尿蛋白定性與定量檢測方法分析

寇筱囡

正常尿液中僅含微量蛋白質(zhì)，尿液中蛋白質(zhì)含量超過150 mg/24 h的，尿蛋白的檢測可用于初步判斷腎臟的功能、協(xié)助診斷其他系統(tǒng)多種疾病、進(jìn)行疾病的動態(tài)觀察及療效評判等。尿蛋白檢查可分為定性和定量兩大類試驗(yàn)。在進(jìn)行尿蛋白定性時，應(yīng)綜合各種因素，具體情況具體分析，選擇適宜的方法。盡管定性試驗(yàn)比較方便，但有時難以反映蛋白尿的實(shí)際含量，有條件時，最好進(jìn)行定量檢查。

1 尿蛋白定性檢測

1.1 磺基水楊酸法 在酸性條件下，磺基水楊酸的磺酸根離子與蛋白質(zhì)氨基酸陽離子結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白質(zhì)含量。該法靈敏，極輕微反應(yīng)無意義。判斷結(jié)果應(yīng)及時，否則會使陽性增高。

1.2 加熱乙酸法 掌握加熱乙酸法檢測尿蛋白的原理、方法、注意事項(xiàng)及質(zhì)量控制。加稀乙酸使尿液pH減低并接近蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(pH 4.7)，促使變性凝固的蛋白質(zhì)進(jìn)一步沉淀，并可消除因加熱使磷酸鹽或碳酸鹽析出造成的渾濁。為避免因鹽類析出所致假性渾濁，操作時務(wù)必按照加熱、加酸再加熱的程序。加入乙酸的量要適當(dāng)，約為尿量1/10，過多或過少均影響結(jié)果準(zhǔn)確性。加熱試管上段的尿液，以便與下段尿液形成對照。加熱乙酸法是最經(jīng)典、最準(zhǔn)確的方法。

1.3 干化學(xué)試帶法 了解常用干化學(xué)試帶模塊3～7的化學(xué)組成、操作方法及注意事項(xiàng)。利用指示劑的蛋白質(zhì)誤差原理，蛋白質(zhì)與指示劑的離子(溴甲酚藍(lán)、四溴酚藍(lán)二酯)相結(jié)合生成復(fù)合物，引起指示劑的進(jìn)一步電離超過尿液的緩沖能力，指示劑則發(fā)生顏色變化。顏色的深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。三聯(lián)或多聯(lián)干化學(xué)試帶，廣泛pH試紙。新鮮尿液。測定尿液pH如尿液pH＜3或pH＞8應(yīng)調(diào)至5～6。檢測將試帶浸入尿中立即取出，吸去多余尿液，1min內(nèi)與標(biāo)準(zhǔn)色板比色［1］。試帶應(yīng)干燥、避光保存，遠(yuǎn)離酸性和堿性物質(zhì)。渾濁尿不影響比色，但尿液顏色異常將影響結(jié)果的觀察。

2 尿蛋白定量試驗(yàn)

2.1 濁度法 也叫蛋白質(zhì)沉淀法，是目前測定尿蛋白含量最常用的方法，它是利用沉淀劑加人尿中使蛋白質(zhì)沉淀而形成一定的濁度，經(jīng)光度計(jì)或散射濁度計(jì)直接測定懸液中粒子的散射光。

2.2 染料結(jié)合法

2.2.1 直接法 通過染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時，其最大吸收率的漂移來檢測的。優(yōu)點(diǎn)是蛋白質(zhì)與染料結(jié)合快速，呈色穩(wěn)定、靈敏度高。缺點(diǎn)是陽離子和非離子型表面活性劑對呈色反應(yīng)有正干擾，陰離子型表面活性劑有負(fù)干擾。考馬斯亮藍(lán)染料易附著于玻璃容器表面，影響試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和精密度。2.2.2 沉淀法 是蛋白質(zhì)與結(jié)合的染料在TCA作用下共同沉淀下來，然后在稀堿溶液中復(fù)溶，再比色測定染料吸光度。常用染料:麗春紅S、苯胺藍(lán)［2］。優(yōu)點(diǎn)是白、球蛋白反應(yīng)較一致，靈敏度高。缺點(diǎn)是操作費(fèi)事，不能自動化，未結(jié)合染料不易除盡，酸可溶性蛋白不被酸沉淀，可使結(jié)果偏低，氨基糖苷類可使測定結(jié)果偏高。

2.3 化學(xué)呈色法 利用試劑中無機(jī)離子與蛋白肽鍵反應(yīng)而顯色，不管蛋白質(zhì)的種類如何，其肽鍵是一致的，反應(yīng)顏色與肽鍵量成正比。常用的反應(yīng)試劑:雙縮脲試劑、福林(Folin)試劑、氧化鐵一鞣酸試劑。在酸性沉淀劑中，鎢酸沉淀蛋白質(zhì)較完全，TCH不能沉淀某些低分子量糖蛋白。與其他方法比較，化學(xué)呈色法敏感性適中，干擾因素少，雙縮脲法被推薦為尿總蛋白質(zhì)測定的常規(guī)參考方法。

3 討論

尿蛋白測定易受一些因素的影響，可致假性結(jié)果，如尿酸鹽含量高時，尿呈酸性反應(yīng)，蛋白試紙法結(jié)果較實(shí)際情況低，磺基水楊酸法易呈假陽性;大量使用青霉素時，磺基水楊酸法易呈假陽性反應(yīng);使用造影劑時，磺基水楊酸法、加熱醋酸法均可出現(xiàn)假陽性反應(yīng);當(dāng)尿呈強(qiáng)堿性時，出現(xiàn)蛋白試紙法假陽性反應(yīng)，而磺基水楊酸法和加熱醋酸法呈假陰性反應(yīng)。當(dāng)尿蛋白僅為一些特殊蛋白質(zhì)時，蛋白試紙法和磺基水楊酸法均不敏感。因此，在進(jìn)行尿蛋白定性時，應(yīng)綜合各種因素，具體情況具體分析，選擇適宜的方法。盡管定性試驗(yàn)比較方便，但有時難以反映蛋白尿的實(shí)際含量，有條件時，最好進(jìn)行定量檢查。尿蛋白定量一般進(jìn)行24 h尿蛋白測定。24 h尿蛋白定量能準(zhǔn)確地反映每天排泄的尿蛋白量。急性腎小球腎炎時，尿蛋白定性為陽性，尿蛋白定量為1～3 g/24 h。蛋白尿雖不是急性腎小球腎炎的特異指標(biāo)，但尿蛋白含量對急性腎小球疾病的診斷、預(yù)后判斷具有重要意義。

［1］聞平，陳蕾，郭月芳，周春紅.晨尿尿蛋白/尿滲透壓比值測定的臨床應(yīng)用評價(jià).國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，09.

［2］王平平，王小兵，馬文.尿蛋白/尿肌酐與24小時尿蛋白定量相關(guān)性分析及臨床應(yīng)用.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，12.