膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷中的應(yīng)用進(jìn)展

莊金秋 ，梅建國 ，沈志強(qiáng)

（1.吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，吉林長春 130062；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州 256600）

膠體金免疫層析技術(shù)（gold immunochromato graphy assay，GICA）是將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和蛋白層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維膜為載體的快速固相膜免疫分析技術(shù)[1]。它的原理是以條狀纖維層析材料—硝酸纖維素膜（nitrocellulose fi lter membrane，簡稱NC膜）為固相載體，樣品溶液借助毛細(xì)作用在層析條上泳動(dòng)；同時(shí)，樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體（抗原或抗體）發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)，層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域（檢測帶），通過可直接目測的標(biāo)記物—膠體金顆粒在短時(shí)間內(nèi)（5～10 min）聚集而得到直觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（顯色），而游離標(biāo)記物則越過檢測帶，與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離[2]。膠體金免疫層析技術(shù)就是利用膠體金本身的顯色特點(diǎn)結(jié)合免疫層析技術(shù)而達(dá)到檢測的目的，層析時(shí)使用膠體金這種標(biāo)記物，標(biāo)記物與待測物的絡(luò)合物被相應(yīng)的配體捕獲而濃集顯色，以纖維膜上顯色帶的有無進(jìn)行快速檢測[3]。它不需將結(jié)合標(biāo)記物與游離標(biāo)記物進(jìn)行分離，因而這其中就沒有像ELISA實(shí)驗(yàn)中那么繁瑣的加樣、洗滌步驟。膠體金免疫層析技術(shù)具有操作簡便、快捷、操作人員無需技術(shù)培訓(xùn)、無需特殊儀器設(shè)備、檢測結(jié)果清楚直觀、試劑穩(wěn)定和便于保存等特點(diǎn)，特別適用于現(xiàn)場快速檢測。已被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物病毒、細(xì)菌、寄生蟲等獸醫(yī)病原學(xué)檢測和臨床診斷中。該技術(shù)已成為當(dāng)前獸醫(yī)臨床診斷動(dòng)物疫病最簡單、快速、敏感、特異的免疫學(xué)檢測技術(shù)之一，特別適合于廣大基層獸醫(yī)人員以及大批量檢測和大面積普查等，有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景[4]。本文就膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷中的應(yīng)用進(jìn)展作一簡要概述。

1 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物細(xì)菌病診斷中的應(yīng)用

膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物細(xì)菌性疾病的診斷中作用十分突出。近年來，細(xì)菌性疾病，如雞白痢、雞大腸桿菌病、禽霍亂、豬鏈球菌2型、牛結(jié)核、牛副結(jié)核、牛布氏桿菌病等等膠體金診斷試紙條紛紛研制成功，有的已在基層獸醫(yī)臨床診斷中推廣普及。

