土壤中馬鈴薯粉痂病菌的簡易檢測方法

惠娜娜 李繼平 王 立 馬永強(qiáng) 李建軍 周天旺 李青青

（甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，甘肅蘭州 730070）

馬鈴薯粉痂病是由馬鈴薯粉痂菌（Spongospora subterranean）引起的真菌性病害，世界上許多地區(qū)都有發(fā)生。我國內(nèi)蒙古、廣東、貴州、江西、浙江、云南等地均有報(bào)道，20世紀(jì)60年代甘肅省隴南市也發(fā)現(xiàn)了馬鈴薯粉痂病。筆者2008～2011年在渭源縣會川試驗(yàn)田收獲期馬鈴薯塊莖調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，一般田塊馬鈴薯粉痂病病薯率在5%～20%，重病田病薯率在90%以上。由于馬鈴薯粉痂病主要是土壤帶菌，土壤中病菌的檢測和定量成為解決這一病害的首要問題。國外對馬鈴薯粉痂病菌的檢測研究較多，F(xiàn)lett（1983）提出了以番茄幼苗作為誘餌檢測土壤中的馬鈴薯粉痂病菌，隨后Merz（1989）、Wale 等（1993）也報(bào)道了番茄誘餌法，這種方法非常靈敏，微量的土壤就可檢出。國內(nèi)對馬鈴薯粉痂病菌檢測研究較少，本試驗(yàn)利用番茄幼苗對土壤中馬鈴薯粉痂病菌情況進(jìn)行了檢測，以期為該病害的防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試番茄（Lycopersicon esculentumMill.）品種為陽光908，市售。乳酚油：苯酚結(jié)晶（加熱融化）20 mL、乳酸20 mL、甘油40 mL、水20 mL。酸性品紅：高級純70%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在甘肅省定西市渭源縣會川鎮(zhèn)進(jìn)行，位于甘肅省中部，海拔2 300 m 左右，氣候陰濕，晝夜溫差大，年平均氣溫4.7 ℃，年降水量650 mm，無霜期130 d 左右。試驗(yàn)地為半陰坡地，土壤為黑麻壚土，肥力中等。

試驗(yàn)共設(shè)4 個(gè)處理（表1），每處理3 次重復(fù)。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 土壤樣品的采集

采用五點(diǎn)采樣法，于2011年4月上旬在每個(gè)試驗(yàn)小區(qū)采集0～10 cm 越冬土壤，裝入布袋子，編號，將土樣帶回實(shí)驗(yàn)室混勻備用。將采集的土壤倒入鋼盤，壓平，挑出石子，篩平劃對角線，取對角的兩部分土，繼續(xù)篩平，再取對角線的兩部分土，重復(fù)多次后，混勻篩平稱取1 g 干土，其余的土壤裝起來放入冰箱備用。

1.4 番茄幼苗誘餌法

1 g 土壤加入到1 000 mL 0.3%的水瓊脂中配成土壤液。將培育50 d 的健康番茄幼苗移栽到裝有滅菌蛭石的育苗缽中，每株番茄幼苗加10 mL 土壤液，每個(gè)處理20 株，室溫下培育，7 d澆1 次營養(yǎng)液，30 d 左右檢查番茄根系，鏡檢（Flett，1983）。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯重茬土壤中的粉痂病菌

利用番茄幼苗檢查馬鈴薯一年茬及空茬（蠶豆茬）0～10 cm 土壤中馬鈴薯粉痂病菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：蠶豆茬土壤培育的番茄苗植株生長正常，根系未見瘤狀物，顯微鏡鏡檢未發(fā)現(xiàn)粉痂病菌休眠孢子囊；一年茬土壤培育的番茄苗植株生長不整齊，植株矮化，根系腫大（圖1-a），顯微鏡下鏡檢發(fā)現(xiàn)粉痂病菌休眠孢子囊（圖1-b）。

圖1 粉痂病菌侵染番茄根系癥狀及根系組織中粉痂病菌休眠孢子囊

2.2 馬鈴薯重茬土壤中的番茄粉痂病病株率

馬鈴薯一年茬、兩年茬、三年茬土壤培育的番茄苗，植株有不同程度的矮化，根系腫大、有瘤狀物，番茄粉痂病病株率分別為82.35%、100.00%、100.00%（表2）。

表2 馬鈴薯重茬土壤中番茄粉痂病病株率

3 結(jié)論與討論

國外對粉痂病菌的研究較多，土壤帶菌量的檢測方法已經(jīng)從20世紀(jì)90年代的誘餌法到ELISA 法（Harrison et al.，1994；Wallace et al.，1995），到現(xiàn)在的PCR 技術(shù)（Bell，1998；Qu et al.，2000；van de Graaf et al.，2003），定量檢測土壤中粉痂病菌既快速又精確。國內(nèi)對馬鈴薯粉痂病菌的研究較少，主要集中在病害的發(fā)生與防治方面（楊艷麗 等，2007；余光海 等，2008）?；菽饶鹊龋?009）對馬鈴薯粉痂病病原菌及其在甘肅省會川的發(fā)生情況作了報(bào)道。本試驗(yàn)以番茄幼苗作為誘餌，檢測馬鈴薯重茬土壤中的粉痂病菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)土壤中粉痂病菌繁殖體與連作年限有關(guān)。但由于番茄幼苗誘餌法只能檢測到土壤中粉痂病菌活的游動孢子，對休眠孢子無法檢測到，所以還不能完全代表土壤中粉痂病菌繁殖體的數(shù)量，對于連作土壤中粉痂病菌的定量檢測和總體數(shù)量變化有待進(jìn)一步研究。

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