高效液相色譜法測定復(fù)方黃連膠囊中鹽酸小檗堿含量

(浙江省金華市浦江縣中醫(yī)院中藥房，浙江 金華 322200)

復(fù)方黃連膠囊是由黃連、白術(shù)等中藥組方的復(fù)方制劑，用于治療胃腸道疾病。黃連為方中君藥，為有效控制制劑的質(zhì)量，保證療效，筆者建立了測定復(fù)方黃連膠囊中鹽酸小檗堿含量的高效液相色譜法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀，DAD檢測器(美國安捷倫科技有限公司);甲醇為色譜純(美國B＆J公司)，娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純;鹽酸小檗堿對照品(供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所，批號為110713－200208);復(fù)方黃連膠囊(市售品)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Zorbax XDB－C8(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:水(含0.34%磷酸二氫鉀和0.34%十二烷基硫酸鈉)－乙腈(53∶47);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;檢測波長:345 nm;進(jìn)樣量:5 μL。在上述條件下，復(fù)方黃連膠囊中鹽酸小檗堿與其他組分能達(dá)到基線分離(見圖1)。鹽酸小檗堿保留時間為10.5 min，理論板數(shù)以鹽酸小檗堿色譜峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取鹽酸小檗堿對照品約4 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，密塞、搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含鹽酸小檗堿0.376 mg)。取復(fù)方黃連膠囊約50 mg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入酸性甲醇(每100 mL甲醇中加入 1.0 mL鹽酸)15 mL，稱定質(zhì)量，放置 10 min，超聲 40 min(40℃)，取出，擦干外部，放冷，再稱定質(zhì)量，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過膜(0.20 μm)，即得供試品溶液。取按處方和制備工藝制備的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察[1－2]

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL，分別置 1 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，密塞、搖勻，即得各質(zhì)量濃度對照品溶液，進(jìn)樣5 μL。以峰面積為橫坐標(biāo)(X)、進(jìn)樣量(μg)為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為 Y=0.000 5 X－0.006，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.188～1.129 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的 RSD為0.26%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，依法分別在 0，1，2，4，8，12 h時進(jìn)樣。結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的 RSD為0.56%(n=6)，表明樣品中鹽酸小檗堿在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批次樣品，精密稱取5份，按供試品溶液的制備與含量測定方法依法制備與測定。結(jié)果樣品中鹽酸小檗堿的含量分別為 4.35% ，4.42% ，4.58% ，4.51% ，4.40% ，RSD 為1.12%(n=5)。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量樣品，添加相當(dāng)于樣品含量的80%，100%，120%的鹽酸小檗堿對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂的色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下條件測定。結(jié)果3批樣品中鹽酸小檗堿的含量分別為4.41%，4.47% ，4.64% 。

3 討論

黃連中主要含原小檗堿型生物堿，已分離出來的生物堿有鹽酸小檗堿、巴馬丁、黃連堿、甲基黃連堿、藥根堿、木藍(lán)堿等[3]，其中以鹽酸小檗堿含量最高，達(dá)10%?？刂汽}酸小檗堿的含量，可從一定程度上控制提取物的質(zhì)量。

在色譜條件研究中，對不同流動相及不同比例、不同流速等進(jìn)行了考察，根據(jù)樣品的分離度、保留時間等因素，確定了文中的最佳流動相。所建立的含量測定方法前處理簡單，準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，可用于復(fù)方黃連膠囊的質(zhì)量控制。

[1]張金渝，王 波，金 航，等.云南黃連不同部位有效成分及生物量的比較研究[J].中國中藥雜志，2008，33(3):311－313.

[2]周國莉，林曉蓮，程 聰.HPLC法測定復(fù)方黃連液中鹽酸小桑堿的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，16(8):80－81.

[3]崔學(xué)軍.黃連及其有效成分的藥理研究進(jìn)展[J].中國藥師，2006，9(5):469－470.