB-3，鄭州杜甫儀器廠；紫外-可見分光光度計TU-1810，北京普析通用儀器有限公司；紅外干燥箱WS70-2，國華電器有限公司。處方中飲片均購自吉林北藥藥材采購站，所用中藥飲片特請長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室老師鑒定，所用藥品均符合《中國藥典》2010年版所載之藥用科屬種。阿魏酸對照品(批號：001100-99060)，購于中國藥品生物制品檢定所。乙醇(無水乙醇)，500 mL，分析純，20100820，北京化工廠。乙醇(95%)，500 mL，分析純，20110816，北京化工廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 標準曲線的繪制 對照品溶液制備：取阿魏酸對照品在105 ℃下干燥至恒重，取適量，精密稱量，放于25 mL容量瓶中，加少許無水乙醇溶解，添加無水乙醇至所需劑量,搖勻。得0.100 mg/mL的對照品溶液。分別精密吸取阿魏酸對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別加無水乙醇定容至10 mL，搖勻。分別以無水乙醇為空白溶液，在305同nm波長下，分別測定相應(yīng)的吸光度值，并以吸光度值為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線并進行回歸處理。得線性關(guān)系曲線為Y=1.529 0X+0.031 5，r=0.998 8，式中Y為吸光度值,X為濃度。結(jié)果表明,待測物質(zhì)即在0.01～0.05 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.2 精密度實驗 按繪制標準曲線的方法，分別精密量取阿魏酸對照品溶液0.3 mL共6分，按上述操作進行,測定吸收度值，結(jié)果RSD為0.165%(n=6)，表明實驗結(jié)果重現(xiàn)性較好,所得數(shù)據(jù)精確。

2.3 組方中阿魏酸的含量測定 稱取組方量藥材適量，經(jīng)提取，取趁熱過濾，合并之濾液，回收乙醇至無醇味，敞口揮發(fā)乙醇，待乙醇揮干后，取殘渣,向其中加入無水乙醇20 mL，充分溶殘渣，過濾，濾液定容至25 mL。按2.2項下，以無水乙醇為空白溶液，在λ=305 nm波長下，測定相應(yīng)的吸光度值。

2.4 提取工藝條件篩選 按處方量稱取當歸、透骨草、伸筋草、劉寄奴、川芎、紅花等150 g，共9分，設(shè)定乙醇濃度(A)、乙醇加入量(B)、提取時間(C)和提取次數(shù)(D)為考察指標因素，按L9(34)正交表(見表1)設(shè)計實驗，實驗結(jié)束后,按2.3項下測定組方中阿魏酸的含量。

篩選結(jié)果：A2B3C3D370%乙醇8倍量，每次2 h，提取3次。

2.5 重現(xiàn)性實驗 取同一批樣品,按2.3項下阿魏酸的含量測定方法平行測定5分。平均吸收度值為0.412，RSD=0.103%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)論

直觀分析表明，本實驗研究設(shè)計合理[4-5]，數(shù)據(jù)真實，結(jié)果可信。綜合考慮生產(chǎn)實際情況，因試驗指標(阿魏酸和出膏率)產(chǎn)量越大越好,因素A水平2的值最大，所以A因素取水平2好；類似分析，因素B取水平3好,但兼顧低碳、節(jié)能、時間等因素，取水平1；同理，因素C、因素D均為次要因素，出于同樣考慮,因素C取水平1,因素D取水平2。從而得到最佳試驗方案為A2B1C1D2，即加70%乙醇4倍量，每次提取1 h提取2次。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.426.

[2]顧曉路,梁茂新.安眠顆粒結(jié)構(gòu)優(yōu)化的步驟與方法[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2008,14(6):22-24.

[3]劉齊林,李雪婷,王沛,等.正交設(shè)計優(yōu)選痛風(fēng)寧的最佳提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011.38(5):959-960.

[4]王沛.制藥工藝學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2009:72.

[5]陸守曾.高等數(shù)學(xué)(下冊)[M].上海:上?？萍汲霭嫔?2006:223-236.