中藥復(fù)方藥效成分研究進展

惠婷婷 夏忠庭 張?zhí)m蘭 周水平

1.天津中醫(yī)藥大學，天津 300193；2.天津天士力集團有限公司，天津 300410

中藥復(fù)方具有很好的療效，但是由于它的藥效成分不明確，從而阻礙了中藥復(fù)方的現(xiàn)代化。中藥復(fù)方的藥效成分一般指單味中藥以及中藥復(fù)方中產(chǎn)生藥效的化學成分，即有效成分，如苷類、生物堿、有機酸、黃酮、皂苷等。化學成分研究有助于中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)突破研究現(xiàn)狀，有利于解釋中藥方劑的配伍規(guī)律，以及配伍過程中化學成分的變化規(guī)律，為精簡方劑、優(yōu)化制劑工藝和提高制劑質(zhì)量提供數(shù)據(jù)支持。在人類與疾病的斗爭中中藥復(fù)方發(fā)揮了巨大的作用，因此，中藥復(fù)方現(xiàn)代化具有十分重要的地位。藥效成分研究是其有神奇療效的秘密所在。因此，復(fù)方藥效成分研究在中藥復(fù)方研究中占有重要地位。

1 中藥復(fù)方藥效成分研究的思路

中藥復(fù)方是在中醫(yī)藥理論指導下，根據(jù)臨床需要，按照一定的組方原則與方法，由多味中藥形成的化學成分組合體。筆者認為，中藥復(fù)方研究的思路是以藥理、藥效為導向的化學成分研究，其作用是由這個特定的組合體作用于機體所產(chǎn)生的，而中藥藥效成分是復(fù)方發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，所以對復(fù)方成分，即化學成分的深人研究是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵和核心[1]。近年研究表明，中藥復(fù)方化學成分并不是單味中藥化學成分的簡單相加，可能有新成分的產(chǎn)生或可能產(chǎn)生一些其他動態(tài)變化。同樣，其整體功效也不等于單味藥功效的簡單相加。因此系統(tǒng)的研究中藥復(fù)方藥效化學成分具有一定的必要性。

目前并沒有統(tǒng)一的研究方法，研究者及學者達成一個原則性共識“擱置爭議，全面發(fā)展”，從中醫(yī)藥特色理論開發(fā)，尋求符合中醫(yī)藥特色的中藥復(fù)方藥效成分研究之路。

2 中藥復(fù)方藥效成分研究的方法

2.1 拆方研究

拆方研究是將處方中的中藥逐步減去一味或多味中藥，觀察療效的變化，逐步縮小研究范圍，最終搞清楚必須保留的藥味，從中尋找有效成分[2]。

拆方研究主要有3個途徑：①確定中藥復(fù)方中的主要藥物或活性物質(zhì)，熊玉霞等[3]采用試管凝膠法和動態(tài)濁度法分別測定瀉心湯及其拆方的含藥血清體外抗內(nèi)毒素活性，結(jié)果表明瀉心湯組方中發(fā)揮抗內(nèi)毒素作用的關(guān)鍵藥味是大黃，其次是黃芩，大黃-黃芩為瀉心湯抗內(nèi)毒素的有效藥對；②確定發(fā)揮增效減毒作用的最佳組合，蔡徐驕[4]研究表明，附子毒性成分的溶出和水解是一個復(fù)雜的有機過程，受糖、鹽、溶劑和pH等多個因素的綜合作用，附子配伍大黃后確實能促進總堿的溶出和醋性生物堿的水解，能夠增效減毒；③確定復(fù)方藥物間的最佳劑量配比關(guān)系，敖慧等[5]通過研究小半夏湯治療化療后嘔吐模型的藥效最佳配比，結(jié)果表明按1∶2配比效果最佳。通過以上途徑，最終達到精簡方劑的目的，劉鵬等[6]通過對降脂清肝方及其拆方的研究，證實雖各組肝脂酶（HL）無顯著性差異，但丹姜組有升高趨勢，可為進一步拆方研究提供依據(jù)。

中藥復(fù)方拆方研究，有助于闡明中藥復(fù)方的配伍組成原理及作用機制，明確中藥復(fù)方的藥效成分，為提高中藥復(fù)方制劑質(zhì)量和指導臨床合理用藥提供依據(jù)，同時也為創(chuàng)新型中藥研發(fā)以及中醫(yī)藥理論的發(fā)展奠定基礎(chǔ)[7]。

2.2 中藥復(fù)方指紋圖譜及其譜效關(guān)系

中藥復(fù)方指紋圖譜是復(fù)方制劑經(jīng)一定處理后，采用現(xiàn)代的分析手段，表達的色譜、光譜或聯(lián)用的圖譜，用以表達復(fù)方化學成分的特征，是中藥現(xiàn)代化的突破口與關(guān)鍵技術(shù)之一[8]。中藥復(fù)方譜效學指將復(fù)方指紋圖譜與藥效結(jié)果結(jié)合起來，將復(fù)方指紋圖譜中化學成分的特征與復(fù)方藥效研究聯(lián)系起來，建立有意義的復(fù)方譜效關(guān)系，從而反映制劑內(nèi)在的質(zhì)量[9]。