曹春梅[5]利用針對O9抗原的2株單克隆抗體的夾心和膠體金免疫層析試紙條巧妙的設(shè)計(jì)優(yōu)勢，成功建立了快速檢測沙門氏菌O9抗原的新方法。測定沙門氏菌O9抗原的膠體金免疫層析條，作為一種初篩試驗(yàn)，其實(shí)用性在人工污染樣品試驗(yàn)和現(xiàn)場檢測試驗(yàn)中得到驗(yàn)證，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。檀華等[6]將膠體金標(biāo)記葡萄球菌蛋白A，用類鼻疽多糖抗原包被NC膜，組裝成免疫層析試紙條檢測類鼻疽假單胞桿菌，用該試紙條和間接血凝試驗(yàn)檢測了3份兔血清、16份豬血清和26份人血清標(biāo)本，試驗(yàn)表明：性和敏感性。張書環(huán)等[7]用大腸桿菌表達(dá)的牛分枝桿菌重組抗原MPB83和MPB70分別作為膠體金標(biāo)記抗原和檢測線上的捕獲抗原，制備的牛結(jié)核抗體檢測試紙條，具有較高的特異性和敏感性。朱明東等[8]所建立的診斷布魯菌病的膠體金免疫層析法采用不同血清的用量確定敏感性及特異性，得出GICA的敏感性和特異性分別達(dá)到91.3%和97.3%，認(rèn)為應(yīng)用GICA快速診斷牛布魯菌病具有敏感、特異、血清用量少、操作簡便等特點(diǎn)，更適合于布魯菌病的診斷、流行病學(xué)調(diào)查及現(xiàn)場應(yīng)用。馮向輝等[9]建立了牛結(jié)核膠體金免疫層析快速診斷方法，用兔抗牛血清蛋白和大腸埃希菌表達(dá)的牛分枝桿菌MPB70-83-ESAT-6蛋白分別作為膠體金標(biāo)記抗原和檢測線上的捕獲抗原，制備了牛結(jié)核抗體檢測試紙條。結(jié)果顯示，所研制的試紙條不與牛副結(jié)核、牛巴貝斯病、口蹄疫和牛傳染性鼻氣管炎病陽性血清作用，具有很好的特異性。該方法適用于對牛結(jié)核病進(jìn)行普查和檢疫，具有良好的應(yīng)用前景。孫洋等[10]以腸出血性大腸埃希菌O157單克隆抗體為標(biāo)記探針，以兔抗O157多克隆抗體固定于硝酸纖維素膜作為捕獲抗體，利用雙抗夾心法，制成O157膠體金免疫層析檢測試紙條，該試紙條僅與O157反應(yīng)，與其他受試菌株均不反應(yīng)，該試紙條敏感性高、特異性強(qiáng)、檢測速度快、操作簡便、可用于現(xiàn)場大量樣品的檢測。高成秀等[11]建立了大腸埃希菌O157和Stx2毒素的雙抗體夾心免疫膠體金層析法，可以同時(shí)檢測大腸埃希菌O157抗原和Stx2毒素，可在較短時(shí)間內(nèi)檢測大腸埃希菌O157并鑒定產(chǎn)Stx2的高致病性大腸埃希菌O157，具有較高的特異性，在臨床中有較高的應(yīng)用價(jià)值。劉洪貴等[12]建立了一種快速檢測金黃色葡萄球菌的新方法：雙抗夾心法。該方法用膠體金標(biāo)記抗金黃色葡萄球菌凝集因子A重組蛋白特異性抗體，再用抗金黃色葡萄球菌IgG包被硝酸纖維素膜，制成免疫層析檢測試紙條。且與大腸桿菌、鏈球菌、李氏桿菌、巴氏桿菌及芽孢桿菌均無交叉，具有較好的特異性。Soo P C等[13]建立了檢測結(jié)核分支桿菌的膠體金層析試紙條，非常適用于野外及基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室使用。鞠瑩等[14]建立了膠體金免疫層析法用于檢測豬鏈球菌2型的方法：用膠體金標(biāo)記豬鏈球菌2型多克隆抗體，制得膠體金免疫層析試紙條。結(jié)果表明：所研制的膠體金免疫層析試紙條的最低檢測限為106CFU/ mL，標(biāo)本處理簡單，10 min即可出結(jié)果。特異性方面僅與SS1/2有交叉反應(yīng)，與其它常見致病菌及鏈球菌屬中的15個(gè)群均無交叉反應(yīng)。劉潔等[15]建立了快速檢測鼠感染大腸桿菌O157:H7后的抗體的膠體金免疫層析檢測試紙條。結(jié)果表明：該試紙條僅與O157:H7陽性鼠血清發(fā)生特異性反應(yīng)，適用于調(diào)查與追溯鼠O157:H7感染狀況時(shí)的現(xiàn)場檢測。楊旭東等[16]建立了檢測產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F5菌毛的膠體金免疫層析方法。崔煥忠等[17]研制出單增李斯特菌（LM）的膠體金試紙條，該試紙條不與綿羊李斯特菌、英諾克李斯特菌同屬菌及大腸桿菌、沙門氏菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌異屬菌發(fā)生交叉反應(yīng)；對LM純培養(yǎng)物及模擬樣品檢測的靈敏度均為3.9×105CFU/ mL；具有快速、特異、敏感、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可用于LM的檢測。金鑫等[18]建立了牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒血癥免疫層析檢測方法。該方法適合用于牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒血癥的現(xiàn)場檢測及鑒別診斷。喬榛等[19]制成了用于檢測牛副結(jié)核抗體膠體金免疫層析試紙條。該試紙條可檢出牛副結(jié)核抗體的最低抗原包被濃度為400 μg/ mL；試紙條不與牛結(jié)核病、牛布魯氏菌病的陽性血清發(fā)生反應(yīng)；試紙條37 ℃保存9 d后的檢驗(yàn)結(jié)果與4 ℃保存的檢驗(yàn)結(jié)果相同。所制備的試紙條具有靈敏、特異的優(yōu)點(diǎn)，穩(wěn)定性良好；10 min即出結(jié)果，操作簡便，可用于臨床診斷。

