幾種藥用植物總多酚含量及其抗氧化活性比較

歐陽(yáng)玉祝，吳道宏，李 勇

(1.植物資源保護(hù)與利用湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.吉首大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，湖南吉首416000)

藥用植物是我國(guó)特有的天然植物，具有殺菌抑菌、抗菌消炎、降脂降糖、增強(qiáng)免疫力等多種藥用功能［1－4］。研究表明:大多數(shù)具有抑菌作用的藥用植物都含有黃酮和多酚類(lèi)化合物，不僅能用于臨床作為抗菌藥物，而且以其特有的抗衰老、抗氧化、清除過(guò)氧自由基，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收等營(yíng)養(yǎng)功能，廣泛用于食品和化妝品等領(lǐng)域［5－7］，是一種具有良好應(yīng)用前景的天然抗氧劑。目前，從藥用植物中提取黃酮化合物的報(bào)道很多，而提取多酚化合物的報(bào)道較少［8－9］。植物多酚是一種具有延緩人體衰老、消除體內(nèi)自由基和抗氧化作用的優(yōu)良食品抗氧劑，被譽(yù)為“第七類(lèi)營(yíng)養(yǎng)素”［10］。本實(shí)驗(yàn)以海金沙、茵陳、過(guò)路黃、連翹和金銀花等抑菌藥用植物為研究對(duì)象，對(duì)總多酚含量和抗氧化活性以及自由基清除能力進(jìn)行比較，研究結(jié)果能夠?yàn)樗幱弥参镩_(kāi)發(fā)天然抗氧劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

過(guò)路黃、金銀花、海金沙采自于吉首地區(qū)，植物植株采回后，經(jīng)洗凈、晾干、切碎，于60℃、0.1 MPa下真空干燥后，用粉碎機(jī)打成20目左右備用。茵陳、連翹購(gòu)置于吉首市藥店，并粉碎備用。BHT為國(guó)產(chǎn)食品級(jí)試劑;無(wú)水乙醇、石油醚、氫氧化鈉、濃鹽酸、磷酸氫二鈉、沒(méi)食子酸、酒石酸鉀鈉、硫酸亞鐵、磷酸二氫鉀等均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

UV－2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司);KQ－250E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SHB－III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);DF－101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);JA2003N型電子天平(上海精密儀器廠)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 總多酚的提取分離

總多酚提取液按參考文獻(xiàn)［11］方法制備，用大孔樹(shù)脂分離法分離，濾液于100 mL容量瓶中用提取溶劑定容，置于冰箱中備用。

1.3.2 抗氧化性實(shí)驗(yàn)

在7個(gè)100 mL圓底燒瓶中加入50 mL 10%植物油溶液(或化妝品溶液)，分別加入2 mL 5種藥用植物多酚提取液和2 mL 0.5%BHT溶液，另一個(gè)不加抗氧劑，在一定溫度下攪拌反應(yīng)，間隔1 h取樣測(cè)其過(guò)氧化值，考查油脂或化妝品的抗氧化性能。

1.4 分析方法

1.4.1 總多酚含量測(cè)定

1.4.1.1 多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 按參考文獻(xiàn)［11］配制沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以酒石酸亞鐵為顯色劑，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)543 nm處吸光度，繪制多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果用計(jì)算機(jī)進(jìn)行線性回歸得回歸方程。

式中:C為沒(méi)食子酸濃度(mg/mL);A為吸光度。

1.4.1.2 藥用植物提取液總多酚含量測(cè)定 提取液總多酚含量用酒石酸亞鐵比色法測(cè)定［11］。取提取液1.0 mL于25 mL容量瓶中定容，測(cè)其543 nm處的吸光度，結(jié)合回歸方程計(jì)算提取液中總多酚質(zhì)量，按下式計(jì)算總多酚提取率。

1.4.2 過(guò)氧化值的測(cè)定

過(guò)氧化值按參考文獻(xiàn)［12］方法測(cè)定。

1.4.3 羥基自由基清除能力測(cè)定

提取液的羥基自由基清除率按照參考文獻(xiàn)［13］方法測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同藥用植物提取液中總多酚含量比較

為了考查上述5種藥用植物中總多酚的含量，分別取5.00 g海金沙、茵陳、過(guò)路黃、連翹和金銀花等5種藥物植物干燥粉末，按照1.3.1方法提取，并按照1.4.1方法測(cè)定總多酚含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 幾種藥用植物提取液的總多酚含量比較

表1結(jié)果表明:5種藥用植物中都含有多酚化合物，其中以金銀花總多酚含量最大，濃度為0.085 8 mg/mL，過(guò)路黃的總多酚含量最小，濃度為0.021 5 mg/mL，濃度大小順序依次為:金銀花＞連翹＞茵陳＞海金沙＞過(guò)路黃。

2.2 藥用植物總多酚提取液的抗氧化活性比較

2.2.1 添加總多酚提取液對(duì)芝麻油過(guò)氧化值的影響

芝麻油中含有大量α－亞麻酸，容易受到諸如溫度，光照和氧化劑等外界因素的影響導(dǎo)致過(guò)氧化值增大，油質(zhì)發(fā)生劣變。為了考查添加藥用植物總多酚提取液對(duì)芝麻油抗氧化性的影響，在7個(gè)100 mL圓底燒瓶中分別取50 mL 10%芝麻油正丁醇溶液，按1.3.2方法于60℃溫度下反應(yīng)，間隔1h取樣按1.4.2方法測(cè)過(guò)氧化值，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 添加藥用植物多酚提取液和BHT對(duì)芝麻油過(guò)氧化值的影響

