火炭母化學(xué)成分的研究

任恒春，萬定榮，谷 婧，鄒忠梅*

1中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京100193;2中南民族大學(xué)，武漢430074

火炭母化學(xué)成分的研究

任恒春1，萬定榮2，谷 婧1，鄒忠梅1*

1中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京100193;2中南民族大學(xué)，武漢430074

本文對火炭母的化學(xué)成分進(jìn)行研究，為選擇控制其質(zhì)量的指標(biāo)性成分提供依據(jù)。運(yùn)用硅膠、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20等手段進(jìn)行分離純化得到9個(gè)化合物，并通過NMR、MS等波譜方法鑒定其結(jié)構(gòu)分別為:正三十二烷醇(1)、β-谷甾醇(2)、沒食子酸甲酯(3)、胡蘿卜苷(4)、沒食子酸(5)、槲皮素(6)、槲皮苷(7)、金絲桃苷(8)和3-甲氧基-4-鼠李糖鞣花酸(9)，其中化合物1和9首次從該屬植物中分得，4和8首次從該植物中分得。關(guān)鍵詞:火炭母;蓼屬;黃酮類;鞣花酸苷

火炭母，又名火炭毛，烏炭子等，為蓼科蓼屬植物火炭母(Polygonum chinese L.)的地上部分，夏、秋間采收，鮮用或曬干。主要分布于廣東、廣西、福建、浙江、湖北、海南等地。味辛、苦，性涼，有清熱利濕，涼血解毒，平肝明目，活血舒筋的功效。用于治療痢疾、泄瀉、咽喉腫痛、跌打損傷等病癥［1］?；鹛磕笧橛蓮V東涼茶開發(fā)而制的廣東涼茶顆粒的主要組成，在方中起到?jīng)鲅?、化瘀的功效?］。但是，火炭母藥材在市場上使用比較混亂，有必要全面、客觀、科學(xué)地制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以便更好地利用資源。火炭母中化學(xué)成分較多，但活性成分尚不明確。迄今為止，從火炭母全草中共分離得到20多種化合物，主要為黃酮及其苷類、酚酸類和甾體類［3-6］。國內(nèi)外學(xué)者對火炭母藥材的質(zhì)量控制也進(jìn)行了大量研究，但所選用的對照品主要是專屬性較差的槲皮素、槲皮苷和沒食子酸［7-9］。為進(jìn)一步明確火炭母的藥效物質(zhì)，選擇合適的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，筆者對火炭母的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從乙酸乙酯部分分離得到9個(gè)化合物，經(jīng)理化和光譜分析分別鑒定為正三十二烷醇(1)，β-谷甾醇(2)，沒食子酸甲酯(3)，胡蘿卜苷(4)，沒食子酸(5)，槲皮素(6)，槲皮苷(7)，金絲桃苷(8)和3-甲氧基-4-鼠李糖鞣花酸(9)。其中，化合物1和9首次從該屬植物中分離得到，4和8首次從該植物中分離得到。

1 儀器和材料

Fisher-Johns熔點(diǎn)儀(溫度計(jì)未校正);Esquire-LC 00054型質(zhì)譜儀;LTQ-OrbitrapXLTM型質(zhì)譜儀; Bruker AM500核磁共振儀(TMS做內(nèi)標(biāo));硅膠(薄層色譜和柱色譜)為青島海洋化工廠產(chǎn)品;Sephadex LH-20為瑞典Pharmacia公司生產(chǎn)?；鹛磕杆幉挠?008年6月購自云南文山，經(jīng)中南民族大學(xué)萬定榮教授鑒定為蓼科植物火炭母Polygonum chinensis L.的地上部分。