2 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物病毒病診斷中的應(yīng)用

膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物病毒性疾病的診斷上發(fā)揮著越來越重要的作用。截止目前，狂犬病、犬細(xì)小病毒病、犬瘟熱、貓瘟熱、雞新城疫、禽流感、傳染性支氣管炎病、雛鵝新型病毒性腸炎、減蛋綜合征、傳染性法氏囊病、口蹄疫、豬瘟、豬藍(lán)耳病、偽狂犬病、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒病、豬圓環(huán)病毒病和牛病毒性腹瀉-粘膜病、赤羽病等多種疫病的膠體金診斷試紙條也相繼研制出來，給疾病的監(jiān)測和預(yù)防提供了技術(shù)保障。

2.1 犬貓病毒性疾病方面

徐葛林等[20]用膠體金標(biāo)記抗狂犬病病毒單抗建立的檢測狂犬病毒的膠體金免疫層析法，只與狂犬病毒抗原有特異性反應(yīng)，與乙型腦炎病毒、正常小鼠腦組織等無交叉反應(yīng)，檢測48份可疑狂犬病犬唾液樣品，同ELISA的符合率為88.2%，表明該診斷試紙條非常適用于野外對動(dòng)物腦或唾液中的狂犬病病毒抗原的檢測。王中力等[21]標(biāo)記純化的犬細(xì)小病毒單克隆抗體建立了檢測犬細(xì)小病毒的膠體金免疫層析法，檢測收集到120份犬糞便樣品，其結(jié)果與HA結(jié)果相對比，HA效價(jià)在1:40以上時(shí)試紙條均能檢測到陽性結(jié)果，與犬瘟熱病毒及犬傳染性肝炎病毒無交叉反應(yīng)。Oh JS等[22]建立了檢測犬瘟熱病毒抗體的膠體金免疫層析方法，通過檢測臨床的386份樣品，得出GICA相對于HI的敏感性為97.1%，特異性為76.6%。范曉娟等[23]成功建立了檢測犬、貓抗狂犬病病毒（RV）IgG抗體的通用型膠體金免疫層析方法。結(jié)果顯示GICA試紙條檢測靈敏度為0.5 IU/ mL，與犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒等陽性血清無交叉反應(yīng)，并與ELISA相比，兩者的符合率為94.6%。表明該方法可廣泛應(yīng)用于基層。房超等[24]將從水貂中分離的犬瘟熱病毒HB株經(jīng)培養(yǎng)和純化后免疫小鼠，制備分泌抗CDV-HB的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為2E1和7F3。采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒并標(biāo)記2E1單克隆抗體，獲得檢測貂犬瘟熱病毒抗原的膠體金免疫層析試紙，且鑒定證明制備的檢測CDV的膠體金試紙條具有良好的的特異性。王鐵成等[25]建立了狂犬病病毒抗體的膠體金免疫層析技術(shù)檢測方法，對犬等動(dòng)物免疫狂犬病疫苗后的抗體水平監(jiān)測提供參考，具有良好的應(yīng)用前景。燕永彬等[26]利用雙抗體夾心和膠體金免疫層析技術(shù)的原理，研制成檢測貓瘟熱病毒（FPV）抗原的貓瘟熱病毒膠體金快速檢測試紙，對臨床26份虎糞便樣本進(jìn)行檢測，并與PCR檢測法及韓國的金標(biāo)試紙檢測法進(jìn)行比對。結(jié)果表明：該試紙具有較高的敏感性、特異性和可重復(fù)性，檢出率與韓國的金標(biāo)試紙接近，可以應(yīng)用于臨床檢測。

