緊密連接蛋白Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達(dá)

張廣超 金銀華 殷 浩 姜國(guó)鋒 (吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院，吉林 吉林 132022)

緊密連接蛋白Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達(dá)

張廣超 金銀華 殷 浩 姜國(guó)鋒 (吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院，吉林 吉林 132022)

緊密連接蛋白;非典型性腦膜瘤;Claudin-6;蛋白激酶C

非典型性腦膜瘤占成人腦膜瘤的5% ～8%，其侵襲性行為導(dǎo)致手術(shù)后容易復(fù)發(fā)。作者前期研究表明Claudin-6表達(dá)下調(diào)可能在腦膜瘤發(fā)生和侵襲中起作用〔1〕。蛋白激酶C(PKC)作為細(xì)胞增殖、分化和凋亡過程信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的磷脂依賴型蛋白激酶，在維持緊密連接(TJs)的功能中發(fā)揮重要作用。作者前期研究也表明PKCθ在侵襲性腦膜瘤發(fā)生發(fā)展中起負(fù)性調(diào)控作用〔2〕。本實(shí)驗(yàn)對(duì)非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6和PKCθ檢驗(yàn)水平進(jìn)行分析，探討Claudin-6和PKCθ表達(dá)的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集手術(shù)后病理證實(shí)非典型腦膜瘤標(biāo)本30例。術(shù)前未經(jīng)過放療或化學(xué)治療。年齡28～74歲，平均50.5歲。男性12例，女性18例。標(biāo)本用10%中性甲醛常溫固定后脫水包埋，制備4μm連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化染色。

1.2 方法 采用免疫組化SP法，檢測(cè)Claudin-6和PKCθ在非典型性腦膜瘤組織中的表達(dá)。以PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 陽性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)同時(shí)出現(xiàn)棕黃色為陽性，單純細(xì)胞質(zhì)著色、細(xì)胞膜著色或細(xì)胞無著色為陰性。采用著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法評(píng)分:選著色良好區(qū)域，在200倍顯微鏡下選5個(gè)視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，然后取均數(shù)，著色細(xì)胞數(shù)＜5%判定為陰性，≥5%為陽性。見圖1。

圖1 非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6、PKCθ蛋白的表達(dá)(S-P，×200)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

Claudin-6表達(dá)定位于非典型性腦膜瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，為棕褐色顆粒。30例非典型性腦膜瘤組織中Claudin-6蛋白陽性表達(dá)5例(見圖1)，陰性25例，陽性率16.7%。PKCθ蛋白表達(dá)定位于腦膜瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，呈棕褐色顆粒。30例侵襲性腦膜瘤組織中PKCθ蛋白表達(dá)陽性10例(見圖1)，陰性20例，陽性率為33.3%。非典型腦膜瘤組織中Claudin-6和PKCθ表達(dá)有相關(guān)性。用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法進(jìn)行相關(guān)分析，rs=0.443，P=0.014。

3 討論

腦膜瘤是顱內(nèi)常見的腫瘤，約占所有顱內(nèi)腫瘤的15%～20%。主要來源于蛛網(wǎng)膜細(xì)胞或向蛛網(wǎng)膜細(xì)胞分化的細(xì)胞。蛛網(wǎng)膜細(xì)胞存在細(xì)胞間的TJs結(jié)構(gòu)〔3〕。2010年，WHO將非典型性腦膜瘤定義為有較多機(jī)會(huì)復(fù)發(fā)和侵襲的一類腦膜瘤，WHO分級(jí)Ⅱ級(jí)。Claudin-6作為TJs的構(gòu)成蛋白，通過影響細(xì)胞黏附性、凝聚力及侵襲性，可能在抑制腫瘤侵襲過程中發(fā)揮一定的重要作用。前期研究顯示〔1〕:Claudin-6在侵襲性腦膜瘤組織中的表達(dá)明顯低于非侵襲性腦膜瘤，Claudin-6表達(dá)下調(diào)可能在腦膜瘤發(fā)生和侵襲中起作用，并可作為腦膜瘤侵襲的判斷指標(biāo)。

PKC是TJs形成和調(diào)節(jié)的重要因子，PKC同工酶在TJs生理功能的保持、病理?xiàng)l件下的反應(yīng)中起重要作用。PKCθ是鈣離子非依賴性蛋白激酶，可以調(diào)控細(xì)胞周期、增殖、分化及凋亡。目前認(rèn)為，PKCθ活性改變?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展中起作用主要是與PKCθ調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的作用有關(guān)〔4〕。前期試驗(yàn)表明〔2〕PKCθ的表達(dá)在腦膜瘤的侵襲發(fā)生發(fā)展中起負(fù)性調(diào)控作用。

本實(shí)驗(yàn)表明，非典型性腦膜瘤組織Claudin-6和PKCθ蛋白表達(dá)存在相關(guān)性，Claudin-6和PKCθ協(xié)同在非典型性腦膜瘤發(fā)生和發(fā)展中起作用。非典型性腦膜瘤組織中PKCθ對(duì)Claudin-6表達(dá)有一定的調(diào)節(jié)作用。Claudins對(duì)細(xì)胞連接處選擇滲透性的調(diào)節(jié)主要是通過PKC途徑實(shí)現(xiàn)。PKC作用于Claudins上特定氨基酸靶點(diǎn)使其磷酸化，TJs功能下降，表現(xiàn)為滲透性增加〔5〕。Claudins對(duì)細(xì)胞連接處選擇滲透性的調(diào)節(jié)主要是通過PKC途徑實(shí)現(xiàn)。

1 張廣超，姜國(guó)鋒，楊曉秋，等.緊密連接蛋白claudin-6在腦膜瘤組織中的表達(dá)〔J〕.國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2009;36(12):953-4.

2 張廣超，楊曉秋，姜國(guó)鋒，等.蛋白激酶C-θ在腦膜瘤組織中的表達(dá)〔J〕.國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2010;37(3):228-9.

3 Hejin P，Habn MD，Elizabeth A，et al.Immcenhistochemical staining for claudin-1 can help distinguish meningiomas from histologic minics〔J〕.Am JClin Pathol，2006;125:203-8.

4 徐瑞明，金順子，劉 揚(yáng)，等.蛋白激酶PKCθ的研究進(jìn)展〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2005;31(4):640-4.

5 Banan A，Zhang L，Shaikh M，et al.Theta isoform of PKC is required for alterations in cytoskeletal dynamics and barrier permeability in intestinal epithelium:a novel function for PKC theta〔J〕.Am JPhysiol Cell Physiol，2004;287(1):C218-34.

R739.45

A

1005-9202(2012)03-0592-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.03.071

吉林市科技局科研基金項(xiàng)目(200903022)

殷 浩(1975-)，男，主治醫(yī)師，主要從事神經(jīng)外科基礎(chǔ)與臨床研究。

張廣超(1968-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事神經(jīng)外科基礎(chǔ)與臨床研究。

〔2011-03-12收稿 2011-06-13修回〕

(編輯 徐 杰)