2 提取分離

火炭母全草1.5 kg，用95%工業(yè)乙醇回流提取2次，每次2 h，藥渣用50%工業(yè)乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，經(jīng)濃縮干燥后得到170 g浸膏，將浸膏溶于少量乙醇，懸浮于水中，分別用乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收后得到乙酸乙酯部分(35.7 g)和正丁醇部分(85.2 g)。取乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱色譜層析，用二氯甲烷(甲醇∶10∶0～1∶5)梯度洗脫，薄層檢查合并得6個(gè)組分(Ⅰ-Ⅵ)，組分Ⅰ(2.4 g)，經(jīng)硅膠柱色譜純化，用石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)洗脫，收集流份，流份5～10及18～23有晶體出現(xiàn)，后用乙酸乙酯重結(jié)晶，分別得到化合物1 (15 mg)和2(20 mg);組分Ⅱ(1.4 g)，經(jīng)硅膠柱色譜層析，用石油醚∶乙酸乙酯(5∶1)洗脫，收集流份，流份7～9有白色粉末狀固體出現(xiàn)，抽濾，用石油醚重結(jié)晶，得到化合物3(30 mg);組分Ⅲ(2.8 g)，經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(15∶1～8∶1)梯度洗脫，收集流份，流份6～11經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(15∶1)洗脫，得到化合物4(40 mg)，流份17～19經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(10∶1)洗脫，得到化合物5(12 mg)，流份28～32經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(10∶1)洗脫，經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇1∶1)純化，得到化合物6(13 mg);組分Ⅳ(23.5 g)，經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(5∶1)洗脫，收集流份，流份12～15及21～25經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇1∶1)反復(fù)純化，分別得到化合物7(15 mg)和8(10 mg);組分Ⅴ(5.6g)，經(jīng)硅膠柱色譜層析，用氯仿∶甲醇(3∶1～1∶3)梯度洗脫，收集流份，流份15～25經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇1∶1)反復(fù)純化，得到化合物9(25 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色無定形粉末，mp.82～84℃;EIMS m/z:448［M-H2O］+，420，392，376，362，334，125，111，97;1H NMR CDCl3，500 MHz)δ:3.62(2H，t，J=6.7 Hz，CH2OH)，1.54(7H，m)，1.23(60H，m，CH2)，0.86(3H，t，J=6.7 Hz，末端CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的正三十二烷醇基本一致［10］。

化合物2 無色針晶 (丙酮)，mp.137～139℃;EI-MS m/z:414［M］+，396［M-H2O］+，381，329，303，273，255，231，199，161，145，107，95，57;與 β-谷甾醇對照品混合熔點(diǎn)不下降，二者共薄層Rf值一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物3 白色粉末，mp.129～131℃，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性(藍(lán)色)。Molish反應(yīng)呈陰性。EI-MS m/z:184［M］+，153［M-OCH3］+，125［MOCH3CO］+，107，97，79;1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ:7.03(2H，s，H-2，6)，3.80(3H，s，-OCH3);13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:169.5 (COOCH3)，146.7(C-3，5)，140.8(C-4)，121.8(C-1)，110.2(C-2，6)，53.3(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的沒食子酸甲酯基本一致［11］。

化合物4 白色粉末，mp.297～299℃，與胡蘿卜苷對照品混合熔點(diǎn)不下降，二者共薄層，Rf值一致。

化合物5 白色粉末，mp.258～260℃，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性(藍(lán)色)，Molish反應(yīng)呈陰性。EI-MS m/z :170［M］+，153［M-OH］+，125［M-COOH］+;1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ:9.13(3H，s，OH)，6.90(2H，s，H-2，6);13C NMR(DMSO-d6，125 MHz) δ:108.7(C-2，6)，145.3(C-3，5)，121.1(C-1)，138.3(C-4)，167.3(COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的沒食子酸基本一致［11］。

化合物6 淡黃色粉末，mp.＞300℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性(紫紅色)。Molish反應(yīng)呈陰性。EI-MS m/z:302［M］+;1H NMR CD3OD，500 MHz)δ:7.71 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.59(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6')，6.87(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.37 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.17(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR CD3OD，125 MHz)δ:147.8(C-2)，137.6(C-3)，177.8(C-4)，163.5(C-5)，99.5(C-6)，165.4(C-7)，93.5(C-8)，157.8(C-9)，104.2(C-10)，123.8(C-1')，116.2(C-2')，145.8(C-3')，149.7(C-4')，115.9(C-5')，122.3(C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的槲皮素基本一致［12］。

