20(S)-原人參二醇干混懸劑的處方及初步質(zhì)量研究

毛晶晶，張彤，王冰，陶建生

(上海中醫(yī)藥大學，上海201203)

20(S)-原人參二醇［20(S)-Protopanaxadiol］作為一種從中藥中提取分離得到的單體化合物，具有顯著的抗抑郁作用，而且毒副作用很小［1-8］。但20(S)-原人參二醇不溶于水，口服生物利用度很不理想，限制了其臨床應(yīng)用［9］。干混懸劑指難溶性固體藥物與適宜輔料制成的粉末狀物或者粒狀物，臨用時加水振搖即可分散成混懸液供口服的固體制劑［10］。干混懸劑作為一種新劑型，藥物吸收良好，不受食物的影響，制成混懸劑后顆粒分布均勻，在胃腸的分布面積大，吸收快，生物利用度高，與液體制劑相比，攜帶使用方便［11-12］。本實驗首次制備了20(S)-原人參二醇干混懸劑，并建立了其質(zhì)量控制方法。

1 儀器和材料

Agilent1200系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，TU—1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)，BS124S型電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)，XS105電子天平(瑞士梅特勒托利多公司)，T2F三維混合機(華爾寶機械有限公司)，DV-Ⅱ+Pro黏度計(美國Brookfieid公司)，Naso—ZS 90激光粒徑測定儀(英國Malvern公司))，F(xiàn)C160錘式粉碎機(上海中藥機械廠);20(S)-原人參二醇(上海中藥創(chuàng)新研究中心，批號:20090216)，20(S)-原人參二醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:111747-200501)，泊洛沙姆(Poloxamer)188(BASF公司，批號:100701)，Avicel CL 611(FMC公司，Lot NO.ENO 9820383)，尼泊金甲酯(無錫江大百泰科技有限公司，批號:2010722)，尼泊金丁酯(無錫江大百泰科技有限公司，批號:20110617)，甜菊素(天津南大凱泰藥業(yè)有限公司，批號:110711)

2 方法與結(jié)果

2.1 20(S)-原人參二醇干混懸劑的處方篩選與制備

2.1.1 確定因素和水平數(shù)根據(jù)單因素考察結(jié)果及干混懸劑的其他要求，確定以處方中Avicel CL611用量(A)，Poloxamer188用量(B)，20(S)-原人參二醇用量(C)為主要考察指標，用L9(34)正交表，設(shè)計3因素3水平的正交實驗，因素水平表見表1。

表1 因素水平表Tab.1 Levels of factors

2.1.2 正交試驗按照正交實驗設(shè)計表要求，取20(S)-原人參二醇與各種輔料制備20(S)-原人參二醇干混懸劑，由于放置3 h后的沉降體積和再分散性均符合藥典規(guī)定，故以混懸液的含有量均勻性RSD(%)和黏度η(mPa·s)為判斷指標優(yōu)選工藝處方。實驗設(shè)計及結(jié)果見表2。

表2 正交試驗結(jié)果Tab.2 Results of orthogonal tests

含有量均勻性測定方法為:從9次正交試驗的混懸液中，分別取上、中、下3層的混懸液各1 g，精密稱定，于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，超聲20 min，過濾，取續(xù)濾液進樣，測含有量，計算三層的含有量差異RSD(%)。RSD越小，表明混懸液中藥物的含有量均勻性越好，服用的時候劑量越精確，故設(shè)定評分規(guī)則見表3。

表3 含有量均勻性評分規(guī)則Tab.3 Scoring rule of content uniformity

黏度的測定方法為:利用數(shù)字黏度儀，選擇28號轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速為30.0 r/min，溫度為室溫(25℃)，記錄黏度η(mPa·s)。為使混懸液中微粒懸浮而不沉降，藥液需要有一定的黏度，但黏度太大，不僅口感差，而且難以傾倒完全，故設(shè)定評分規(guī)則見表4。實驗結(jié)果見表5，方差分析見表6。

表4 黏度評分規(guī)則Tab.4 Rating rule of viscosity

表5 正交試驗結(jié)果Tab.5 Results of orthogonal tests

表6 方差分析Tab.6 Analysis of variance

總分的計算規(guī)則:含有量均勻性的權(quán)重系數(shù)為0.6，黏度的權(quán)重系數(shù)為0.4。

結(jié)果經(jīng)直觀分析可知，以含有量均勻性和黏度為綜合考察指標時，三因素的影響次序有所不同，分別為A＞B＞C，篩選出的最優(yōu)水平搭配為A1B1C1，即Avicel CL611用量為1.5 g，Poloxamer188用量為0.3g，載20(S)-原人參二醇量為0.05 g。

方差分析可知，A、B、C三因素對混懸液的質(zhì)量影響均無顯著性差異。從提高載藥量的角度考慮，C因素選擇第三個水平比較合適，故最終確定最優(yōu)處方為A1B1C3，即Avicel CL611用量為1.5 g，Poloxamer188用量為0.3 g，載20(S)-原人參二醇量為0.07 g。

2.1.3 處方20(S)-原人參二醇50 g，Avicel CL611 1 071 g，Poloxamer 188 214g，甜菊素10 g，尼泊金甲酯5 g，尼泊金丁酯5 g，制成1 000包。2.1.4制備工藝將Poloxamer 188粉碎并過100目篩，稱取適量細粉與主藥和其他輔料，用三維混合機進行混合(67 r/min，2 min)，用復合鋁箔袋分裝成1 000袋，每袋1.335 g，即可。

