在動(dòng)物福利和“3R”原則的指導(dǎo)下建立貴州小型豬的實(shí)驗(yàn)方法

吳曙光，王明鎮(zhèn)，詹新義，艾世鵬，周谷于，錢 寧

(1.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴陽 550002；2.南陽市第一人民醫(yī)院，南陽 473000；3.貴陽中醫(yī)學(xué)院08級中醫(yī)英語班，貴陽 550002)

隨著動(dòng)物保護(hù)主義運(yùn)動(dòng)興起及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)“3R”原則(即reduction(減少)、rep lacement(替代)、refinement(優(yōu)化))的實(shí)施，使得犬、非人靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)用越來越受到限制，而小型豬是用食用豬品種經(jīng)過小型化、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化培育而成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在生物醫(yī)學(xué)研究中將逐漸代替犬和非人靈長類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。貴州小型豬是貴陽中醫(yī)學(xué)院培育的實(shí)驗(yàn)用小型豬，是我國最早(1987年)通過省級鑒定的實(shí)驗(yàn)用小型豬。貴州小型豬具有體型小、性情溫順、遺傳穩(wěn)定、實(shí)驗(yàn)?zāi)褪苄詮?qiáng)、抗病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、代謝、疾病發(fā)生等方面與人類相似，廣泛應(yīng)用于高血脂、高血壓、糖尿病、燒傷整形、骨科、口腔外科等實(shí)驗(yàn)研究。一般用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的6～12月齡貴州小型豬體重多為(10～20)kg，但是由于小型豬力量較大，實(shí)驗(yàn)操作如采血、肌內(nèi)注射給藥等均需要數(shù)人保定，給豬只帶來較大的刺激和恐懼，造成嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)。因此，我們在長期實(shí)踐中，基于動(dòng)物福利要求及“3R”原則，建立了一套既能保護(hù)動(dòng)物，減少實(shí)驗(yàn)操作對其造成的刺激和痛苦及恐懼，又簡單方便的小型豬的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，介紹如下。

1 建立本單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會

組織本單位專業(yè)技術(shù)人員、管理人員、飼養(yǎng)管理員，建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會，定期開展相關(guān)倫理學(xué)習(xí)和業(yè)務(wù)培訓(xùn)，教育每個(gè)飼養(yǎng)管理員和實(shí)驗(yàn)人員在生產(chǎn)一線和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中，注重動(dòng)物福利中動(dòng)物5大自由，實(shí)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物“3R”原則；監(jiān)督本所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物福利和“3R”原則措施實(shí)施情況。

2 飼養(yǎng)管理員及技術(shù)員和動(dòng)物構(gòu)建良好的信任關(guān)系

實(shí)驗(yàn)用的小型豬是由長期馴養(yǎng)的家畜——地方豬種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化培養(yǎng)而成，在長期的馴養(yǎng)過程中，與人類已形成了較為密切的信任關(guān)系，所以小型豬的飼養(yǎng)管理工作中，飼養(yǎng)員要密切接觸豬群，通過氣味、聲音、飼喂、撫觸等方式和豬只建立良好的信任關(guān)系。建立相互間的信任關(guān)系以后，豬只對飼養(yǎng)員的操作警覺性降低，主動(dòng)配合簡單的操作，有利于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，給飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)研究帶來極大的方便。

3 肌內(nèi)注射給藥方法

貴州小型豬的肌內(nèi)注射給藥由飼養(yǎng)員或者與豬群有良好的信任關(guān)系的技術(shù)員完成。選用獸用鋼制短針頭，飼養(yǎng)員手持注射器，一邊用言語與動(dòng)物交流，一邊緩慢靠近動(dòng)物，在豬只還沒有反應(yīng)過來，安靜等候的時(shí)候，迅速進(jìn)針，推藥，完成肌內(nèi)注射給藥的全過程。關(guān)在實(shí)驗(yàn)籠內(nèi)的貴州小型豬肌肉注射給藥更加輕松，打開實(shí)驗(yàn)籠門，由操作者一只手固定豬只耳朵，一只手持針在頸部肌內(nèi)注射給藥。在此過程中，應(yīng)避免過多的陌生人在場并避免大聲喧鬧。

4 麻醉方法的建立

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉常用靜脈或腹腔給藥方法［1］，小型豬由于皮膚和皮下脂肪較厚，除耳靜脈以外其余淺表靜脈不明顯，在小型豬完全清醒狀態(tài)下，進(jìn)行耳靜脈注射給藥麻醉需強(qiáng)行保定，對豬只的刺激較大。本所在參考其他麻醉方法的基礎(chǔ)上，建立了肌肉注射給藥的麻醉方法：將3%的戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(0.5m L/kg)配合速眠新II(0.5m L/kg)不同點(diǎn)肌內(nèi)注射給藥，10min左右即可獲得良好的麻醉效果，肌肉松弛、呼吸和心律及體溫穩(wěn)定，呼吸道分泌物少，整個(gè)麻醉誘導(dǎo)期、麻醉期、蘇醒期過程中動(dòng)物沒有異常行為，保障了動(dòng)物和人的安全，實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后，給予蘇醒劑使其快速蘇醒，減少麻醉造成的不良反應(yīng)［2、3］。