化合物7 黃色粉末，mp.176～178℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性(紫紅色)，Molish反應(yīng)呈陽性。(+) HRESI-MS m/z:471.0233［M+Na］+，325.5436［M-146+Na］+;1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ:12.64 (4-OH)，10.85(7-OH)，9.68(4'-OH)，9.32(3'-OH)，以上均為單峰。7.29(1H，s，H-2')，7.24(1H，d，J=8.5 Hz，H-6')，6.85(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.38(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J =2.0 Hz，H-6)，5.24(1H，s，H-1'')，0.80(3H，d，J =6.0 Hz，H-6'')，4.92(1H，d，J=4.0 Hz)，4.69 (1H，d，J=4.5 Hz)，4.58(1H，d，J=5.5 Hz)，以上三個(gè)為2''，3''，4''位羥基;3.2～4.0(3H，br.s)為糖鏈上質(zhì)子信號;13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ: 177.7(C-4)，164.1(C-7)，161.2(C-5)，157.2(C-2)，148.4(C-4')，145.2(C-3')，134.2(C-3)，121.1 (C-6')，120.7(C-1')，115.6(C-5')，115.4(C-2')，104.0(C-10)，101.8(C-1'')，98.6(C-6)，93.6(C-8)，71.1(C-5'')，70.5(C-3'')，70.3(C-2'')，70.0 (C-4'')，17.4(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的槲皮苷基本一致［12］。

化合物8 黃色針晶(甲醇)，mp.226～228℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性(紫紅色)，Molish反應(yīng)呈陽性。(+)HRESI-MSm/z:487.1254［M+Na］+，325.0951［M-162+Na］+;1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ:12.62(4-OH，s)，10.83(7-OH，s)，9.69(4'-OH，s)，9.12(3'-OH，s)，7.66(1H，d，J=9.0 Hz，H-6')，7.52(1H，br.s，H-2')，6.80(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.19 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.36(1H，d，J=8.5 Hz，H-1'')，5.09(1H，d，J=4.5 Hz)，4.81(1H，d，J =5.5 Hz)，4.40(1H，br.s)，以上三個(gè)為2''，3''，4''位羥基質(zhì)子;4.01(1H，m，H-6''a)，1.12(1H，m，H-6''b)，3.2～4.0(4H，br.s)為糖鏈中質(zhì)子信號;13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:177.4(C-4)，164.1 (C-7)，161.2(C-5)，156.2(C-2)，148.4(C-4')，144.8(C-3')，133.4(C-3)，122.0(C-6')，121.1(C-1')，115.9(C-5')，115.1(C-2')，103.9(C-10)，101.8(C-1'')，98.6(C-6)，93.4(C-8)，75.8(C-5'')，73.1(C-3'')，71.7(C-2'')，71.2(C-4'')，60.1 (C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的金絲桃苷基本一致［12］。

化合物9 白色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp.246～248℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性。Molish反應(yīng)呈陽性。(-)HRESI-MS m/z:461.0833［M-H］-，315.0833［M-H-146］-;1H NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ: 11.08(1H，s，4-OH)，10.77(1H，s，4'-OH)，7.74 (1H，s，H-5')，7.54(1H，s，H-5)，5.47(1H，s，H-1'')，4.90(1H，d，J=5.5Hz，2''-OH)4.67(1H，d，J =6.0Hz，3''-OH)，4.03(3H，s，3-OCH3)，3.16～4.42(多個(gè)H，m，糖鏈中環(huán)上質(zhì)子信號)，1.13(3H，d，J=6.5 Hz，6''-CH3)。13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:158.6(C-7，C-7')，152.6(C-4)，146.4(C-4')，141.8(C-3')，140.1(C-3)，136.2(C-2，C-2')，114.3(C-1')，113.0(C-1，C-6')，111.7(C-5)，111.4 (C-6，C-5')，100.1(C-1'')，71.7(C-4'')，70.0(C-2'')，69.9(C-3'')，69.8(C-5'')，60.9(3-OCH3)，17.8(C-6'')，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的3-甲氧基-4'-鼠李糖鞣花酸基本一致［13］。

4 討論

本文通過對火炭母藥材醇提物乙酸乙酯部分化學(xué)成分研究，發(fā)現(xiàn)黃酮類和酚酸類化合物為其主要成分類別，從量上看，兩者基本相當(dāng)。黃酮類和酚酸類化合物在抗氧化、抗炎和免疫等方面存在相似的藥理活性，但是兩者的作用機(jī)理和作用靶點(diǎn)也存在較大差別［14，15］。因此，建議用黃酮類和酚酸類共同作為質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。

1 Editorial Committee of Chinese Herbal Medicine(中華本草編委會).Chinese Herbal Medicine(中華本草).Shanghai: Shanghai Science and Technology press，1999，Edition 1: 1291.

