復(fù)方水楊酸洗劑藥效學(xué)研究

(南通體臣衛(wèi)生學(xué)校藥學(xué)系，江蘇 南通 226007)

脂溢性皮炎是皮膚科的常見病、多發(fā)病，抗炎、止癢、殺菌是外用藥物治療脂溢性皮炎的基本治療原則[1]。皮質(zhì)類激素、抗生素乳膏和酊水劑是常用外用藥物，但由于皮質(zhì)類激素的多種副反應(yīng)，臨床使用受限。為此，筆者根據(jù)脂溢性皮炎的發(fā)病機(jī)制以及臨床表現(xiàn)并結(jié)合多年的臨床治療經(jīng)驗(yàn)，以水楊酸、間苯二酚、薄荷腦、苯酚為主要配方，研制了非激素類外用制劑復(fù)方水楊酸洗劑。本試驗(yàn)中對(duì)復(fù)方水楊酸洗劑的鎮(zhèn)痛與抗炎作用進(jìn)行了研究，并與臨床常用的激素類藥物曲安奈德溶液進(jìn)行了對(duì)比觀察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 試驗(yàn)材料

復(fù)方水楊酸洗劑(南通市中醫(yī)院制劑室，含水楊酸1%、間苯二酚2%、薄荷腦1%、苯酚1%，制劑批準(zhǔn)文號(hào)為蘇藥制字H04002770，批號(hào)為20101026);曲安奈德溶液(唐山集川藥業(yè)利康制藥有限公司，規(guī)格為10 mL∶2.5 mg，批號(hào)為201009423);復(fù)方水楊酸洗劑輔料(含依地酸二鈉、乙醇、純化水，南通市中醫(yī)院制劑室提供)。昆明種小鼠，18～22 g，雌性或雌雄兼用，均為無特定病原體(SPF)級(jí)，由學(xué)校動(dòng)物房提供，中國科學(xué)院上海噬齒動(dòng)物研究中心購買;實(shí)驗(yàn)室溫度(25±1)℃，相對(duì)濕度70%，自然光照。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備

2.1.1 處方

水楊酸 10 g，間苯二酚20 g，薄荷腦 10 g，苯酚10 g，依地酸二鈉 0.2 g，乙醇 600 mL，純化水加至 1 000 mL。

2.1.2 制備

取水楊酸、間苯二酚、薄荷腦與苯酚加乙醇研磨溶解，另取依地酸二鈉加適量純化水溶解，緩緩以細(xì)流加入上述溶液中，隨加隨攪拌，過濾，加純化水使成1 000 mL，攪勻，分裝，即得。

2.2 熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[2－3]

選擇昆明種雌性小鼠，置(55±0.5)℃恒溫水浴的金屬盆底熱板上，測(cè)定小鼠從熱板放置開始到受熱板刺激第1次舔后足掌的時(shí)間，作為痛閾值。選擇痛閾值小于30 s(疼痛反應(yīng)不規(guī)則者如過敏、遲鈍或喜跳動(dòng)的小鼠剔除不用)的小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即輔料對(duì)照組(A組)，復(fù)方水楊酸洗劑小、中、大劑量組(B1，B2，B3組)和陽性對(duì)照組(曲安奈德溶液，C組)，每組10只。試驗(yàn)前1日給各組小鼠腹部剃毛，面積1 cm2。根據(jù)人體常用推薦劑量(0.05 mL/cm2)，按體表面積折算出小鼠用量為 0.032 mL/cm2。B1組涂藥2次，前1次涂腹部脫毛區(qū)，后1次涂四足掌[4];B2組涂藥4次，前2次涂腹部脫毛區(qū)，后2次涂四足掌;B3組涂藥6次，前3次涂腹部脫毛區(qū)，后3次涂四足掌;給藥面積1 cm2，每次間隔均為30 min。A組與C組的用量及給藥次數(shù)同B1組。各組動(dòng)物末次給藥后30，60，90，120 min分別測(cè)定1次痛閾值，如痛閾超過60 s，則按60 s計(jì)。結(jié)果見表1。

