HCV 實(shí)驗(yàn)動物模型研究進(jìn)展

陶萬銀，張 巖，鐘 勁

HCV 屬于黃病毒科，是一種有包膜的正鏈RNA病毒。HCV 感染人肝細(xì)胞，導(dǎo)致慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌。目前尚無疫苗可供預(yù)防。治療慢性丙型肝炎（丙肝）的標(biāo)準(zhǔn)方案為長效干擾素聯(lián)合利巴韋林，療效還有待提高。

HCV 的實(shí)驗(yàn)動物模型不僅是HCV 免疫學(xué)、病理學(xué)和病毒學(xué)等基礎(chǔ)科學(xué)的重要研究手段，還為HCV 疫苗和創(chuàng)新藥物的研發(fā)提供了關(guān)鍵的工具和平臺。HCV 有著高度的宿主特異性，人類是目前發(fā)現(xiàn)的HCV 的唯一宿主。HCV 不能感染有著完善的遺傳學(xué)操作工具的模式實(shí)驗(yàn)動物，如小鼠、大鼠等。通過實(shí)驗(yàn)接種，黑猩猩可以被HCV 感染，而且疾病的發(fā)生和發(fā)展與人類感染HCV 有著一定的相似性，因此長期以來黑猩猩一直是HCV 研究的唯一動物模型。但是黑猩猩作為瀕臨滅絕的靈長類動物，其在科研中的使用在動物倫理學(xué)上有著很大的爭議。加之黑猩猩的實(shí)驗(yàn)使用成本非常昂貴，世界上僅有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室能最終使用黑猩猩，因此開發(fā)經(jīng)濟(jì)實(shí)用的HCV 小動物模型十分迫切。最近幾年，利用樹鼩和人源化小鼠建立HCV 的小動物模型有了良好的進(jìn)展。本文介紹常用的幾種HCV 實(shí)驗(yàn)動物模型的發(fā)展和應(yīng)用。

1 HCV 感染的黑猩猩模型

黑猩猩基因組約98%與人類相同，是目前已知的除人類外唯一可以被HCV 感染的靈長類動物，在HCV 研究發(fā)展進(jìn)程中起到了不可替代的作用。20 世紀(jì)70年代中后期，臨床上發(fā)現(xiàn)了一種不同于當(dāng)時已知的甲型肝炎和乙型肝炎的新型肝炎，稱為非甲非乙型肝炎。用此類患者血制品感染黑猩猩，也能發(fā)展成肝炎，最終確定這種肝炎是一種新病毒導(dǎo)致的。第一個HCV 序列正是從感染的黑猩猩血漿中提取的核酸中鑒定出來的[1]。第一個具有感染性的HCV cDNA 克隆也是在黑猩猩中驗(yàn)證的，將體外轉(zhuǎn)錄制備的HCV RNA 注射到黑猩猩肝臟中，最終使黑猩猩感染了病毒[2-3]。

黑猩猩作為HCV 研究的動物模型有著如下優(yōu)勢：①研究HCV 的急性感染。HCV 患者在感染的急性期癥狀大多很輕微，等確診時往往已經(jīng)發(fā)展為慢性感染，因此很難在人群中進(jìn)行HCV 急性期感染的研究。而黑猩猩作為實(shí)驗(yàn)動物，可以用來研究在急性期內(nèi)HCV 的病毒學(xué)變化和宿主的免疫反應(yīng)。②黑猩猩在HCV 感染進(jìn)程、病理學(xué)和免疫反應(yīng)方面與人類比較類似，是研究HCV 自然感染的理想對象[4]。③由于擁有與人類高度相似的免疫系統(tǒng)，黑猩猩可用于HCV 疫苗的研發(fā)。