2.2 家禽病毒性疾病方面

李希友等[27]用膠體金標(biāo)記新城疫病毒（NDV）抗原，兔抗NDV抗體和NDV抗原分別包被到NC膜的檢測線和質(zhì)控線上，研制出了半定量快速測定新城疫抗體的膠體金免疫層析試紙條。Peng D等[28]在家禽禽流感病毒（AIV）檢測中，對膠體金免疫層析試紙條、血凝抑制試驗(yàn)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)進(jìn)行了比較，得出膠體金免疫層析試紙條具有敏感性高、特異性強(qiáng)、簡便、快速、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)，是家禽流感病毒快速檢測的最有效技術(shù)。CuiSJ等[29]建立了檢測H5亞型禽流感病毒抗體膠體金試紙條，將該試紙條與HI相比較，敏感性和特異性分別為88.8%和97.6%。彭伏虎[30]利用雙抗夾心法分別研制了H5、H9亞型禽流感病毒膠體金免疫層析快速檢測及鑒別診斷試紙條、禽流感和新城疫病毒膠體金免疫層析快速檢測及診斷試紙條。結(jié)果表明，所研制的試紙條均不與其它禽類病毒發(fā)生反應(yīng)，有非常強(qiáng)的特異性。同時(shí)，還采用一膜包被多種抗體的方法，建立了AIV和NDV快速鑒別診斷試紙條，同樣具有較強(qiáng)的特異性和較高的靈敏度，可用于AIV和NDV的檢測和鑒別診斷。徐一鳴等[31]研制出了針對H3和H7亞型禽流感病毒的膠體金診斷試紙條。在特異性方面，與H5和H9亞型AIV標(biāo)準(zhǔn)抗原、病料以及傳染性支氣管炎、新城疫等抗原均無交叉反應(yīng)，具有較好的特異性。陶虹等[32]以純化的HA重組蛋白和滅活的禽流感病毒為主要材料，采用夾心法原理研制了禽流感抗體膠體金半定量檢測卡。王翌等[33]研制了鵝副粘病毒膠體金檢測卡，該檢測卡可以檢測出血凝價(jià)24以上的鵝副粘病毒尿囊液。與新城疫Lasota株、孔雀源、鴿源、雞源新城疫病毒感染的尿囊液出現(xiàn)陽性反應(yīng)；而與雞減蛋綜合征病毒、傳染性法氏囊炎病毒、傳染性支氣管炎病毒、小鵝瘟病毒雞胚或鴨胚尿囊液和麻疹病毒、犬瘟熱病毒細(xì)胞培養(yǎng)物呈陰性反應(yīng)。李蓓蓓等[34]建立了簡便、快速而且能同時(shí)檢測NDV和AIV的復(fù)合型免疫層析檢測試紙條。該試紙條檢測NDV的靈敏度比HA試驗(yàn)結(jié)果提高8倍；AIV重組抗原的檢測靈敏度為1.7 μg/ mL。兩種病毒互相測試，未出現(xiàn)交叉反應(yīng)。用緩沖液對照測試結(jié)果為陰性。在密封、干燥、低溫的條件下，試紙條的靈敏性與特異性沒有明顯變化。說明本研究建立的NDV和AIV免疫層析檢測法具有特異、靈敏、穩(wěn)定、操作簡單等特點(diǎn)，符合現(xiàn)場快速檢測的要求。

2.3 豬病毒性疾病方面

Joon Tam Y等[35]研制了檢測偽狂犬病病毒（PRV）抗原的膠體金試紙條，該試紙條檢測時(shí)只需25 μL樣品，5 min即可出檢測結(jié)果，與常見豬病不發(fā)生交叉反應(yīng)。白靜等[36]結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)，運(yùn)用雙抗原夾心法于國內(nèi)首先建立了豬PRV gE抗體檢測的免疫層析試紙條。該方法操作簡單靈敏度高、特異性好，適合豬偽狂犬的臨床診斷。廖文軍等[37]建立了檢測豬偽狂犬病毒gE抗體的雙抗原膠體金試紙條。該試紙條可用于PRV野毒感染的快速篩查。

鄭鳴等[38]用膠體金分別標(biāo)記豬瘟兔化弱毒抗原和豬瘟強(qiáng)毒抗原，運(yùn)用雙抗原夾心法于國內(nèi)首先建立了豬瘟抗體檢測免疫層析試紙條方法。該試紙條具有血清學(xué)鑒別功能，能區(qū)分強(qiáng)弱毒感染，對于豬瘟的臨床快速診斷，豬瘟病毒的流行，疫苗免疫情況的監(jiān)測以及免疫程序的制定具有非常重要作用。楊明等[39]建立了豬瘟（CSF）快速檢測條，對豬瘟病毒進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：該試紙條的敏感性較高，用試紙條對鴿新城疫病毒、雞減蛋綜合征病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒進(jìn)行檢測，無交叉反應(yīng)。王向鵬等[40]建立了快速、簡便檢測豬瘟病毒（CSFV）野毒的膠體金免疫層析方法。結(jié)果表明：所制備的試紙條用于檢測CSFV野毒感染的PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物，在檢測線和質(zhì)控線處均呈現(xiàn)紅色條帶，健康PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物對照僅在質(zhì)控線呈現(xiàn)紅色條帶；試紙條檢出病毒培養(yǎng)物的最低限為103.5TCID50；用不同批次的試紙條重復(fù)檢測，結(jié)果無差異；該試紙條不與豬瘟兔化弱毒（HCLV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬輪狀病毒（RV）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬細(xì)小病毒（PPV）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）反應(yīng)。所制備的試紙條具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性，初步達(dá)到了區(qū)分檢測CSFV野毒株和弱毒株的目的。

