樹莓組織培養(yǎng)中外植體污染防止的研究

王 禹

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱 150069）

樹莓屬于薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（RubusL.），是近幾年世界發(fā)展迅速的第三代新興水果。其鮮果含有多種人體必需的營養(yǎng)成分，并有較高的藥用價(jià)值；果實(shí)除鮮食外，還可制成果汁、果酒和清涼飲料，深受消費(fèi)者的喜愛。樹莓推廣種植與產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景廣闊，但傳統(tǒng)的根蘗分株繁殖方法，難以滿足生產(chǎn)對(duì)大量優(yōu)質(zhì)苗木的需求。應(yīng)用組織培養(yǎng)繁育樹莓苗木可提高繁殖系數(shù)和苗木質(zhì)量。在植物組織培養(yǎng)過程中，控制外植體污染是組培發(fā)生的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)探索了抑制樹莓外植體污染的有效途徑，為快繁技術(shù)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)樹莓品種為“費(fèi)爾杜德”和“哈瑞太茲”，采用的外植體為腋芽。將采集的樹莓當(dāng)年生枝條去除葉片及葉柄部分，將枝條剪成帶1～2個(gè)腋芽的莖段，在流水狀態(tài)下沖洗10min。消毒程序：70%的酒精中浸30s→無菌水沖洗2～3次→0.1%HgCl2中浸泡→無菌水沖洗2～3次，接種到初生培養(yǎng)基上。試驗(yàn)研究外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時(shí)間和培養(yǎng)基附加抗生素對(duì)外植體污染的影響。

1.2試驗(yàn)方法

初生培養(yǎng)基采用MS＋1mg／L 6－BA＋0.3mg／L IAA＋20g／L蔗糖，抗生素（頭孢曲松鈉）附加到培養(yǎng)基中，每一處理20瓶，每瓶2個(gè)外植體，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。所有培養(yǎng)基都經(jīng)高壓蒸汽滅菌20min（120～125℃，1.0～1.2大氣壓下），頭孢曲松鈉經(jīng)過濾滅菌。

調(diào)查：

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時(shí)間

表1 0.1%HgCl2溶液消毒時(shí)間對(duì)外植體污染的影響

試驗(yàn)為了觀察外植體污染率初生培養(yǎng)基上未添加抗生素。從表1可以看出8、10、12min處理外植體污染率低；12min處理的萌芽率低，10min處理的萌芽率雖沒有降低，但是萌芽速度開始減慢。綜合比較，外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時(shí)間應(yīng)選8min為宜。

2.2 培養(yǎng)基附加抗生素對(duì)外植體污染的影響

表2 抗生素對(duì)外植體污染的影響

從表2中看出初生培養(yǎng)基附加抗生素后有效地抑制了外植體污染。費(fèi)爾杜德和哈瑞太茲分別加入60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽生長良好。

結(jié)合表1和表2得出雖然高濃度的抗生素可有效地控制外植體污染，但是它會(huì)對(duì)芽萌發(fā)起到抑制作用，致使芽生長不健壯；相反低濃度的抗生素不能有效的抑制污染；適宜的抗生素濃度會(huì)對(duì)芽萌發(fā)起到促進(jìn)作用，且不會(huì)對(duì)芽的生長造成不良影響。

3 討論

和加衛(wèi)等［1］認(rèn)為未萌發(fā)的腋芽是樹莓快速繁殖的最佳外植體。樸日子等［2］認(rèn)為腋芽是無刺紅樹莓快繁的理想外植體，芽生長快，且遺傳性穩(wěn)定，莖尖易褐變死亡。本試驗(yàn)選擇了帶腋芽的嫩枝莖段為外植體。帶腋芽的嫩枝莖段在田間易于取材，數(shù)量多，外層包裹的芽鱗片易于剝離，在生長培養(yǎng)基上啟動(dòng)率高。

目前對(duì)內(nèi)生菌防治的最有效辦法是使用抗生素［3］。研究表明：直接在培養(yǎng)基中加入抗生素能有效控制這類污染，然而這對(duì)培養(yǎng)材料也具有致毒作用并延緩其生長［4］。Leifert報(bào)道在培養(yǎng)基中加入抗生素結(jié)果使飛燕草的增殖和生根都受到阻緩［5］。本實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)基中附加了抗生素，有效地抑制了外植體污染，但是高濃度的抗生素會(huì)抑制芽的萌發(fā)，造成芽生長發(fā)育不良；抗生素對(duì)不同的品種影響不同，因此抗生素的選用也要因品種而異。

4 結(jié)論

外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時(shí)間為8min。初生培養(yǎng)中費(fèi)爾杜德和哈瑞太茲分別附加60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽體萌發(fā)效果好。

［1］ 和加衛(wèi)，徐中志，畢海林，等.樹莓組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)研究［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，19（4）：754－756.

［2］ 樸日子，曹后男，陳艷秋，等.無刺紅樹莓組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（4）：411－414.

［3］ 李海航，潘瑞熾.青霉素在高等植物中的應(yīng)用［J］.植物生理學(xué)通訊，1987（5）：1.

［4］ Dodds J R，Roberts L W.Some Inhibitory Effects of Gentamycin on Plant Tissue Culture［J］.In Vitro，1981，17：467－470.

［5］ Leifert C，Morris C，Waites WM.Ecology of Microbial Saprophytes and Pathogens in Tissue Culture and Field－grown Plant：Reasons Forcontamination Problems in Vitro［J］.CRC Crit Rev，Plant Science，1994，13：139－183.

［6］ 曹孜義，劉國民.實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程［M］.蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，1996：1－8.

［7］ 董玉芝，王曉煒，蔣萍.樹莓組織培養(yǎng)及植株再生［J］.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26（1）：28－30.

［8］ 胡建剛，黃巧興，沈秋云.1994.黑樹莓的試管繁育［J］.植物生理學(xué)通訊，30（5）：356.

［9］ 王文芝.樹莓果實(shí)營養(yǎng)成分初報(bào)［J］.西北園藝，2001（2）：15－16.

［10］ 徐桂娟，羅曉芳.黑樹莓的組織培養(yǎng)與快速繁殖［J］.北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，24（1）：99－100.