2 HCV 感染的樹鼩模型

樹鼩是我國西南地區(qū)及東南亞地區(qū)常見的一種小動物，體型比大鼠略小，曾被歸為食蟲目或靈長目，后被劃分為獨(dú)立的樹鼩目。樹鼩在進(jìn)化上較小鼠更接近人類，可用于多種人類疾病模型的研究，如HBV 感染[5]。HCV 感染樹鼩也有報(bào)道[6-7]，在Xie等[6]報(bào)道中，接種丙肝患者血漿后20%～35%的樹鼩血漿中HCV RNA 含量可達(dá)約104IU/ml。最近Amako等[8]報(bào)道了令人欣喜的進(jìn)展，使用基因1b 型患者的血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)獲得的病毒，在樹鼩中建立了HCV的持續(xù)性感染，并觀察到肝纖維化和肝癌等病變。在為期3年的感染實(shí)驗(yàn)中，血漿中的HCV RNA 在一些時間點(diǎn)可以被檢測到；測定擴(kuò)增出的HCV 非結(jié)構(gòu)蛋白（non-structural protein,NS）5A 區(qū)域序列后發(fā)現(xiàn)了變異；樹鼩陽性血漿再感染新的樹鼩時同樣可以建立感染，確定了接種病毒在樹鼩體內(nèi)的持續(xù)復(fù)制。3年后感染樹鼩的肝臟中依然可以檢測到低水平的HCV RNA，并且發(fā)生了組織纖維化和癌變。這是首次報(bào)道HCV 感染樹鼩引起的肝纖維化和肝癌。

目前樹鼩在HCV 研究中的應(yīng)用還沒有得到推廣，主要有2 個原因：①樹鼩在飼養(yǎng)繁殖環(huán)節(jié)、遺傳背景品系和遺傳工程操作上還達(dá)不到一個模型動物的要求；②HCV 感染樹鼩的現(xiàn)象還須要更多獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)。根據(jù)現(xiàn)有的報(bào)道來看，HCV 感染樹鼩的陽性率仍然不高，而且HCV RNA 在樹鼩血漿中的水平通常比在患者血漿中低2～3 個數(shù)量級，說明樹鼩不是HCV 感染的最佳宿主。Tong 等[9]報(bào)道了在缺少某一種受體的細(xì)胞中過度表達(dá)人或者樹鼩的HCV 受體分子可以同樣有效地支持HCV 假病毒的侵入，表明樹鼩受體分子同樣可以有效地支持HCV 侵入宿主細(xì)胞。如果侵入樹鼩肝細(xì)胞不受阻礙，那么有可能是樹鼩肝細(xì)胞缺少了某種人類特異的可支持HCV 復(fù)制的宿主因子，或者樹鼩細(xì)胞的免疫反應(yīng)限制了HCV 的復(fù)制。如何克服這些種屬間的差異，建立高效的樹鼩感染模型是最終決定樹鼩能否成為研究HCV 的實(shí)驗(yàn)動物模型的關(guān)鍵。

3 用于HCV 研究的小鼠模型

小鼠是目前使用最廣泛的實(shí)驗(yàn)動物之一，實(shí)驗(yàn)成本低，遺傳背景清楚，研究手段豐富，然而自然狀態(tài)下小鼠并不能被HCV 感染。在過去的十年里，研究人員通過各種手段改造小鼠，使小鼠成功感染HCV。目前有3 種用于HCV 研究的小鼠模型：①表達(dá)HCV編碼蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠；②含有來源于人體組織或細(xì)胞的嵌合型小鼠（或稱人源化小鼠）；③表達(dá)人源HCV 宿主因子的轉(zhuǎn)基因小鼠。以下分別介紹這3種模型的特點(diǎn)。

3.1 表達(dá)HCV 編碼蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠模型 早期的HCV 小鼠模型通常是用轉(zhuǎn)基因方法，將HCV 全長基因組或者表達(dá)特定蛋白的基因組片段整合到小鼠基因組中，構(gòu)建持續(xù)性表達(dá)HCV 蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠。Moriya 等[10]在2 種不同品系的小鼠中用HBV的啟動子控制表達(dá)HCV 的核心蛋白，出生16 個月后約1/3 的轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生了肝癌。這表明HCV核心蛋白具有誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌變的能力。這種模型的局限性是轉(zhuǎn)基因小鼠中的HCV 蛋白通常會過度表達(dá)，而且HCV 基因片段是隨機(jī)整合到小鼠基因組中的，有可能造成額外的影響。另外，此種小鼠模型缺乏HCV 侵入細(xì)胞和在細(xì)胞中復(fù)制的過程，因此其應(yīng)用非常有限。