蔣韜等[41]建立了檢測口蹄疫病毒O、A、Asia I型的定型診斷膠體金免疫層析方法。結(jié)果顯示，所研制的試紙條有較好的靈敏度，可檢測到7.8×104LD50（1:128倍稀釋的乳鼠毒）的病毒量。在特異性方面，和與口蹄疫臨床癥狀有相似的病原如豬水皰病病毒、水泡性口炎病毒、水泡性疹病毒均無交叉反應(yīng)。林彤等[42]建立的Asia I型口蹄疫病毒膠體金試紙條。該試紙條不與口蹄疫病毒A、O、C型以及豬水皰病病毒發(fā)生交叉反應(yīng)，具有良好的特異性。并且與其它傳統(tǒng)診斷方法的符合率達(dá)98.8%。

王慧杰等[43]制備了檢測PCV-2 Cap抗體的膠體金快速診斷試紙條。該試紙條特異性高，能夠區(qū)分PCV-2的標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清，用該試紙?jiān)跈z測來自不同豬場的165份送檢血清，與間接免疫熒光符合率在85%以上。范曉娟等[44]建立了一種檢測PCV-2抗體的膠體金免疫層析方法。該方法與ELISA相比，其靈敏度為89.19%，特異性為100%，并且與PCV-1、HCV、PRV、PRRSV、PPV陽性血清無交叉反應(yīng)。

劉兆磊等[45]建立的A群豬輪狀病毒膠體金免疫層析試紙條的最低檢測限為1:32稀釋的病毒培養(yǎng)液。不同批次的試紙條的重復(fù)檢測結(jié)果無差異，并且與豬傳染性胃腸炎病毒、流行性腹瀉病毒不發(fā)生交叉反應(yīng)，具有較好的特異性。張利勃等[46]制成一種檢測豬流行性腹瀉病毒（PEDV）血清抗體的快速診斷試紙。該GICA檢測技術(shù)的建立為基層防疫檢疫人員檢測PEDV抗體提供了一種快速簡便的方法。

李雪松等[47]建立了檢測PRRSV的膠體金免疫層析方法，該檢測方法具有良好的的敏感性、特異性、重復(fù)性及應(yīng)用性。該試紙條的研制為PRRS的快速診斷及免疫預(yù)防提供了技術(shù)手段。

2.4 牛病毒性疾病方面

Kameyama K等[48]建立了快速檢測BVDV抗原的膠體金免疫層析試紙條，該方法與病毒分離鑒定的敏感性和特異性分別為100%和97.2%，為BVDV的快速診斷提供了一種有效的檢測方法。楊素等[49]采用雙抗體夾心免疫層析技術(shù)，研制了適合田間快速檢測被檢樣品中的赤羽病毒（AKAV）的膠體金免疫層析試紙條。結(jié)果表明所研制的試紙條敏感性較高（為10TCID50），特異性較強(qiáng)，還具有快速、穩(wěn)定、簡便等特點(diǎn)，適合基層動(dòng)物防疫檢疫部門尤其是進(jìn)出境動(dòng)物檢疫機(jī)構(gòu)進(jìn)行赤羽病大批量、田間快速初篩，對赤羽病快速診斷具有重要的意義。

3 膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物寄生蟲病診斷中的應(yīng)用

大多數(shù)寄生蟲病是人獸共患性疾病，因此，對畜禽寄生蟲病的診斷具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。目前，日本血吸蟲病、弓形蟲病、旋毛蟲病、鞭蟲病、片形吸蟲病和豬囊蟲病、犬弓首蛔蟲病、奶牛肝片吸蟲病和羊東畢吸蟲病等疾病的膠體金檢測試紙條已研制成功并應(yīng)用于臨床檢測中。

