報(bào)告一種同時(shí)顯示肥大細(xì)胞、血管、神經(jīng)等組織成分的新染色方法

羅明富 宋曉晶

（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸所形態(tài)室，北京100700）

肥大細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)分布極為廣泛，已知肥大細(xì)胞分泌數(shù)十種生物活性物質(zhì)，它們對(duì)機(jī)體血管和神經(jīng)等組織具有重要的生理和病理學(xué)影響和作用［1，2］。但以往的染色方法不能同時(shí)顯示和觀察組織切片內(nèi)肥大細(xì)胞、血管和神經(jīng)等組織彼此之間相互關(guān)系和聯(lián)系［3，4］。我們經(jīng)過(guò)反復(fù)摸索，建立了一種可以同時(shí)顯示這些結(jié)構(gòu)的染色技術(shù)，現(xiàn)介紹如下。

材料和方法

1.實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大白鼠3只，體重200-230g，雌雄不拘，大鼠麻醉后，在后肢取新鮮組織塊，速凍于恒冷箱切片機(jī)內(nèi)，切片厚15μm，吹干待用。

2.試 劑

碘化乙酰膽堿，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；醋酸鈉，醋酸，檸檬酸鈉，硫酸銅，鐵氰化鉀，甲苯胺藍(lán)，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。

3.實(shí) 驗(yàn)方法

3.1 亞鐵氰化銅法示乙酰膽堿酯酶作用液的配制參照［5］；甲苯胺藍(lán)染液配制：甲苯胺藍(lán)1g溶于100ml蒸餾水。

3.2 染色步驟：組織切片固定于4%中性甲醛15-25min后，入蒸餾水充分換洗2次，入配制好的作用液內(nèi)90-120min，37℃。將作用液中的切片在蒸餾水中沖洗2次，切片直接入1%甲苯胺藍(lán)染液中染15s左右。自來(lái)水洗2次，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（5-15s），主要是去掉浮色。常規(guī)酒精脫水，至無(wú)水酒精時(shí)，根據(jù)顯微鏡觀察肥大細(xì)胞顏色深淺，可適當(dāng)調(diào)整脫水時(shí)間，二甲苯透明3-4min，封片。

結(jié) 果

光學(xué)顯微鏡下，從皮膚真皮至皮下組織和肌肉組織分布著大小不一的肥大細(xì)胞，細(xì)胞呈圓形或卵圓形等，胞核圓形，胞質(zhì)內(nèi)含有嗜堿性藍(lán)紫色顆粒。乙酰膽堿酯酶染色的神經(jīng)纖維束呈色澤鮮艷的藍(lán)綠色，呈網(wǎng)狀交織于血管，尤其是在小動(dòng)脈和微動(dòng)脈更為豐富密集（圖1），它們周圍多有肥大細(xì)胞分布或排列，并與血管壁的乙酰膽堿酯酶陽(yáng)性神經(jīng)纖維直接形成接觸（圖2）。目前，已知肥大細(xì)胞分泌數(shù)十種生物活性物質(zhì)，它們對(duì)機(jī)體功能具有重要的，廣泛的影響和作用。大量研究表明，神經(jīng)與免疫系統(tǒng)間存在相互聯(lián)系和影響，肥大細(xì)胞可能通過(guò)釋放顆粒物質(zhì)（如化學(xué)介質(zhì)、神經(jīng)調(diào)質(zhì)等）影響與之接觸的神經(jīng)纖維和末梢，或神經(jīng)末梢亦可能借助神經(jīng)遞質(zhì)或肽類物質(zhì)影響肥大細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)首次將兩種染色方法結(jié)合，可以清晰地同時(shí)顯示肥大細(xì)胞、血管血管壁神經(jīng)纖維等成分，以及它們彼此形成的接觸聯(lián)系，為解釋三者的功能聯(lián)系提供了一定形態(tài)學(xué)依據(jù)和研究方法，對(duì)于這些結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)接觸的實(shí)質(zhì)，還有待電鏡和生理學(xué)的進(jìn)一步觀察分析。

［1］肖淑華，劉陽(yáng)陽(yáng)，魏連海等.肥大細(xì)胞的研究進(jìn)展.生理科學(xué)進(jìn)展，2011，42（2）：104-107

［2］Artico M，Cavallotti C，Cavallotti D.Adrenergic nerve fibres and mast cells：correlation in tat thymus.Immunol Lett，2002，84，（1）：69-76

［3］趙香汝，王家鑫，崔平.肥大細(xì)胞用甲苯胺藍(lán)染色之體會(huì).中國(guó)組織學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2000，9（3）：312

［4］羅明富，崔山佳，張金鈴.新鮮組織肥大細(xì)胞快速染色方法的探討與應(yīng)用.中國(guó)組織學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2010，19（1）：108-109

［5］陳嘯梅，周文郁，彭俊云等（編）.組織化學(xué)手冊(cè)，第1版，北京：人民衛(wèi)生出版社，1982，172-174

圖 版 說(shuō) 明

圖1 肥大細(xì)胞（m）沿血管（b）和神經(jīng)纖維網(wǎng)（n）排列，乙酰膽堿酯酶與甲苯胺蘭染色×200

圖2 肥大細(xì)胞（m）與血管（b）和神經(jīng)纖維（n）發(fā)生接觸，乙酰膽堿酯酶與甲苯胺蘭染色×200

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1Mast cells（m）were arranged along the blood vessels（b）and nerve fibers （n），acetylcholinesterase and toluidine blue staining× 200

Fig.2Mast cells（m）attached vascular（b）and nerve fibers（n），acetylcholinesterase and toluidine blue staining×200