3.2 含有來源于人體組織或細(xì)胞的嵌合型小鼠模型 Mercer 等[11]最早報(bào)道了一種含有人肝細(xì)胞的嵌合型小鼠可以被HCV 感染。在嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷型（severe combined immunodeficiency,SCID）小鼠中，引入白蛋白啟動子控制尿激酶型纖溶酶原激活基因（urokinase-type plasminogen-activator gene,uPA）的表達(dá)，其肝臟特異表達(dá)的uPA 將造成持續(xù)性的小鼠肝損傷，這時候?qū)⑷说母渭?xì)胞移植到小鼠中，即可建立人肝嵌合型小鼠模型。用丙肝患者血清感染這種嵌合型小鼠，約75%的小鼠感染后血漿中可檢測到HCV RNA 水平為3×（104～106）copies/ml，并持續(xù)存在15～35 周。這是HCV 小鼠模型的一次重要突破。該模型已被用于HCV 病毒進(jìn)化[12]和抗病毒藥物開發(fā)[13]等多方面的研究。

通常在uPA-SCID 嵌合型小鼠中人肝細(xì)胞比例僅為15%[14]。由于uPA 造成的肝損傷，uPA-SCID小鼠很難飼養(yǎng)，而且移植手術(shù)必須在小鼠出生后2 周內(nèi)完成。最近報(bào)道了更加高效的嵌合模型Fah-/-Rag2-/-Il2rg-/-（FRG 小鼠）[15-16]。延胡索酰乙酰乙酸水解酶（fumarylacetoacetate hydroxylase,FAH）是酪氨酸代謝途徑最后一個酶，F(xiàn)AH 缺失造成有毒代謝產(chǎn)物的積累，從而引起小鼠肝損傷。使用2-（2-nitro-4-trifluoromethylbenzyol）-cyclohexane-1,3-dione（NTBC）處理可以阻斷有毒代謝產(chǎn)物積累，維持小鼠肝細(xì)胞正常功能[17]。FRG 小鼠正常飼養(yǎng)時加入NTBC，須要移植外源細(xì)胞時停止給藥即可，因此更易于飼養(yǎng)和移植，而且嵌合肝臟中人肝細(xì)胞所占比例最高可達(dá)到95%[18]。使用HCV 感染者血漿或細(xì)胞培養(yǎng)的病毒均可以感染FRG 小鼠，HCV RNA 最高可以達(dá)到107copies/ml[18]。但FRG 小鼠依然是免疫缺陷的，不能用于研究宿主對HCV 感染的免疫反應(yīng)、HCV 發(fā)病機(jī)制和疫苗的研發(fā)等工作。此外，人肝細(xì)胞供體來源于人成體肝組織，存在個體間差異，來源也受到一定的限制。這些都是該模型更廣泛應(yīng)用所須要克服的障礙。近年來干細(xì)胞技術(shù)發(fā)展很快，已有報(bào)道將人的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells,iPS）分化成具有功能的肝細(xì)胞[19-20]，而且體外實(shí)驗(yàn)證明這種來源的肝細(xì)胞可以被HCV 感染[21-22]。如果iPS 來源的肝細(xì)胞最終能代替成體肝組織成為FRG 小鼠的供體，將會極大地促進(jìn)該模型的實(shí)際應(yīng)用。

最近Washburn 等[23]報(bào)道了同時具備人肝細(xì)胞和免疫細(xì)胞的HCV 小鼠模型。在免疫缺陷型的Balb/C Rag2-/-Il2rg-/-小鼠中，白蛋白啟動子控制FK506結(jié)合蛋白與caspase 8 融合蛋白特異性在小鼠肝細(xì)胞中表達(dá)，造成可誘導(dǎo)性肝細(xì)胞損傷，誘導(dǎo)后可接受人源肝細(xì)胞移植。在該小鼠中同時移植來源于胎肝組織的人肝母細(xì)胞和人造血干細(xì)胞，可以發(fā)育出成熟的人肝細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。在感染HCV 的人源化小鼠肝臟中可檢測到HCV RNA，同時還能檢測到HCV 特異性T 細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)、肝星狀細(xì)胞的活化和肝纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。最終約50%的人源化小鼠中出現(xiàn)肝纖維化癥狀，這也是首次報(bào)道HCV在小鼠感染模型中可以導(dǎo)致肝細(xì)胞纖維化。這一模型在研究HCV 感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)和發(fā)病機(jī)制方面將有廣泛的用途。遺憾的是，該模型小鼠的血漿中檢測不到HCV RNA，這或許是由于人的肝母細(xì)胞在小鼠中發(fā)育出的肝細(xì)胞功能不完全，還不能高效支持HCV 的復(fù)制。進(jìn)一步優(yōu)化這種同時具備人肝細(xì)胞和免疫細(xì)胞的小鼠模型將是本領(lǐng)域發(fā)展的重點(diǎn)之一。