表1 復(fù)方水楊酸洗劑小鼠熱板試驗(yàn)結(jié)果(X ± s，n=10)

2.3 電刺激鎮(zhèn)痛試驗(yàn)[5]

用方波脈沖電流刺激小鼠尾巴根部，連續(xù)刺激3次，每次間隔5 s，3次均有嘶叫者為電刺激致痛合格小鼠。選取合格小鼠80只，分組方法同熱板法。試驗(yàn)前1日給各組小鼠腹部剃毛，面積1 cm2。B1組涂藥2次，前1次涂腹部脫毛區(qū)，后1次涂尾巴根部電刺激處;B2組涂藥4次，前2次涂腹部脫毛區(qū)，后2次涂尾巴根部電刺激處;B3組涂藥6次，前3次涂腹部脫毛區(qū)，后3次涂尾巴根部電刺激處;給藥面積1 cm2，每次間隔均為30 min。A組與C組的用量及給藥次數(shù)同B3組。各組動(dòng)物末次尾部涂藥后15，30，60，90，120 min 用同樣強(qiáng)度方波脈沖電流重復(fù)刺激，若連續(xù)2次不嘶叫者，表示有鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方水楊酸洗劑小鼠電刺激鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果

2.4 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響[4－6]

取體重合格的昆明種小鼠50只，雌雄各半，分組方法同熱板法。分別將受試物均勻涂于各組小鼠右耳正反面，給藥量為每次0.032 g/cm2，給藥面積 2 cm2，左耳作為對(duì)照。B1組給藥 1 次，B2組給藥2次，B3組給藥3次，每次間隔1 h。A組與C組的用量及給藥次數(shù)同B3組。末次給藥后1.5 h，各小組的右耳以溫水洗去殘余藥物，用干棉球擦凈，然后將0.05 mL二甲苯涂于小鼠左右耳廓前后兩面致炎，致炎后30 min處死小鼠，用直徑為8 mm的打孔器在兩耳相同的部位取下左、右圓耳片，稱重，計(jì)算左、右耳片質(zhì)量差即為腫脹度。結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

表3 復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

注:與 A 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01;與 B1組比較，□P ＜0.01，■P＜0.01(表 4同)。

組別A組B1組B2組B3組C組劑量(mL/cm2)0.192 0.064 0.128 0.192 0.192腫脹度27.3 ± 8.6 21.8 ± 4.8△18.7 ± 4.2▲15.2 ± 5.4▲■14.9 ± 4.8▲■抑制率(%)－20.15 31.50 44.32 45.42

2.5 對(duì)二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響[7]

選取體重合格的昆明種小鼠50只，分組方法同熱板法，試驗(yàn)前1 d給各組小鼠腹部剃毛，面積3 cm2。涂藥部位為腹部去毛皮膚，面積約 3 cm2。B1組按每次 0.032 mL/cm2，涂藥 2 次，B2組涂藥4次，B3組涂藥6次，每次間隔1 h，A組與C組的用量及給藥次數(shù)同B3組。各組動(dòng)物末次涂藥后1 h，與尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水0.01 mL/g體重，隨后于小鼠腹部正中部位去毛皮膚上滴二甲苯0.03 mL/只，20 min后處死，剝下腹部皮膚，肉眼觀察評(píng)定皮膚藍(lán)斑深淺程度;再用手術(shù)剪將藍(lán)斑皮膚剪下，剪碎后投入有塞玻璃試管內(nèi)，倒入丙酮－硫酸鈉提取液10 mL，置暗處放置，每日輕輕搖動(dòng)試管2～3次，3 d后2 500 r/min離心10 min，取上清液于590 nm處比色測(cè)定吸收度，以丙酮－硫酸鈉液校零，計(jì)算每mg皮膚所含染料的量。結(jié)果見表4?？梢姀?fù)方水楊酸洗劑能明顯抑制二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高。曲安奈德的作用與大劑量復(fù)方水楊酸洗劑相似。