2 Tan TM(譚天明).The sales volume of‘Wang LaoJi’breakthrough 20 millions packets in the first quarter.J Chin Med Mater(中藥材)，1989，(05):30.

3 Xie XQ(謝賢強(qiáng))，Wu P(吳萍)，Lin LD(林立東)，et al.I-dentification ofChemicalConstituentsfrom Polygonum chinense Linn.J Trop Subtrop Bot(熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào))，2007，15:450-454.

4Wang YG(王永剛)，Xie SW(謝仕偉)，Su WW(蘇薇薇).I-dentification of Chemical Constituents from Polygonum chinense Linn.J Chin Med Mater(中藥材)，2005，28:1000-1001.

5 Joshi B，Bisht G，Bisht D.Chemical constituents and antifungal activity of Polygonum chinense.Chem Pharm Bull，1997，14:7-10.

6 Ahmed M，Hassan MA.5，6，7，4'-Tetrahydroxy-3'-methoxyflavone(batatifolin)from Polygonum chinense.Pharmazie，1990，45:225.

7 Zhu H(朱華)，Gao Y(高雅)，Zhang KF(張可鋒)，et al.Content Determination of Quercetin in Polygonum chinense L.from Different Growing Areas.Trad Chin Drug Res＆Clin Pharm(中藥新藥與臨床藥理)，2009，20:557-559.

8 Lin HZ(林煥澤)，Wu XR(吳秀榮).Determination of quercitrin in Polygonum chinense L.by HPLC.Chin J Hosp Pharm(中國醫(yī)院藥學(xué)雜志)，2006，26:1032-1033.

9 Lai FE(賴飛蛾)，Gao Y(高雅)，Zhang KF(張可鋒).Tannins content determination of Polygonum chinense L.from different growing areas.J Anhui Agri Sci(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué))，2009，37:13596-13599.

10 Xie T(謝韜)，Liu J(劉凈)，Liang JY(梁敬鈺)，et al.Studies on thechemicalconstituentsofArtemisia scoparia Waldst.et kit..Chin J Chin Mater Med(中國中藥雜志)，2005，30:1390-1391.

11 Li N(李寧)，Li X(李銑)，F(xiàn)eng ZG(馮志國)，et al.Chemical constituents from Canavalia gladiata.J Shenyang Pharm Univ(沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào))，2007，24:676-677.

12 Wang J(王靜)，Peng SL(彭樹林)，Wang MK(王明奎)，et al.Chemical Constituents of Hyper ricum monogynum.China J Chin Mater Med(中國中藥雜志)，2002，27:120-122.

13 Ye G，F(xiàn)an MS，Huang CG.Ellagic acid glycosides from the stem bark of Aphananthe aspera.Chem Nat Compd，2007，40: 558-560.

14 Li YX(李云霞)，He WZ(賀文智)，Suo QL(索全伶)，et al.A review of study on the relationships between structure and activity of flavonoids compounds.Inner Mongu Petrochem Indu.(內(nèi)蒙古石油化工)，2004，30(2):10-12.

15 Zhang N(張囡)，Du LL(杜麗麗)，Wang D(王東)，et al.Advances in phenol acids in Chinese herbs.Modern Chin Med.(中國現(xiàn)代中藥)，2006，8(2):25-28.

Chemical Constituents from Polygonum chinensis L.

REN Heng-chun1，WAN Ding-rong2，GU Jing1，ZOU Zhong-mei1*1Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China;2South-Central University For Nationalities，Wuhan 430073，China

To control the quality，the chemical constituents of the aerial part of Polygonum chinensis L.were studied.Nine compounds were isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 chromatography，and their structures were identified as n-heptacosanol(1)，β-sitosterol(2)，methyl gallate(3)，daucosterol(4)，gallic acid(5)，quercetin(6)，quercitrin(7)，hyperoside(8)and 3-O-methy-lellagic acid 4-O-rhamnopyranoside(9)by spectroscopic analysis，respectively.Among them，compounds 1 and 9 were isolated from genus Polygonum for the first time，while 4 and 8 were isolated from this plant for the first time.

Polygonum chinensis L.;Polygonum;flavonoids;ellagic acid glycoside

1001-6880(2012)10-1387-04

2011-11-21 接受日期:2012-03-16

重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(2011ZX09307-002-01)

*通訊作者 Tel:86-10-57833292;E-mail:zmzou@implad.ac.cn

R284.2

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