熟地黃多糖對H22、S180荷瘤小鼠抑瘤作用及存活時間的影響

吳勃巖，王雪，王君龍，徐紹娜，梁穎

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

熟地黃是經(jīng)生地黃炮制而成，味甘性微溫，是常用的補肝腎、益精血中藥，功專養(yǎng)血滋陰，填精益髓，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。熟地黃多糖是中藥地黃的有效成分之一，有資料表明，熟地黃多糖具有抗突變，抗衰老，增強機體免疫功能等作用［1－3］。本實驗以不同劑量的熟地黃多糖對荷瘤小鼠進行灌胃給藥，觀察其腫瘤生長抑制率、生命延長率、肝/體比、脾臟指數(shù)的影響，探討熟地黃多糖的抗腫瘤作用，為臨床治療惡性腫瘤提供科學的實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

動物昆明種小鼠50只，體質(zhì)量(20±2)g，雌雄各半，由黑龍江中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供;瘤株H22、S180腹水瘤株(哈爾濱醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院)。

1．2 實驗方法

1．2．1 熟地黃多糖的提取

實驗采取水提醇沉法提取熟地黃多糖。沉淀依次用無水乙醇，丙酮，無水乙醚洗滌，再用三氯乙酸溶液脫蛋白，烘干，得到熟地黃多糖。

1．2．2 腫瘤模型的制備

傳代7天后，無菌條件下取生長良好的H22、S180荷瘤小鼠腹水，用生理鹽水1∶2稀釋，于每只小鼠右前腋下接種0．1ml，待其長為實體瘤，陽性率為100%。

1．2．3 抑瘤率檢測

接種后，將小鼠隨機分為5組，每組10只。陰性對照組(模型組)，以生理鹽水灌胃給藥，每日1次，連

基金項目:黑龍江中醫(yī)藥大學優(yōu)秀青年教師支持項目(2012)

作者簡介:吳勃巖(1958－)，女，教授，碩士研究生導師，主要從事中藥抗腫瘤研究。

通訊作者:梁穎(1978－)，女，講師，主要從事中藥抗腫瘤研究。

收稿日期:2012－06－18

修回日期:2012－07－12

續(xù)10天。陽性對照組(環(huán)磷酰胺組)，腹腔注射環(huán)磷酰胺(40mg/kg)，每日1次，連續(xù)給藥3天。熟地黃多糖高劑量組(1 000mg/kg)、中劑量組(500mg/kg)、低劑量組(250mg/kg);灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。停藥24h后處死小鼠，稱取小鼠體質(zhì)量，剝離瘤體，計算抑瘤率。

抑制率=［(對照組平均瘤重 －用藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重］×100%

1．2．4 生命延長率檢測

選取昆明種小鼠，雌雄各半，接種瘤株后，隨機分為3組，每組10只。陰性對照組，以生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)10天。陽性對照組，腹腔注射環(huán)磷酰胺(40mg/kg)，每日1次，連續(xù)3天。根據(jù)抑瘤率測定，選取抑瘤效果最好的熟地黃多糖中劑量作為最佳劑量組，即500mg/kg/d，灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。10天后停止給藥，記錄其自然生存天數(shù)，計算其生命延長率。

生命延長率=［(對照組平均生存天數(shù)－用藥組平均生存天數(shù))/對照組平均生存天數(shù)］×100%

1．3 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠肝/體比、脾臟指數(shù)的觀察

取昆明種小鼠雌雄各半，接種H22腹水瘤株后，隨機分成3組，每組10只。陰性對照組，灌胃給生理鹽水，每日1次，連續(xù)10天。陽性對照組，每日腹腔注射環(huán)磷酰胺(40mg/kg)1次，連續(xù)給藥3天。根據(jù)抑瘤率測定，選取抑瘤效果明顯的熟地黃多糖中劑量作為最佳劑量設組，以500mg/kg/只的劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。末次給藥24h后處死小鼠，稱取小鼠體質(zhì)量、肝重及脾重，計算肝/體比和脾臟指數(shù)。

1．4 統(tǒng)計學方法

結(jié)果以(均數(shù)±標準差)表示，以SPSS10．0軟件處理，用t檢驗。

2 結(jié)果

2．1 熟地黃多糖對H22、S180荷瘤小鼠的體內(nèi)抑瘤作用

熟地黃多糖對H22肝癌型腫瘤的抑制情況為熟地黃多糖低、中劑量組的抑制率分別為 30．34%、42.76%，與模型組比較差異極顯著(P＜0．01);熟地黃多糖高劑量組抑制率為20．00%，與模型組比較差異顯著(P＜0．05);環(huán)磷酰胺組與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01)。

熟地黃多糖對S180肉瘤的抑制情況，熟地黃多糖低劑量組的抑制率為15．38%，與模型組比較差異不顯著(P＞0．05);熟地黃多糖中劑量組對S180肉瘤型腫瘤的抑制率為36．36%，與模型組比較差異非常顯著(P＜0．01);熟地黃多糖高劑量組的抑制率為27.27%，與模型組比較差異顯著(P＜0．05);環(huán)磷酰胺組與模型組比較差異非常顯著(P＜0．01)。

熟地黃多糖對H22肝癌型腫瘤、S180肉瘤型腫瘤均有抑制作用。但熟地黃多糖低劑量組對H22肝癌型腫瘤的抑制作用要強于對S180肉瘤型腫瘤的抑制作用。結(jié)果見表1，表2。