3.3 表達(dá)人源HCV 宿主因子的轉(zhuǎn)基因小鼠模型 構(gòu)建HCV 小鼠模型的另外一種嘗試是通過基因改造，將HCV 感染所必需的人源宿主因子轉(zhuǎn)到小鼠基因組中，使其可以支持HCV 感染。HCV 侵入細(xì)胞的受體分子CD81、SR-B1、Cluandin-1 和Occludin[24-27]已經(jīng)陸續(xù)被鑒定出來，HCV 假病毒和細(xì)胞培養(yǎng)來源的真病毒可以侵入同時表達(dá)這4 種人源受體分子的小鼠細(xì)胞[26]。但是Hikosaka 等[28]發(fā)現(xiàn)同時含有這4 種人源受體分子的轉(zhuǎn)基因小鼠卻依然不能被HCV 感染。這或許是由于小鼠肝細(xì)胞不能有效支持HCV 復(fù)制，導(dǎo)致常規(guī)手段檢測不到HCV 的感染。Rice 研究組報(bào)道了更加靈敏的小鼠模型[29]。他們用腺病毒載體，將人的CD81、SR-B1、Cluaudin-1 和Occludin 基因同時轉(zhuǎn)入熒光素工具小鼠的肝細(xì)胞中表達(dá)。熒光素工具小鼠的啟動子和編碼區(qū)之間存在終止序列，該序列兩端含有l(wèi)oxp 位點(diǎn)，當(dāng)有Cre重組酶存在時，可識別并剪接掉loxp 之間的終止序列，從而激活熒光素基因的表達(dá)。同時，他們在HCV基因組上加入Cre 基因（HCV-Cre），然后感染上述小鼠。HCV 是正鏈RNA 病毒，其基因組本身可作為mRNA 直接翻譯蛋白，因此HCV-Cre 進(jìn)入細(xì)胞后不須要復(fù)制即可表達(dá)Cre 蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與未轉(zhuǎn)入受體分子的對照組小鼠相比，HCV-Cre 病毒感染后可以檢測到肝細(xì)胞中熒光酶活性顯著提高。研究者還利用該模型驗(yàn)證了HCV 特異性中和抗體在體內(nèi)感染的保護(hù)效果，發(fā)現(xiàn)用包膜蛋白疫苗免疫后的小鼠與對照組相比，感染HCV-Cre 病毒后熒光素酶活性顯著下降，顯示了疫苗的保護(hù)作用。這一小鼠感染模型使用了免疫系統(tǒng)正常的小鼠，并巧妙地避開了小鼠在HCV 復(fù)制環(huán)節(jié)可能存在的缺陷，為HCV 中和抗體測試和疫苗的研發(fā)提供了有效的研究工具。

該小鼠模型仍然不支持HCV 的復(fù)制和包裝。這可能是由于小鼠肝細(xì)胞中缺少了某種必需的人源因子，也可能是由于小鼠肝細(xì)胞中存在某種限制性因子。Long 等[30]的研究結(jié)果表明，小鼠肝細(xì)胞中并不存在阻礙HCV 組裝和釋放的限制性因素，更有可能的是小鼠肝細(xì)胞中缺少了某種人肝細(xì)胞中特有的支持HCV 復(fù)制的分子，也可能是HCV 不能有效地阻斷小鼠的宿主免疫反應(yīng)，比如NS3 對小鼠線粒體抗病毒信號蛋白的切割[31]。如何鑒定出關(guān)鍵的人源宿主因子，解決HCV 在小鼠肝細(xì)胞中復(fù)制的障礙，將是下一步關(guān)注的問題。

