2例B（A）表型無償獻血者的家系調(diào)查

閆曉鵬 韓惠云 李雪英

河南省焦作市中心血站，河南焦作 454000

2例B（A）表型無償獻血者的家系調(diào)查

閆曉鵬 韓惠云 李雪英

河南省焦作市中心血站，河南焦作 454000

目的 對2例B（A）表型無償獻血者的家系進行調(diào)查，了解該血型在家系中的傳遞情況。 方法 （1）用2個生產(chǎn)廠家的單克隆抗血清和自配的ABO細胞，對獻血者1家系19人、獻血者2家系12人進行ABO正反定型。凡正定型凝集強度＜4+，反定型凝集強度＜2+，或正反定型結(jié)果不符的標本，分別與人源抗-A、抗-B，抗-H，抗-A1，A2及A2B細胞進一步反應進行亞型鑒定。（2）凡血清學確定為亞型或疑為亞型的標本，均由上海市血液中心血型參比實驗室進行基因檢測。 結(jié)果 在獻血者1家系19人中共發(fā)現(xiàn)亞型8人，其中，5人表現(xiàn)為B（A）表型血清學特點，3人表現(xiàn)為 ABX亞型血清學特點，經(jīng)基因檢測均為B（A）02基因攜帶者；獻血者2家系12人中共發(fā)現(xiàn)亞型5人，均表現(xiàn)為B（A）表型血清學特點，經(jīng)基因檢測均為B（A）04基因攜帶者。 結(jié)論 B（A）基因在兩個家系中呈穩(wěn)定的顯性遺傳趨勢，ABO基因定型方法是正確判定血型不可缺少的輔助手段。但在分子生物學還不能普及的基層血站及醫(yī)院，采用家系調(diào)查的方法，觀察弱抗原在家系中的傳遞情況，有時可推測弱抗原的性質(zhì)，對血清學診斷不明確的亞型標本的鑒定具有一定幫助。

B（A）表型；家系調(diào)查；基因；血清學

ABO亞型是指在常見的人類A、B、O、AB 4種血型之下進一步細分的 ABO 血型[1]。比如 A 血型的 A2、Aint、A3、AX、Aend、Am、Ay、Ael等 ，B 血 型 的 B3、BX、Bend、Bm、Bel等 ，AB 型 的 A2B、A3B、AB3、AXB、ABX、cisAB、B（A）等。所有 ABO 亞型均具有遺傳基礎，并可通過家系調(diào)查或分子生物學方法進行確認[2]。本站近日對無償獻血者中發(fā)現(xiàn)的2例B（A）表型進行家系調(diào)查，報道如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 單克隆抗-A、抗-B（分別由上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司和北京金豪生物技術(shù)有限責任公司提供）；人源抗-A、人源抗-B、抗-A1、抗-H、A2細胞、A2B 細胞（均由上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司提供）；所有試劑均在有效期內(nèi)使用。ABO細胞（由本室使用當天自配）。

1.1.2 儀器設備 KA-2200血球洗滌離心機（日本KUBOTA公司）；SBHW2-1型電熱恒溫水浴箱（北京醫(yī)療設備廠有限責任公司）。

1.2 方法

1.2.1 血型血清學試驗 （1）ABO正反定型：分別用2個生產(chǎn)廠家的單克隆抗血清和自配的ABO細胞，對獻血者1家系19人、獻血者2家系12人進行ABO血型鑒定。凡正定型凝集強度＜4+，反定型凝集強度＜2+，或正反定型結(jié)果不符，均視為ABO血型異常，需進一步增加相關試驗進行亞型鑒定。（2）亞型檢測：對ABO血型鑒定異常的標本，增加以下試驗并按文獻[3]進行亞型檢測及結(jié)果判定，①和多克隆人源抗-A、抗-B反應；②和抗-H反應并觀察其反應強度；③和抗-A1反應；④和A2細胞、A2B細胞反應；⑤吸收放散試驗。

1.2.2 分子生物學確認試驗 將血清學檢測為亞型的標本快遞至上海市血液中心，由血型參比實驗室協(xié)助進行ABO基因檢測。

2 結(jié)果

通過血型血清學試驗，在獻血者1家系19人中共發(fā)現(xiàn)亞型8人，其中，5人表現(xiàn)為B（A）表型血清學特點，3人表現(xiàn)為ABX亞型血清學特點；獻血者2家系12人中共發(fā)現(xiàn)亞型5人，均表現(xiàn)為B（A）表型血清學特點。所有血清學確認為亞型或疑為亞型的標本，由上海市血液中心血型參比實驗室進行基因檢測。結(jié)果見表1。

表1 2名獻血者家系異常血型檢測結(jié)果

3 討論

由表1可見，本次2個家系的基因測定結(jié)果均為國內(nèi)已報道的 B（A）*02 和 B（A）*04 等位基因[4]，并在家系中呈穩(wěn)定的顯性遺傳趨勢。B（A）*02的B基因是在nt700處發(fā)生了單堿基突變C＞G，B（A）*04的B基因則是在nt640處發(fā)生了單堿基突變A＞G，從而導致變異的B基因具有了編碼雙功能活性酶的能力。因此，B（A）表型的血清學除了表現(xiàn)基本正常的B抗原特異性外，還表現(xiàn)少量A抗原特異性，極易被誤定為B型而輸注給B型患者，給安全輸血帶來一定隱患。采供血機構(gòu)應選擇高質(zhì)量的抗血清進行血型鑒定，以避免B（A）表型的漏檢[5-8]。