表4 復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響(±s)

表4 復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)二甲苯致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性增高的影響(±s)

組別A組B1組B2組B3組C組用藥劑量(mL)0.576 0.192 0.384 0.576 0.576藍(lán)斑色澤深淺(級(jí)別)5.8 ±1.7 4.3 ±1.3△3.9 ±1.4△3.1 ±0.8▲□3.2 ±0.9▲□藍(lán)斑染料量(μg/mg)0.268 ± 0.089 0.151 ± 0.035△0.147 ± 0.031△0.127 ± 0.025▲□0.128 ± 0.053▲□

3 討論

本研究結(jié)果顯示，3種劑量的復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)熱板法和電刺激法致痛的2種動(dòng)物模型有鎮(zhèn)痛作用，且劑量增大，鎮(zhèn)痛作用增強(qiáng)。本處方中所含的水楊酸具有鎮(zhèn)痛、抗炎、止癢和抗菌作用[7];薄荷腦作為復(fù)方制劑局部使用，可產(chǎn)生清涼、止癢、消炎作用[8]。以上2種藥物配伍使用，可使鎮(zhèn)痛作用進(jìn)一步增強(qiáng)。

在抗炎試驗(yàn)中，復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用，并可顯著抑制二甲苯引起的小鼠毛細(xì)血管通透性增高，提示復(fù)方水楊酸洗劑對(duì)體液滲出、毛細(xì)血管通透性增大和組織水腫等炎癥過程有明顯抑制作用。薄荷腦能抑制3α－羥類甾醇脫氫酶，促進(jìn)生成更多氫化可的松，發(fā)揮抗炎作用[8]。水楊酸通過抑制前列腺素合成酶，使炎性介質(zhì)前列腺素合成減少[7]，發(fā)揮抗炎作用。本制劑的抗炎作用主要與薄荷腦和水楊酸有關(guān)。

間苯二酚具有抑菌(包括真菌)作用，并具有良好的止癢作用，作為皮膚科外用制劑局部使用，對(duì)脂溢性皮炎具有良好的治療作用[9]。苯酚可使菌體蛋白質(zhì)變性而具有良好的殺菌作用[10]，與具有溫和防腐、抑菌作用的間苯二酚和薄荷腦[9－10]配伍使用，對(duì)防止搔抓所致繼發(fā)性皮膚感染具有良好的預(yù)防作用。以上4種藥物的配伍使用，對(duì)脂溢性皮炎可起到標(biāo)本兼治的治療作用。

熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)時(shí)，所采用的金屬盆應(yīng)導(dǎo)熱良好，底部平整光潔。本試驗(yàn)僅選用雌性小鼠，是因雄性小鼠陰囊受熱下垂，與熱板接觸，受熱刺激而使其跳動(dòng)影響試驗(yàn)。

本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示，復(fù)方水楊酸洗劑是一種治療脂溢性皮炎的非激素類有效制劑。

[1]趙 辨.臨床皮膚病學(xué)[M].第3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2003:934－936.

[2]盛國榮.復(fù)方利多卡因乳膏的處方優(yōu)選[J].中國藥房，2009，20(28):2 182－2 184.

[3]王 昶，姜 宜，謝小龍.龍芽蔥木皂苷抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥師，2007，10(8):788－790.

[4]陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:377－378，307－308.

[5]徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991:695－697.

[6]蔡瑞宏，姚 宏，張亞峰，等.蘆薈冰片燒傷膏生肌、鎮(zhèn)痛及抗炎作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(2):170－172.

[7]柳春興，邢建國.前列寧片抗前列腺增生與抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥師，2006，9(1):26－28.

[8]芮耀誠 .現(xiàn)代藥物學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，1999:1 364－1 365.

[9]王浴生.中藥藥理與應(yīng)用[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:1 240－1 241.

[10]靳培英.皮膚病藥物治療學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:776－777.