表1 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用的影響(±s)

表1 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用的影響(±s)

分組 熟地黃多糖(mg/kg) 環(huán)磷酰胺(mg/kg) n 平均瘤重 抑瘤率(%)模型組 － －10 1．45 ±0．21 －環(huán)磷酰胺組 － 40 10 0．46±0．08＊＊ 68．28熟地黃多糖低劑量組 250 － 10 1．01±0．12＊＊ 30．34熟地黃多糖中劑量組 500 － 10 0．83±0．15＊＊ 42．76熟地黃多糖高劑量組 1000 － 10 1．16±0．23*20．00

表2 熟地黃多糖對S180荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用的影響(±s)

表2 熟地黃多糖對S180荷瘤小鼠體內(nèi)抑瘤作用的影響(±s)

注:與陰性對照組比較，*P ＜0．05;＊＊P ＜0．01。

分組 熟地黃多糖(mg/kg) 環(huán)磷酰胺(mg/kg) n 平均瘤重 抑瘤率(%)模型組 － －10 1．43 ±0．22 －環(huán)磷酰胺組 － 40 10 0．43±0．09＊＊ 69．39熟地黃多糖低劑量組 250 － 10 1．21±0．36 15．38熟地黃多糖中劑量組 500 － 10 0．91±0．30＊＊ 36．36熟地黃多糖高劑量組 1000 － 10 1．04±0．33*27．27

2．2 熟地黃多糖對H22、S180荷瘤小鼠生命延長率的實驗結(jié)果

熟地黃多糖(500mg/g)能延長H22、S180荷瘤小鼠的存活時間，延長率分別為38.56%和44.62%，與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01);環(huán)磷酰胺組的延長率分別為26.06%和40.62%，與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01)。結(jié)果見表3，表4。

表3 熟地黃多糖對S180荷瘤小鼠生命延長率的影響(±s)

表3 熟地黃多糖對S180荷瘤小鼠生命延長率的影響(±s)

分組 熟地黃多糖(mg/kg) 環(huán)磷酰胺(mg/kg) n 生存天數(shù) 生命延長率(%)模型組 － －10 16．10 ±1．45 －環(huán)磷酰胺組 － 40 10 22．60±2．82＊＊ 40．62熟地黃多糖組 500 － 10 23．75±2．92＊＊#44．62

表4 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠生命延長率的影響(±s)

注:與陰性對照組比較，＊＊P＜0．01;與模型組比較，*P ＜0.05;與陽性對照組比較，#P ＜0．05。

分組 熟地黃多糖(mg/kg) 環(huán)磷酰胺(mg/kg) n 生存天數(shù) 生命延長率(%)模型組 － －10 16．00 ±1．41 －陽性對照組 － 40 10 20．17±1．17* 26．06熟地黃多糖組 500 － 10 22．17±1．72＊＊#38．56

2．3 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠的肝/體及脾指數(shù)影響的實驗結(jié)果

給藥組與模型組之間小鼠的肝/體比及脾指數(shù)都存在差異(P＜0．05)，說明熟地黃多糖可以提高機體免疫功能，增強體質(zhì);給藥組的脾指數(shù)與環(huán)磷酰胺組之間也存在差異(P＜0．05)，表明熟地黃多糖在抑制腫瘤的同時，對機體重要器官的損傷較環(huán)磷酰胺小。見表5。

表5 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠脾指數(shù)、肝體比的影響(±s，n=10)

表5 熟地黃多糖對H22荷瘤小鼠脾指數(shù)、肝體比的影響(±s，n=10)

注:與模型組比較，*P ＜0．05;與環(huán)磷酰胺組比較，#P ＜0．05。

分組 脾指數(shù)(mg/g) 肝/體(mg/g)環(huán)磷酰胺組8．77 ±1．85 62．69 ±3．91模型組 9．76 ±2．63 66．96 ±3．77熟地黃多糖組 6．33 ±1．12*# 60．18 ±5．08*

3 討論

熟地黃是生地黃的炮制品，性甘微溫，歸肝腎經(jīng)，具有補血滋陰、益精填髓、長肌肉，生精血，補五臟內(nèi)傷不足，通血脈，利耳目，黑須發(fā)的功效，是很好的滋陰補血藥，被稱為“壯水之主，補血之君”，是傳統(tǒng)的補益延壽中藥。熟地黃多糖是地黃的主要活性成分之一，本實驗通過觀察荷瘤H22、S180小鼠的抑瘤率、生命延長率、脾臟指數(shù)、肝/體比以及用藥前后的體質(zhì)量等指標變化，對熟地黃多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用進行了探討。結(jié)果表明，熟地黃多糖對H22、S180荷瘤小鼠腫瘤生長都具有較強的抑制作用，并能延長荷瘤小鼠存活時間，研究結(jié)果提示，熟地黃多糖對H22肝癌型腫瘤的抑制作用要優(yōu)于對S180肉瘤型腫瘤的抑制作用。中醫(yī)理論認為，“正氣存內(nèi)，邪不可干”，機體的正氣強弱對疾病的產(chǎn)生和發(fā)展有直接的影響。熟地黃作為補益類的中草藥，可以提高機體的免疫機能，增強機體抵御疾病的能力。本實驗通過用藥組和對照組對荷瘤小鼠生存時間影響的比較，提示熟地黃多糖能顯著地提高機體的正氣，抑制腫瘤的生長，增強機體的免疫功能，延長存活時間。