表1還顯示，在血清學檢測時，獻血者1家系中有3人表現(xiàn)為ABX亞型特點，如果不是在B（A）表型家系調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，作為日常工作中遇到的標本，不進行基因檢測，很難證實其弱的B抗原是由于B（A）基因所致。因為基因研究顯示，ABX和B（A）具有完全不同的分子生物學基礎。B（A）表型是由于B基因發(fā)生了單堿基突變而具有了編碼雙功能活性酶的能力，目前國際上報道了 6種 B（A）等位基因，即 B（A）*01～06[4]。而ABX或BX亞型則是由于B基因發(fā)生了單堿基突變而使B轉(zhuǎn)移酶活性降低，導致B抗原弱表達，如Bw03基因即為B基因在nt721處發(fā)生單堿基突變C＞T所致。目前發(fā)現(xiàn)7種新的B等位基因與B的弱表達有關，即 Bw02～08[9]?？梢姡珹BO基因定型方法由于能克服血型血清學方法的限制，是正確判定血型不可缺少的輔助手段。但由于分子生物學技術(shù)目前還難以在基層血站或基層醫(yī)院普及，所以ABO亞型的檢測仍以血型血清學為主。如果遇到血清學診斷不明確的標本，可采用家系調(diào)查的方法，觀察弱抗原在家系中的傳遞情況，有時便可推測弱抗原的性質(zhì)，對鑒定亞型有一定幫助。比如本文中獻血者1首先作為先證者被確認為B（A）表型，在對其家系進行調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，先證者父親的血型為ABX，母親為A，大哥為B（A），二哥和大姐均為ABX，并且B（A）血型在第三代中仍有傳遞，由此推測，獻血者1父親的基因型應該為A/B（A），母親的基因型應該為A/O，獻血者1和其大哥因遺傳了父親的B（A）基因和母親的O基因，所以血型表現(xiàn)為B（A）；而其二哥和大姐因遺傳了父親的B（A）基因和母親的A基因，所以血型表現(xiàn)為ABX；如果是血型表現(xiàn)為ABX的獻血者1的二哥或大姐作為先證者，通過家系調(diào)查可得出同樣的推論。另外，家系調(diào)查對確定患者的血型也非常有用。比如某患者的血型表現(xiàn)為Am，就需要判斷患者的血型是真正的亞型還是由于疾病導致的抗原減弱，如果是亞型，在家系調(diào)查中應該有相同的血型傳遞，否則，很有可能是疾病導致的抗原減弱，應密切觀察血型在病程中的變化情況，必要時進行分子生物學鑒定。

[1] 向東.ABO 亞型的檢測[J].中國輸血雜志，2010，23（8）：577-580.

[2]吳遠軍，吳勇，陳寶嬋，等.Am亞型患者1例的血型血清學及輸血[J].第四軍醫(yī)大學學報，2007，27（9）：863-864.

[3]肖星甫.輸血技術(shù)手冊[M].成都：四川科學技術(shù)出版社，1992：68-70.

[4]范亞欣，孟慶麗，潘凌子，等.1例罕見的B（A）亞型患者的血型鑒定和配血[J].中國輸血雜志，2011，24（10）：892-893.

[5]方建華，劉玉振，溫濤.國產(chǎn)單克隆抗體試劑漏檢AX1例[J].中國輸血雜志，2004，17（2）：119.

[6]徐洪衛(wèi).街頭無償獻血漏檢AXB亞型1例[J].臨床輸血與檢驗，2006，8（1）：57.

[7]王宏法，劉玉振.國產(chǎn)血型定型試劑導致BX亞型漏檢1例原因分析[J].中國誤診學雜志，2008，8（25）：6152-6153.

[8]宿蘭，楊世英，廉維，等.罕見的B（A）表型血清學及基因檢測[J].中國輸血雜志，2010，23（3）：200-202.

[9]李蓓，李繼明，郭忠慧，等.1例BX亞型的分子生物學研究[J].中國輸血雜志，2006，19（1）：33-34.

Family Investigation of 2 cases of B(A)phenotype gratis blood donors

YAN Xiaopeng HAN Huiyun LI Xueying
The Central Blood Station of Jiaozuo City in Henan Province,Jiaozuo 454000,China

ObjectiveTo investigate the genealogy of 2 cases of B(A)phenotype gratis blood donors,in order to understand the transmission of the blood type in genealogy.MethodsMonoclonal antiserum produced by two manufacture factories and self-make ABO cells were used to proceed ABO positive and negative stereotypes among 19 people of blood donor 1 genealogy and 12 people of blood donor 2 genealogy.Specimen with positive stereotypes aggregation intensity＜4+,negative stereotypes aggregation intensity＜2+,or non-inconformity of positive and negative stereotypes results were given subtypes appraisal by further reaction with human anti-A,anti-B,anti-H,anti-A1,A2 and A2B cell.Subtype or subtype suspected specimen which were confirmed by serology were given genetic testing by blood type CST laboratory of Shaihai city blood center.ResultsAmong 19 people in blood donor 1 genealogy found subtype in 8 people,of whom 5 people expressed serological characteristics of B(A)phenotype,3 people expressed serological characteristics of ABX phenotype.Genetic testing showed that they were all B(A)02 genecarriers.Among 12 people in blood donor 2 genealogy found subtype in 5 people,who all expressed serological characteristics of B(A)phenotype.Genetic testing showed that they were all B(A)02 genecarriers.ConclusionB(A)gene shows a stable dominance heredity trend in two families.ABO gene stereotypes method is the necessary auxiliary means to correctly determine the blood type.Basic level blood stations and hospitals which can not popularize molecular biology,family study method is adopt to observe the weak antigen transmission in genealogy,and sometimes can speculate the character of weak antigen.It has helped to identify subtypes specimens which can not be diagnosed by serology.

B(A)phenotype;Family investigation;Gene;Serology

R457.1+1

A

1674-4721（2012）06（b）-0072-02

2012-05-08 本文編輯：魏玉坡）