何偉等[50]建立了檢測家畜血清中的抗血吸蟲抗體的膠體金試紙條。王艷華等[51]建立了檢測弓形蟲抗體的免疫膠體金快速試紙條，應(yīng)用于動(dòng)物弓形蟲病血清抗體的檢測，并用弓形蟲IHA診斷方法進(jìn)行對照試驗(yàn)，結(jié)果表明：金標(biāo)試紙的敏感度高于IHA，與弓形蟲IHA檢測結(jié)果的符合率為82.5%，且較弓形蟲IHA診斷試劑提前2天檢測到抗體。張德林等[52]建立了弓形蟲膠體金快速檢測試紙條，該種試紙條可同時(shí)檢測人和各種動(dòng)物的弓形蟲抗體IgG和IgM。在特異性方面，與豬衣原體、豬瘟、豬傳染性胸膜肺炎的陽性血清無交叉反應(yīng)。敏感性明顯高于IHA，與ELISA相當(dāng)。卓國榮等[53]研制的犬弓形蟲膠體金免疫層析試紙條與IHA試劑盒的總符合率為99%（99/100）；對人工感染弓形蟲的犬血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明兩者符合率為100%。余建國等[54]建立了檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物弓形蟲抗體快速檢測的方法。該法與傳統(tǒng)的ELISA檢測結(jié)果一致率為85%，而且快速、靈敏，適于基層實(shí)驗(yàn)動(dòng)物弓形蟲病的篩查。秦銀霞等[55]建立了檢測旋毛蟲病的免疫層析試紙條。苑淑賢等[56]制備豬旋毛蟲病膠體金檢測試紙條。該試紙條敏感、特異、簡便、快速，可用于豬旋毛蟲病的檢疫及流行病學(xué)調(diào)查。張守發(fā)等[57]建立了診斷牛新孢子蟲病的膠體金免疫層析法，認(rèn)為該方法具有良好的實(shí)用價(jià)值，適宜于基層獸醫(yī)單位的應(yīng)用。張少華等[58]建立了豬帶絳蟲膠體金快速診斷試紙條，該試紙條與全囊蟲抗原ELISA的相對敏感性和特異性分別為75.0%（12/16）和95.2%（40/42），與剖檢計(jì)數(shù)法的相對敏感性為80.0%（12/15）。何光志等[59]建立了能快速診斷犬弓首蛔蟲病的膠體金免疫層析法。該方法診斷犬弓首蛔蟲病具有操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可用于犬弓首蛔蟲病的快速檢測。孟盟等[60]等研制成檢測水牛伊氏錐蟲病的免疫膠體金試紙條。通過交叉試驗(yàn)表明該試紙條與衣原體、弓形蟲、旋毛蟲、巴貝斯焦蟲和大片吸蟲無交叉反應(yīng)，為水牛伊氏錐蟲病的現(xiàn)場檢測診斷和預(yù)控提供了有效的方法。

4 前景與展望

膠體金免疫層析技術(shù)自誕生以來便以其簡便、快速、敏感、特異等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床（特別是基層）快速檢測和現(xiàn)場診斷上，顯示出了巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。目前，該技術(shù)已成為多種領(lǐng)域研究與應(yīng)用的熱點(diǎn)。一方面，該技術(shù)的研究正在不斷地深化；另一方面，該技術(shù)對物質(zhì)的檢測范圍也正在拓寬，范圍涉及到病原體、激素、毒品、藥物、重金屬等方面。然而，當(dāng)前的膠體金免疫層析技術(shù)還有一些不足之處，如檢測的靈敏度有待于進(jìn)一步提高等。隨著該技術(shù)的臨床應(yīng)用，進(jìn)一步提高膠體金免疫層析試驗(yàn)的敏感性、特異性、實(shí)現(xiàn)多元檢測、實(shí)現(xiàn)定量或半定量檢測是未來膠體金免疫層析技術(shù)發(fā)展的方向。膠體金免疫層析技術(shù)為動(dòng)物疫病診斷技術(shù)提供了新的模式，是未來動(dòng)物疫病診斷的一個(gè)發(fā)展方向。相信隨著新的標(biāo)記物和制備方法的發(fā)展、標(biāo)記技術(shù)的日趨成熟、單克隆抗體技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，膠體金免疫層析技術(shù)將會(huì)有更為廣闊的應(yīng)用前景，實(shí)現(xiàn)更加理想的價(jià)值，從而促進(jìn)我國畜牧獸醫(yī)事業(yè)的持續(xù)、健康、快速發(fā)展。

[1]朱明磊，郭鄂平.膠體金免疫層析技術(shù)在病原微生物檢測中的應(yīng)用[J].青島醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，43（1）：43-45.

[2]杜玉萍，陳清，王雅賢，等.膠體金免疫層析法檢測金黃色葡萄球菌的初步研究[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2006，6（6）：650-652.

[3]Putalun W，Morinaga O，Tanaka H，et al.Development of a one-step immunochromatographic strip test for the detection of sennosides A and B[J].Phytochem Anal，2004，15（2）：112-116.

[4]祖立闖，王金良，李嬌，等.膠體金免疫層析技術(shù)在動(dòng)物疫病診斷上的應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（8）：101-105.

[5]曹春梅.膠體金技術(shù)在雞白痢/雞傷寒檢疫和沙門氏菌O9抗原檢測中的應(yīng)用研究[D].江蘇揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2004.

[6]檀華，何君，左庭婷，等.類鼻疽血清ICA診斷試紙的研制及初步應(yīng)用[J].中國人獸共患病雜志，2004，20（3）：238-240.

[7]張書環(huán)，楊俊興，晁彥杰，等.牛結(jié)核病抗體膠體金快速檢測技術(shù)的建立和應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（7）：17-24.

[8]朱明東，洪林娣.膠體金免疫層析法快速診斷牛布魯氏菌病的研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2008，24（8）：755-756.