4 總結(jié)與展望

實(shí)驗(yàn)動物模型是研究HCV 病毒學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、藥物和疫苗研發(fā)中重要的手段。由于與人類的高度相似性，黑猩猩作為HCV 的動物模型具有無與倫比的優(yōu)勢。但出于價格、道德倫理等方面的考慮，黑猩猩的使用正受到越來越多的限制。在其他動物模型中，小鼠模型應(yīng)用最廣泛，發(fā)展最快。盡管技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)能在免疫缺陷小鼠上同時移植人的肝細(xì)胞和造血干細(xì)胞及胸腺組織，但人源化嵌合型小鼠模型仍有許多問題有待解決，如嵌合型小鼠的肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞仍然是鼠源的，部分人源造血免疫細(xì)胞如B 淋巴細(xì)胞等在小鼠體內(nèi)的發(fā)育仍有障礙。這些缺陷限制了該模型在HCV 發(fā)病機(jī)制研究上的應(yīng)用，近年來發(fā)展迅速的成體干細(xì)胞分化研究將有可能推動人源化小鼠模型的完善和優(yōu)化。表達(dá)人源HCV 宿主因子的轉(zhuǎn)基因小鼠模型代表了小鼠模型的另外一個重要方向。盡管目前的HCV受體轉(zhuǎn)基因小鼠已經(jīng)可以支持HCV 的侵入，但在復(fù)制和病毒組裝分泌上還有缺陷，仍有待發(fā)現(xiàn)更多的在這兩個環(huán)節(jié)起關(guān)鍵作用的人源宿主因子。HCV 樹鼩模型目前還不夠穩(wěn)定，尚不能建立高效的、重復(fù)性好的感染。但考慮到其在進(jìn)化上比小鼠更接近人類，加之我國在樹鼩資源和飼養(yǎng)繁殖上的優(yōu)勢，因此我國應(yīng)該積極探索發(fā)展HCV 樹鼩模型。

[1] Choo QL,Kuo G,Weiner AJ,et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A,non-B viral hepatitis genome［J］. Science,1989,244(4902):359-362.

[2] Kolykhalov AA,Agapov EV,Blight KJ,et al.Transmission of hepatitis C by intrahepatic inoculation with transcribed RNA［J］.Science,1997,277(5325):570-574.

[3] Yanagi M,Purcel RH,Emerson SU,et al. Transcripts from a single full-length cDNA clone of hepatitis C virus are infectious when directly transfected into the liver of a chimpanzee［J］.Proc Natl Acad Sci U S A,1997,94(16):8738-8743.

[4] Shimizu YK,Weiner AJ,Rosenblatt J,et al. Early events in hepatitis C virus infection of chimpanzees［J］.Proc Natl Acad Sci U S A,1990,87(16):6441-6444.

[5] Walter E,Keist R,Nieder?st B,et al. Hepatitis B virus infection of tupaia hepatocytes in vitro and in vivo［J］. Hepatology,1996,24(1):1-5.

[6] Xie ZC,Riezu-Boj JI,Lasarte JJ,et al. Transmission of hepatitis C virus infection to tree shrews［J］. Virology,1998,244(2):513-520.

[7] Xu X,Chen H,Cao X,et al. Efficient infection of tree shrew (Tupaia belangeri) with hepatitis C virus grown in cell culture or from patient plasma［J］. J Gen Virol,2007,88(Pt 9): 2504-2512.

[8] Amako Y,Tsukiyama-Kohara K,Katsume A,et al. Pathogenesis of hepatitis C virus infection in Tupaia belangeri［J］.J Virol,2010,84(1):303-311.

[9] Tong Y,Zhu Y,Xia X,et al. Tupaia CD81,SR-BI,Claudin-1,and occludin support hepatitis C virus infection［J］. J Virol,2011,85(6):2793-2802.

[10] Moriya K,Fujie H,Shintani Y,et al. The core protein of hepatitis C virus induces hepatocellular carcinoma in transgenic mice［J］.Nat Med,1998,4(9):1065-1067.

[11] Mercer DF,Schiller DE,Elliott JF,et al.Hepatitis C virus replication in mice with chimeric human livers［J］. Nat Med,2001,7(8):927-933.