圖1結(jié)果表明:在60℃下反應(yīng)7 h時(shí)，5種藥用植物提取液的抗氧化活性大小順序?yàn)?海金沙＞茵陳＞金銀花＞過(guò)路黃＞連翹。其中茵陳、金銀花、過(guò)路黃和茵陳的抗氧化活性與BHT差不多。芝麻油中添加海金沙總多酚提取液、BHT和不加抗氧劑的過(guò)氧化值分別為1.546 3 mmol/kg、1.892 0 mmol/kg和1.953 7 mmol/kg;所有藥用植物的抗氧化活性都比BHT好，其中海金沙提取液的抗氧化活性最強(qiáng)，其過(guò)氧化值比加BHT和不加抗氧劑分別低18.27%和20.85%。多酚具有捕集活性過(guò)氧自由基，消除活性自由基影響的作用。所以，所有藥用植物多酚提取液的抗氧化活性都比BHT強(qiáng)。而海金沙提取液中含有山萘酚、原兒茶酸、芹菜素和小麥黃素等多種多酚化合物［14］，這些多酚具有間苯二酚結(jié)構(gòu)，其抗氧化活性比苯酚類(lèi)化合物強(qiáng)［15］，而且不同多酚之間能通過(guò)還原作用起增效作用，對(duì)芝麻油表現(xiàn)出最好的抗氧化活性。

2.2.2 添加總多酚提取液對(duì)雪花膏溶液抗氧化性影響

在7個(gè)100 mL圓底燒瓶中取50 mL 10%雪花膏溶液(溶劑為 C2H5OH∶CHCl3=1∶1(V/V))，按1.3.2方法在60℃溫度下攪拌反應(yīng)7 h，，間隔1 h取樣按1.4.2方法測(cè)過(guò)氧化值，考查添加不同藥用植物多酚提取液對(duì)膏霜類(lèi)化妝品過(guò)氧化值的影響，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 添加多酚提取液對(duì)雪花膏過(guò)氧化值的影響

圖2結(jié)果表明:5種抑菌藥用植物多酚提取液對(duì)膏霜化妝品溶液都有一定的抗氧化活性，其中以海金沙提取液的活性最大;在60℃溫度下加熱7 h，藥用植物和BHT的抗氧化活性大小順序?yàn)?海金沙＞金銀花＞茵陳＞過(guò)路黃＞連翹＞BHT＞無(wú)抗氧劑。化妝品溶液中添加海金沙提取液、BHT和不加抗氧劑的過(guò)氧化值分別為2.457 4 mmol/kg、2.921 8mmol/kg和2.995 9 mmol/kg。添加海金沙多酚提取液比加BHT和不加抗氧劑分別低15.89%和17.97%。因?yàn)楸椒友苌锖投喾踊衔锒寄芡ㄟ^(guò)給出氫自由基捕集活性過(guò)氧自由基，使活性自由基失活，并通過(guò)鏈轉(zhuǎn)移成為不活潑的酚氧自由基，使過(guò)氧化值下降。海金沙提取液中含有多種多酚類(lèi)物質(zhì)，這些多酚化合物的還原能力都比苯酚衍生物強(qiáng)，而且多種多酚之間能通過(guò)還原作用起增效作用，所以，對(duì)化妝品的抗氧化活性最強(qiáng)。

2.3 藥用植物多酚提取液的羥基自由基清除能力比較

為了考查5種藥用植物多酚提取液的羥基自由基清除能力，按1.4.3方法用紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)于536 nm處測(cè)定A樣品、A損傷和A空白，分別計(jì)算不同提取液的羥基自由基清除率，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 藥用植物提取液和BHT的羥基自由基清除率比較

圖3結(jié)果表明:不同植物的總多酚含量不同，羥基自由基清除率也將不同，天然藥用植物提取液的羥基自由基清除率都比合成抗氧劑BHT強(qiáng)，大小順序依次為:連翹＞金銀花＞茵陳＞海金沙＞過(guò)路黃＞BHT，連翹的羥基自由基清除率是BHT的2.99倍。

3 結(jié)論

對(duì)5種藥用植物的總多酚含量進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)提取液的抗氧化活性進(jìn)行了考查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:金銀花的總多酚含量最高，為0.085 8 mg/mL，其多酚含量大小順序?yàn)榻疸y花＞連翹＞茵陳＞海金沙＞過(guò)路黃。海金沙的抗氧化活性最強(qiáng)，在60℃溫度下反應(yīng)7h，芝麻油和膏霜化妝品中添加海金沙多酚提取液，其過(guò)氧化值比加 BHT低18.27%和15.89%;比不加抗氧劑分別低20.85%和17.97%。五種藥用植物提取液的羥基自由基清除率都比合成抗氧劑BHT強(qiáng)，連翹的羥基自由基清除率最大，是BHT的2.99倍。

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