[9]馮向輝，王建永，包永占，等.牛結(jié)核膠體金免疫層析快速診斷方法的建立及初步應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（2）：32-35.

[10]孫洋，馮書章，郭學(xué)軍，等.腸出血性大腸桿菌O157膠體金免疫層析試紙條的研制[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2008，24（4）：356-359.

[11]高成秀，孫建和，嚴(yán)亞賢.大腸桿菌O157及其Stx2免疫膠體金層析檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2009，39（2）：154-158.

[12]劉洪貴，武瑞.免疫層析法檢測金黃色葡萄球菌的研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，31（4）：283-287.

[13]Soo P C，Horng Y T，Chang K C，et al.A simple gold nanoparticle probes assay for identif i cation of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium tuberculosis complex from clinical specimens [J].Mol Cell Probes，2009，23（5）：240-246.

[14]鞠瑩，熊國華，曹遠(yuǎn)銀.膠體金免疫層析法檢測豬鏈球菌2型的研究[J].生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9（10）：1881-1884.

[15]劉潔，夏興霞，王永山，等.大腸桿菌O157：H7抗體膠體金免疫層析檢測試紙條的研制[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，32（5）：375-378.

[16]楊旭東，劉文鑫，馮瑜菲，等.大腸桿菌F5菌毛膠體金免疫層析檢測方法的建立[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2010，40（11）：1166-1170.

[17]崔煥忠，張輝，王興龍.單增李斯特菌單克隆抗體的制備及膠體金試紙的研制[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2010，40（1）：45-50.

[18]金鑫，任春宇，梁桂英，等.牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒血癥膠體金免疫層析檢測方法的建立[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42（3）：81-84.

[19]喬榛，張麗娟，秦建華，等.牛副結(jié)核膠體金免疫層析試紙條的研制[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42（1）：5-7.

[20]徐葛林，胡巧玲，吳杰，等.檢測狂犬病毒的膠體金免疫層析法的建立及應(yīng)用[J].中國人獸共患病雜志，2004，20（3）：236-240.

[21]王中力，宋曉暉，陳西召，等.犬細(xì)小病毒病免疫膠體金診斷技術(shù)的研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2004，26（1）：62-66.

[22]Oh J S，Ha G W，Cho Y S，et al.One-step immunochromatography assay kit for detecting antibodies to canine parvoviru[J].Clin Vaccine Immunol，2006，13（4）：520-524.

[23]范曉娟，李剛，邱文英，等.膠體金免疫層析檢測犬、貓抗狂犬病病毒IgG抗體的研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2010，26（8）：753-757.

[24]房超，張泉，易海華，等.檢測犬瘟熱病毒的單克隆抗體膠體金試紙條的制備[J].中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2011，19（2）：26-30.

[25]王鐵成，張濤，楊松濤，等.狂犬病病毒抗體膠體金檢測試紙的制備[J].生物工程學(xué)報(bào)，2011，27（5）：799-804.

[26]燕永彬，孫靜，艾有為，等.貓瘟熱病毒膠體金快速檢測試紙的研究[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2011，15（2）：82-87.

[27]李希友，田夫林，張秀娥，等.半定量檢測新城疫抗體膠體金試紙條的研制[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2006，37（12）：1373-1377.

[28]Peng D，Hu S，Hua Y，et al.Comparison of a new goldimmunochromatographic assay for the detection of antibodies against avian inf l uenza virus with hemagglutination inhibition and agargelimmuno diffu sion assas[J].Vet Immunol Immunopathol，2007，117（1）：17-25.

[29]Cui SJ，Chen CM，Tong GZ.A simple and rapid immunochromatographic strip test for monitoring antibodies to H5 subtype avian inf l uenza virus[J].J Virol Methods，2008，152（1/2）：102-105.

[30]彭伏虎.禽流感與新城疫膠體金免疫層析快速檢測技術(shù)及初步應(yīng)用研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[31]徐一鳴，金寧一，楊振國，等.膠體金方法檢測H3和H7亞型禽流感病毒[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，29（5）：580-583.

[32]陶虹，秦智鋒，盧體康，等.禽流感抗體膠體金半定量檢測方法的建立[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2009，（9）：8-12.

[33]王翌，周鐵忠，張喜悅，等.鵝副黏病毒膠體金檢測卡的研究[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，28（8），876-887.

[34]李蓓蓓，薛強(qiáng)，李錦豐，等.新城疫病毒和禽流感病毒復(fù)合型膠體金免疫層析試紙條的制備[J].畜牧與獸醫(yī)，2009，41（8）：33-37.