[12] Kaul A,Woerz I,Meuleman P,et al. Cell culture adaptation of hepatitis C virus and in vivo viability of an adapted variant［J］. J Virol,2007,81(23):13168-13179.

[13] Meuleman P,Leroux-Roels G. The human liver-uPA-SCID mouse:a model for the evaluation of antiviral compounds against HBV and HCV［J］. Antiviral Res,2008,80(3):231-238.

[14] Dandri M,Burda MR,Torok E,et al. Repopulation of mouse liver with human hepatocytes and in vivo infection with hepatitis B virus［J］. Hepatology,2001,33(4):981-988.

[15] Azuma H,Paulk N,Ranade A,et al. Robust expansion of human hepatocytes in Fah-/-/Rag2-/-/Il2rg-/- mice［J］. Nat Biotechnol,2007,25(8):903-910.

[16] Bissig KD,Le TT,Woods NB,et al. Repopulation of adult and neonatal mice with human hepatocytes: a chimeric animal model［J］. Proc Natl Acad Sci U S A,2007,104(51):20507-20511.

[17] Grompe M,Lindstedt S,al-Dhalimy M,et al. Pharmacological correction of neonatal lethal hepatic dysfunction in a murine model of hereditary tyrosinaemia type I［J］.Nat Genet,1995,10(4):453-460.

[18] Bissig KD,Wieland SF,Tran P,et al. Human liver chimeric mice provide a model for hepatitis B and C virus infection and treatment［J］. J Clin Invest,2010,120(3):924-930.

[19] Sullivan GJ,Hay DC,Park IH,et al. Generation of functional human hepatic endoderm from human induced pluripotent stem cells［J］. Hepatology,2010,51(1):329-335.

[20] Si-Tayeb K,Noto FK,Nagaoka M,et al. Highly efficient generation of human hepatocyte-like cells from induced pluripotent stem cells［J］. Hepatology,2010,51(1):297-305.

[21] Schwartz RE,Trehan K,Andrus L,et al. Modeling hepatitis C virus infection using human induced pluripotent stem cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A,2012,109(7):2544-2548.

[22] Yoshida T,Takayama K,Kondoh M,et al. Use of human hepatocyte-like cells derived from induced pluripotent stem cells as a model for hepatocytes in hepatitis C virus infection［J］. Biochem Biophys Res Commun,2011,416(1-2):119-124.

[23] Washburn ML,Bility MT,Zhang L,et al. A humanized mouse model to study hepatitis C virus infection,immune response,and liver disease［J］. Gastroenterology,2011,140(4):1334-1344.

[24] Scarselli E,Ansuini H,Cerino R,et al. The human scavenger receptor class B typeⅠis a novel candidate receptor for the hepatitis C virus［J］. EMBO J,2002. 21(19):5017-5025.

[25] Evans MJ,von Hahn T,Tscherne DM,et al. Claudin-1 is a hepatitis C virus co-receptor required for a late step in entry［J］.Nature,2007. 446(7137):801-805.

[26] Ploss A,Evans MJ,Gaysinskaya VA,et al. Human occludin is a hepatitis C virus entry factor required for infection of mouse cells［J］. Nature,2009,457(7231):882-886.

[27] Pileri P,Uematsu Y,Campagnoli S,et al. Binding of hepatitis C virus to CD81［J］. Science,1998,282(5390):938-941.

[28] Hikosaka K,Noritake H,Kimura W,et al. Expression of human factors CD81,claudin-1,scavenger receptor,and occludin in mouse hepatocytes does not confer susceptibility to HCV entry［J］. Biomed Res,2011,32(2):143-150.

[29] Dorner M,Horwitz JA,Robbins JB,et al. A genetically humanized mouse model for hepatitis C virus infection［J］. Nature,2011,474(7350):208-211.

[30] Long G,Hiet MS,Windisch MP,et al. Mouse hepatic cells support assembly of infectious hepatitis C virus particles［J］. Gastroenterology,2011,141(3):1057-1066.

[31] Meylan E,Curran J,Hofmann K,et al. Cardif is an adaptor protein in the RIG-I antiviral pathway and is targeted by hepatitis C virus［J］. Nature,2005,437(7062):1167-1172.