楊柳等[10]利用HPLC-DAD建立白芍的高效液相色譜指紋圖譜，得到11個共有峰，采用質(zhì)譜指認了9個峰。該指紋圖譜特征性及專屬性強，與含量測定結(jié)合可用于全面制約白芍的質(zhì)量。中藥質(zhì)量控制是制約中藥發(fā)展、走向國際市場的瓶頸。指紋圖譜研究是中藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵技術(shù)之一，可以完善表達中藥的整體性特征，為現(xiàn)代中藥的質(zhì)量控制、鑒定提供新的思路和方法，同時為中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)研究奠定基礎(chǔ)。竇志華等[11]通過譜效關(guān)系分析，研究復(fù)方五仁醇膠囊及藥材的含藥血清指紋圖譜，目的是闡明復(fù)方五仁醇膠囊保肝作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，結(jié)果表明，主要來自君藥五味子所含的木脂素類成分。

中藥譜效學是以中藥指紋圖譜研究為基礎(chǔ)，并結(jié)合藥理藥效結(jié)果的科學研究。譜效學研究所獲得的信息可以進一步闡明與機體相關(guān)的主要藥效成分，為識別中藥復(fù)方制劑藥效成分研究奠定基礎(chǔ)。

2.3 中藥血清藥物化學和血清藥理學

“血清藥物化學”和“血清藥理學”的概念是由日本學者田代真一首次提出的[12]，該方法主要是用于觀測血清中外源性生物活性物質(zhì)以及這些物質(zhì)的作用和代謝規(guī)律，整體的過程是，給動物灌服中藥一定時間后，取其血清進行化學成分分析及其鑒定，并將鑒定出的化學成分進行藥理學研究，這樣就可以分析出具有藥效的化學成分，從而推斷出中藥復(fù)方的藥效成分。

常用研究方法即應(yīng)用HPLC、HPLC-MS、UPLC-MS等儀器，分析動物含藥血清中的成分，結(jié)合復(fù)方的藥理藥效，研究單個化學成分與復(fù)方藥效的關(guān)系，最終確定復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。Yang等[13]采用光電二極管陣列檢測器和質(zhì)譜技術(shù)，研究豬口服補陽還五湯的入血成分，共有45個特征的高效液相色譜峰進行檢測，其中9個峰已通過結(jié)構(gòu)鑒定確定為原型成分并且與報道的相關(guān)藥效成分一致，說明復(fù)方入血成分與藥效成分具有一定的相關(guān)性?？梢姀闹兴帍?fù)方的入血成分探討其藥效成分的方法是可行的。王寧寧等[14]通過研究給藥后癲癇大鼠血清對離體海馬腦片的作用，觀察含藥血清對癲癇大鼠海馬腦片場電位的影響。結(jié)果表明，給癲癇大鼠灌胃中藥復(fù)方提取液后，從眼眶靜脈取出的含藥血清均能使癲癇大鼠海馬腦片誘發(fā)場電位的幅度明顯下降，同時場電位恢復(fù)正常的時間也明顯縮短（P＜0.05），進而表明復(fù)方中藥能降低癲癇大鼠海馬腦片誘發(fā)場電位的幅度，證明該復(fù)方中藥具有抗癲癇作用。

血清藥理學和血清藥物化學的提出，建立了新的復(fù)方藥效評價體系，有助于中藥復(fù)方藥效成分的深入研究，為中藥復(fù)方的二次開發(fā)提供了一種新的方法。

2.4 分子生物色譜

分子生物色譜技術(shù)在20世紀中后期問世，它的固定相是一種固著在色譜載體上的生物活性的材料作固定相，這些生物活性材料可以是活性細胞膜、活細胞，甚至活性大分子等，主要是研究藥物與生物大分子、靶體或細胞間相互作用的一種色譜系統(tǒng)[15]。

Wang等[16]對中國傳統(tǒng)處方龍膽瀉肝湯進行全面的二維生物色譜指紋圖譜分析，主要采用人血清蛋白柱和反向高效液相色譜，并結(jié)合HPLC-APCI-MS將中國傳統(tǒng)處方龍膽瀉肝湯與人血清蛋白相互結(jié)合的化合物進行分離分析，鑒定出了19種活性成分。結(jié)果表明，天然產(chǎn)物的生物指紋圖譜分析可使用全面的二維生物色譜系統(tǒng)對其進行研究。Wang等[17]制訂了一個全面的二維HPLC系統(tǒng)與固定化脂質(zhì)體色譜（ILC）與RP柱串聯(lián)，用于復(fù)方龍膽瀉肝湯膜滲透性化合物的篩選和分析。結(jié)果表明，制訂的全面二維色譜系統(tǒng)可識別復(fù)雜的矩陣，如傳統(tǒng)的中醫(yī)方劑提取物的膜滲透性的天然產(chǎn)品。

