HPLC法測(cè)定甲磺酸伊馬替尼片的含量

趙海橋，劉存領(lǐng)，付 建，蘇貴勇

(1.山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，山東東明274500;2.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250012; 3.中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京210009)

甲磺酸伊馬替尼用于治療慢性粒細(xì)胞白血病(CML)急變期、加速期或α－干擾素治療失敗后的慢性期患者;不能手術(shù)切除或發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性胃腸道間質(zhì)腫瘤(GIST)患者。進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)JX20040087采用梯度洗脫測(cè)定甲磺酸伊馬替尼片的含量，需要至少兩元泵的液相才能測(cè)定，限制了該方法的普遍使用性。本文建立的方法，只需普通的液相就能測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津SPD－10A高效液相色譜儀。

1.2 試藥 甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品(山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，1102001);甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純;水為純化水;其他試劑均為分析純;甲磺酸伊馬替尼片(山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;批號(hào):1106001、1106002、1106003;規(guī)格:0.1 g)。

2 方法與結(jié)果［1］

2.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以含0.04%辛烷磺酸鈉的20 mmol·L－1磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)至pH 2.5)－甲醇(40∶60)為流動(dòng)相，流速為1 mL ·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為268 nm，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品約24 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取甲磺酸伊馬替尼片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取粉末適量(約相當(dāng)于伊馬替尼20 mg)，置100 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲20 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 根據(jù)甲磺酸伊馬替尼片的制劑配方，制備不含甲磺酸伊馬替尼的陰性對(duì)照粉末。精密稱取陰性對(duì)照粉末適量(約相當(dāng)于伊馬替尼20 mg的量)，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn) 輔料干擾試驗(yàn):分別對(duì)陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣分析，輔料不干擾甲磺酸伊馬替尼的測(cè)定。

破壞試驗(yàn):取甲磺酸伊馬替尼片適量(約相當(dāng)于伊馬替尼20 mg)置100 mL容量瓶中，照下述方法試驗(yàn):①加1.0 mol·L－1鹽酸溶液2 mL并放置8 h作為酸破壞樣品;②加1.0 mol·L－1氫氧化鈉溶液2 mL并放置8 h作為堿破壞樣品;③加3%過(guò)氧化氫溶液2 mL并放置8 h作為氧化破壞樣品;④置4 500 lx光照度下8 h作為光照降解樣品;同時(shí)做空白及輔料空白試驗(yàn)。結(jié)果表明:甲磺酸伊馬替尼對(duì)酸、堿、氧化劑及光照均較穩(wěn)定，各降解產(chǎn)物分離度良好。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品約50.11 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為溶液①，精密量取溶液①2.0、1.0、1.0、1.0 mL，分別置5、5、10、20 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為溶液②、③、④、⑤，按上述液相條件，分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖峰面積。以甲磺酸伊馬替尼峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)計(jì)算得回歸方程為:A=561.32C+ 894.552 7，r=0.999 9。結(jié)果表明甲磺酸伊馬替尼在25.055～501.1 μg·mL－1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照溶液20 μL，按上述液相條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD為1.0%。結(jié)果表明，精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(1106001)樣品適量5份，精密量取，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法，測(cè)定甲磺酸伊馬替尼片的含量，RSD為0.84%，重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的第1份溶液，室溫下在0、2、4、6、8 h測(cè)定，結(jié)果表明，本品的供試品溶液在室溫8 h內(nèi)穩(wěn)定，計(jì)算得:RSD=1.1%，n=5。

2.10 方法準(zhǔn)確度試驗(yàn) 在陰性對(duì)照粉末中分別加入適量的甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在相當(dāng)于供試品溶液80%、100%和120%濃度水平下，分別考察加樣回收率。每個(gè)濃度制備3份。測(cè)定3個(gè)濃度下的平均回收率分別為99.88%、100.12%、100.95%;RSD (n=3)分別為0.36%、0.88%、0.74%。

2.11 樣品測(cè)定 對(duì)批號(hào)為1106001，1106002，1106003的甲磺酸伊馬替尼片樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批樣品制備3份，按外標(biāo)法計(jì)算含量，測(cè)得結(jié)果與進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)比較，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果比較表(n=3)

3 結(jié)果與討論

試驗(yàn)表明，本測(cè)定方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于甲磺酸伊馬替尼的含量測(cè)定。

流動(dòng)相的選擇:參考進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)，減少辛烷磺酸鈉用量的同時(shí)使用磷酸二氫鈉，且在該流動(dòng)相條件下，甲磺酸伊馬替尼的保留時(shí)間較為理想，理論塔板數(shù)高［2］。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅤD.

［2］ 亢瑋，王文義，王友國(guó).HPLC法測(cè)定阿昔莫司片的含量［J］.齊魯藥事，2012，31(3):153－154.