5 貴州小型豬采血方法

豬的前腔靜脈為引導(dǎo)頭、頸、前肢和大部分胸腔的血液注入右心房的靜脈干，在胸腔前門由左、右頸靜脈和左、右腋靜脈匯合而成。貴州小型豬的前腔靜脈采血需進(jìn)行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新II 0.3m L/kg肌內(nèi)注射，待動(dòng)物進(jìn)入麻醉狀態(tài)，由3個(gè)助手將動(dòng)物固定在仰臥位，充分暴露前肢前緣與胸骨之間形成的胸前窩，操作者取20#一次性注射器，在胸前窩處搏動(dòng)最明顯的部位與動(dòng)物軀體長軸和仰臥水平面各夾角45度，進(jìn)針2cm～3cm，血液由于壓力自動(dòng)涌入針管，固定好針管抽到需要的血液量即可拔出，干棉球壓迫止血。進(jìn)針深度視動(dòng)物體型大小靈活操作。

6 灌胃給藥方法

貴州小型豬的灌胃給藥需進(jìn)行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新 II 0.3m L/kg，肌內(nèi)注射，待動(dòng)物進(jìn)入麻醉后，助手扶住動(dòng)物的兩前肢，將動(dòng)物直立保定，用開口器打開口腔并固定，用人用胃管沿著舌根緩慢推進(jìn)至45cm，初試者可以將胃管的一端伸入水中觀察是否隨著動(dòng)物的呼吸冒氣泡，檢測胃管的插入是否誤插入肺部。確定胃管準(zhǔn)確插入胃內(nèi)，將藥物緩慢推入，并用一定量的生理鹽水沖洗胃管。

7 靜脈給藥方法

貴州小型豬的靜脈采血需進(jìn)行輕度麻醉，3%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液0.3m L/kg配合速眠新 II 0.3m L/kg，肌內(nèi)注射，待動(dòng)物進(jìn)入麻醉狀態(tài)。在貴州小型豬耳靜脈部位給藥，選取5#一次性注射器，由耳靜脈遠(yuǎn)心端刺入，緩慢推入藥物。

8 貴州小型豬的心電監(jiān)護(hù)

8.1 清醒狀態(tài)下的心電監(jiān)護(hù)

采用美國VMED公司PC-VetGard動(dòng)物遙測多參數(shù)監(jiān)護(hù)分析系統(tǒng)，對清醒狀態(tài)下的貴州小型豬進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)：給動(dòng)物穿上特制的可調(diào)式馬甲，以此固定電極和信號發(fā)射裝置，通過電腦接收信號記錄及分析。在此過程中，動(dòng)物在圈舍內(nèi)自由活動(dòng)，不受外界干擾。

8.2 麻醉狀態(tài)下的心電監(jiān)護(hù)

貴州小型豬在淺表麻醉(方法同前所述)狀態(tài)下，在手術(shù)臺上仰臥體位四肢放松固定，心電圖機(jī)各導(dǎo)聯(lián)逐一連接好，記錄心電圖既可，動(dòng)物給蘇醒劑，放回觀察室。

9 貴州小型豬安樂致死方法

國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)理事會(ICLAS)關(guān)于動(dòng)物安樂致死方法的要求，應(yīng)該避免死亡所造成的極度痛苦和應(yīng)激反應(yīng)；在符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡那闆r下，盡可能早的終止生命；在達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡那疤嵯?，?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)盡量減少動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過程中受到的痛苦和應(yīng)激反應(yīng)；引起痛苦和應(yīng)激反應(yīng)的研究過程應(yīng)該降到最低。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安樂致死方法有物理性安樂死、二氧化碳吸入法、過量麻醉結(jié)合放血等方法［4］。

小型豬屬大型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，生命力較強(qiáng)，抗逆性強(qiáng)，不易處死，不恰當(dāng)?shù)奶幩来胧?，延長死亡過程，會對動(dòng)物造成痛苦和恐懼，所以對其實(shí)行安樂死術(shù)尤為重要。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，不能繼續(xù)保留的豬只、或者豬只已不可能恢復(fù)時(shí)候，需采取安樂死。貴州小型豬的安樂致死主要用麻醉結(jié)合放血方法，先給予麻醉劑量的麻醉藥物(如前介紹)，待其進(jìn)入麻醉狀態(tài)，心臟放血或股動(dòng)脈放血致死。

10 貴州小型豬尸體及殘骸的處置

在動(dòng)物福利中沒有提到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體的處置問題，一般是從環(huán)境污染和生物安全角度出發(fā)，要求進(jìn)行無害化處理。本研究認(rèn)為，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)而獻(xiàn)出生命，其尸體和殘骸的妥善處置也是動(dòng)物福利方面的重要體現(xiàn)，妥善處置實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體及殘骸不僅是對環(huán)境保護(hù)和生物安全的必須，也是人類善待動(dòng)物、感謝實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對人類健康事業(yè)做出的奉獻(xiàn)的一種表現(xiàn)。貴州小型豬安樂死后的尸體及殘骸經(jīng)過醫(yī)療垃圾要求包裝置于冰柜內(nèi)暫時(shí)保存，進(jìn)行無害化處理。

［1］施新猷.醫(yī)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］，西安市：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1989：423.

［2］吳曙光，佘小明，田錕，等.速眠新II對幼齡貴州小型豬外科手術(shù)中的應(yīng)用研究［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2006，23(4)：21-23.

［3］吳曙光，巫全勝，趙菊花，等.速眠新Ⅱ與戊巴比妥鈉對實(shí)驗(yàn)用白香豬麻醉效果的過程［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2007，24(2)：24-26.

［4］秦川.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué) ［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：269.