分子生物色譜技術(shù)與生物醫(yī)學相結(jié)合，產(chǎn)生了許多新的技術(shù)與方法，并進一步推動了中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究，從而為其走向國際市場鑒定了基礎(chǔ)。

3 討論

中醫(yī)藥是中華民族幾千年歷史和文化沉淀的巨大財富，具有廣闊的市場。中醫(yī)藥講究天人合一，目的是提高生命質(zhì)量，與西藥相比，其副作用小，療效穩(wěn)定，然而其作用機制無法明確解釋，從而阻礙了中醫(yī)藥推向國際市場。中藥復(fù)方藥效成分研究可以明確中醫(yī)藥治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)是復(fù)方具有神奇療效的秘密所在。

近年，各個學科的飛速發(fā)展，例如細胞生物學、計算機技術(shù)、基因組學、蛋白質(zhì)學等，使得中藥復(fù)方藥效成分研究產(chǎn)生了許多新的技術(shù)與方法，推動了中藥現(xiàn)代化發(fā)展的歷史進程。隨著多學科的相互滲透以及不斷的深入研究，產(chǎn)生了許多研究中藥復(fù)方的新思路與新方法，并且進一步完善了傳統(tǒng)中醫(yī)藥的相關(guān)理論，使中藥復(fù)方的作用更明確，療效更佳，配伍、劑量以及工藝等更科學。采用科學的方法研究復(fù)方，解開中醫(yī)藥神秘的面紗，從而使中藥復(fù)方研究走向科學、面向世界，真正讓中醫(yī)藥在人類對抗疾病的過程中做出巨大的貢獻。

[1]劉建勛，任鈞國.中藥復(fù)方作用物質(zhì)基礎(chǔ)研究探討[J].中藥研究與信息，2004，6（12）：8-11.

[2]李偉東，蔡寶昌.中藥復(fù)方研究思路的探討[J].中藥新藥與臨床藥理，2004，15（3）：216-218.

[3]熊玉霞，孟憲麗，張藝，等.瀉心湯及其拆方抗內(nèi)毒素作用研究[J].中藥藥理與臨床，2007，23（1）：7-9.

[4]蔡徐驕.附子配伍大黃減毒增效物質(zhì)基礎(chǔ)初步研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2007.

[5]敖慧，李生茂，蒲強紅.小半夏湯治療化療后嘔吐模型的藥效最佳配比研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，23（8）：1608-1610.

[6]劉鵬，徐宗佩，任永麗，等.降脂清肝方及其拆方對脂肪肝家鴨FFA、LPL、HL 的影響[J].實用中醫(yī)藥雜志，2007，23（9）：550-551.

[7]呂祥，李柏.中藥復(fù)方拆方研究進展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2008，15（10）：105-106.

[8]侯小平，何新新，蘇薇薇.中藥指紋圖譜質(zhì)量控制技術(shù)[J].中藥材，2001，24（5）：370-371.

[9]何毓敏，張長城，袁丁.探討基于譜效關(guān)系的中藥質(zhì)量評價的物元分析新方法[J].中草藥，2009，40（8）：1182-1185.

[10]楊柳，許舜軍，田潤濤，等.白芍的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].藥學學報，2007，41（1）：71-74.

[11]竇志華，羅琳，丁安偉，等.復(fù)方五仁醇膠囊含藥血清指紋圖譜與保肝作用的譜效關(guān)系[J].第四軍醫(yī)大學學報，2008，29（2）：116-118.

[12]王喜軍，張寧，孫暉，等.六味地黃丸的血清藥物化學研究[J].中國天然藥物，2004，2（4）：219-222.

[13]Yang D，Cai S，Liu H，et al.On-line identification of the constituents of Buyang Huanwu decoction in pig serum using combined HPLCDAD-MS techniques[J].Journal of Chromatography B，2006，831（1-2）：288-302.

[14]王寧寧，李月，姜明燕.血清藥理學方法研究復(fù)方中藥對癲癇大鼠離體腦片的作用[J].中藥材，2008，31（4）：573-575.

[15]方藝霖，張藝，肖小河，等.細胞膜色譜技術(shù)用于中藥活性成分篩選的研究進展[J].中草藥，2008，39（7）：1119-1121.

[16]Wang Y，Kong L，Hu L，et al.Biological fingerprinting analysis of the traditional Chinese prescription Longdan Xiegan Decoction by on/offline comprehensive two-dimensional biochromatography [J].Journal of Chromatography B，2007，860（2）：185-194.

[17]Wang Y，Kong L，Lei X，et al.Comprehensive two-dimensional highperformance liquid chromatography system with immobilized liposome chromatography column and reversed-phase column for separation of complex traditional Chinese medicine Longdan Xiegan Decoction[J].Journal of Chromatography A Quality Control of Traditional Chinese Medicines，2009，1216（11）：2185-2191.