[35]Joon Tam Y，Mohd Lila M A，Bahaman A R.Development of solid-based papers trips for rapid diagnosis of pseudorabies infection[J].Trop Biomed，2004，21（2）：121-134.

[36]白靜，于新和，邊傳周.膠體金免疫層析法檢測豬PRV gE抗體方法的建立及應(yīng)用[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，37（1）：30-34.

[37]廖文軍，吳健敏，譚攀，等.豬偽狂犬病病毒gE抗體膠體金免疫層析檢測方法的建立及應(yīng)用[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（9）：12-16.

[38]鄭鳴，金彥法，閆國慶.利用膠體金免疫層析法檢測豬瘟強(qiáng)、弱毒抗體方法的建立[J].鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2006，26（2）：1-3.

[39]楊明，陳伯祥，孫曉林，等.豬瘟膠體金快速診斷試紙條的研制[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（2）：34-37.

[40]王向鵬，孫元，楊增岐，等.檢測豬瘟病毒野毒株膠體金免疫層析方法的建立[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，32（6）：441-445.

[41]蔣韜，梁仲，陳涓，等.口蹄病毒O、A、Asia I型定型診斷膠體金免疫層析方法的建立[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，4（11）：3801-3808.

[42]林彤，卲軍軍，叢國正，等.Asia I型口蹄疫病毒膠體金免疫層析檢測方法的建立[J].生物工程學(xué)報(bào)，2009，25（5）：767-772.

[43]王慧杰，喬宏興.膠體金免疫層析法檢測豬圓環(huán)病毒2型Cap抗體方法的建立及應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)雜志，2007，43（8）：23-25.

[44]范曉娟，李剛，史利軍，等.檢測豬圓環(huán)病毒2型抗體SPA膠體金免疫層析方法的建立[J].中國畜牧獸醫(yī)，2009，36（7）：158-161.

[45]劉兆磊，馬廣鵬，姜艷平，等.A群豬輪狀病毒膠體金免疫層析試紙條的研制[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2008，38（11）：952-956.

[46]張利勃，周鐵忠，王珅，等.豬流行性腹瀉膠體金抗體檢測技術(shù)的建立及其應(yīng)用[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27（3）：374-377.

[47]李雪松，符芳，李海忠，等.快速檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒膠體金免疫層析方法的建立[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33（9）：718-722.

[48]Kameyama K，Sakoda Y，T amai K，et al.Development of an immunochromatographic test kit for rapid detection of bovine viral diarrhea virus antigen[J].J Virol Methods，2006，128（1/2）：140-146.

[49]楊素，陳博文，沙才華，等.赤羽病膠體金免疫層析試紙條的研制[J].中國畜牧獸醫(yī)，2009，36（3）：42-44.

[50]何偉，朱蔭昌，徐明，等.膠體染料試紙條法快速診斷家畜血吸蟲病的研究[J].中國獸醫(yī)寄生蟲病，2002，10（3）：1-3.

[51]王艷華，李克生，才學(xué)鵬，等.弓形蟲抗體免疫膠體金快速檢測試紙條的研制[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（1）：29-32.

[52]張德林.弓形蟲免疫金標(biāo)快速檢測試劑及制備方法：中國，200610104848.4[P].2008-04-30.

[53]卓國榮，丁明星.快速膠體金免疫層析試紙條檢測犬血清弓形蟲IgG抗體的研究[J].獸醫(yī)科技，2010（6）：128-130.

[54]余建國，何忠平.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物弓形蟲免疫膠體金快速檢測方法的建立及試紙制備[J].福建畜牧獸醫(yī)，2011，33（3）：5-7.

[55]秦銀霞，崔晶，王中全.免疫層析試紙條診斷旋毛蟲病的研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2007，23（9）：866-868.

[56]苑淑賢，姚新華，任科研，等.豬旋毛蟲病膠體金檢測試紙條的制備[J].中國生物制品學(xué)雜志，2011，24（8）：957-963.

[57]張守發(fā)，丁德，鞠玉琳，等.膠體金免疫層析法與ELISA法對牛的新孢子蟲血清抗體檢測結(jié)果的比較[J].中國獸醫(yī)雜志，2008，44（8）：54-55.

[58]張少華，駱學(xué)農(nóng)，鄭亞東，等.豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18重組蛋白快速診斷試紙條研制[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2009，25（10）：968-972.

[59]何光志，田維毅，錢寧，等.膠體金免疫層析法快速診斷犬弓首蛔蟲病[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（24）：13117-13118.

[60]孟盟，曹池，陳漢忠，等.水牛伊氏錐蟲病免疫膠體金試紙條的研制及初步應(yīng)用[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，42（7）：988-993.