2.2 定量測定

2.2.1 色譜分析條件固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動相為乙腈-水(90∶10);檢測波長203 nm;柱溫25℃;體積流量1.0 mL/min;進樣量20 μL。見圖1。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備取20(S)-原人參二醇對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 mL含1.216 mg的溶液，即得。

2.2.2.2 供試品溶液的制備稱取20(S)-原人參二醇干混懸劑0.1 g，置于具塞量瓶中，加10 mL無水乙醇適量，密塞，超聲(功率200 W，頻率50 kHz)10 min，放冷，再用無水乙醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2.3 陰性樣品的制備按供試品溶液制備方法制備缺20(S)-原人參二醇的空白輔料樣品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系的考察精密稱取對照品適量，制成質(zhì)量濃度為1 216 μg/mL的對照品母液，分別精密吸取適量稀釋成質(zhì)量濃度為15.2、30.4、60.8、243.2 μg/mL對照品溶液，分別取上述對照品溶液及母液20 μL注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積積分值，結(jié)果表明:20(S)-原人參二醇在15.2～1 216 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。以峰面積A為縱坐標，質(zhì)量濃度C(μg/mL)為橫坐標，計算得回歸方程為A=11.412 6C+174.39(r=0.999 8)。

2.2.4 精密度試驗取2.2.3項下30.4、60.8、243.2 μg/mL對照品，分別于1 d內(nèi)(n=5)、連續(xù)5 d(n=5)，按2.2.1項下進行測定，記錄色譜圖峰面積。結(jié)果低、中、高3個劑量的日內(nèi)精密度RSD分別為1.88%、1.61%和1.54%;日間精密度分別為0.85%、0.77%和0.41%。結(jié)果表明，日內(nèi)及日間精密度均符合2010年版《中國藥典》有關(guān)規(guī)定。

圖1 20(S)-原人參二醇對照品(A)、空白輔料(B)、供試品(C)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of 20(S)-protopanaxadiol(A)，blank accessories(B)and sample(C)

2.2.5 穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，在0、1、2、4、6、8、12、24、48 h分別進樣20 μL，依法測定，計算峰面積的RSD。結(jié)果樣品溶液在考察時間范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性，RSD為1.39%。

2.2.6 重復性試驗精密稱取供試品5份(批號:20110707)，按2.2.1項下重復測定20(S)-原人參二醇的質(zhì)量濃度，計算平均值和RSD，結(jié)果本法重復性良好，RSD為0.33%。

2.2.7 加樣回收率精密稱取對照品適量，加入20(S)-原人參二醇干混懸劑(20110707)中，按

2.2.2.2 項下制備樣品供試液。按2.2.1項高效液相色譜條件項下進行定量測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表7，表中數(shù)據(jù)表明，RSD＜3%，回收率良好。

表7 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)Tab.7 Results of recovery tests(n=9)

2.2.8 定量測定取3批次樣品各10包，混勻后精密稱定20(S)-原人參二醇干混懸劑0.1 g于10 mL量瓶中，加適量無水乙醇，密塞，超聲10 min，放冷，再補足無水乙醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液進行HPLC測定，外標法計算20(S)-原人參二醇質(zhì)量分數(shù)。結(jié)果3批次樣品質(zhì)量分數(shù)分別為3.40%、3.50%、3.50%，RSD分別為0.72%、1.51%、0.54%。

3 加速穩(wěn)定性試驗

將3批20(S)-原人參二醇干混懸劑樣品(批號:20110823、20110824、20110825)按市售藥品包裝，在40℃、相對濕度75%的恒溫恒濕箱中放置3個月，分別于0、l、2、3個月取樣，測定各項質(zhì)量指標，結(jié)果見表8。

表8 20(S)-原人參二醇干混懸劑加速試驗結(jié)果Tab.8 Accelerating test results of 20(S)-protopanaxadiol dry suspension

結(jié)果表明，3批20(S)-原人參二醇干混懸劑經(jīng)過加速試驗3個月，檢測各項質(zhì)量指標，均符合要求。

4 討論

4.1 在確定處方之前，對大量助懸劑進行了篩選，包括海藻酸鈉、黃原膠、卡波姆、PVP、HPMC、MC、HPC、L-HPC、CMCNa、PVA、PEG、Avicel CL611、PVPP、EC等，最后選擇以Avicel CL611作為干混懸劑的助懸劑，因其具有高觸變性，非常適合作為干混懸劑的助懸劑。由于20(S)-原人參二醇屬于水難溶性物質(zhì)，需要潤濕劑降低其在水溶液中的表面張力，而在潤濕劑的選擇過程中，考察了十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉和Poloxamer 188，最后選擇Poloxamer 188作為潤濕劑，不僅輔料安全性好而且潤濕效果最好。在對干混懸劑進行正交試驗處方篩選時，將含有量均勻性和黏度兩項綜合指標作為評價處方的依據(jù)。

4.2 按本研究的處方和方法制備的20(S)-原人參二醇干混懸劑，工藝簡單，且該劑型服用方便，適合抑郁癥患者長期服用。經(jīng)3批樣品的3個月加速試驗考察，結(jié)果表明樣品穩(wěn)定性良好，工藝可行，質(zhì)量可控。采用高效液相色譜法測定20(S)-原人參二醇含有量時，專屬性強、準確度好、靈敏度高、輔料無干擾，方法可行，可用于該樣品的質(zhì)量控制。

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