調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在重癥肌無(wú)力發(fā)病中的研究進(jìn)展

王泳心，陸天宇，馬 健，崔有斌＊

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 胸外科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 病理科，吉林 長(zhǎng)春130021）

重癥肌無(wú)力由是乙酰膽堿受體的抗體介導(dǎo)的、具有T細(xì)胞依賴性的、同時(shí)存在補(bǔ)體參與的神經(jīng)－肌肉接頭處傳遞障礙的自身免疫性疾??；病變累及神經(jīng)－肌肉接頭處的突觸后膜上的乙酰膽堿受體［1］。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulartory T cell，Treg）能夠主動(dòng)抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化和增殖，因此可以控制T細(xì)胞對(duì)自身抗原以及異體抗原的過(guò)度反應(yīng)；它們?cè)谥匕Y肌無(wú)力的發(fā)病過(guò)程中起著非常重要的作用［2］?，F(xiàn)將Treg細(xì)胞的生物學(xué)特性、作用機(jī)制及在重癥肌無(wú)力發(fā)病中作用作一綜述。

1 Treg細(xì)胞的幾種常用的標(biāo)記分子

研究發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞可表達(dá)許多種表面分子，如 CD25、CD28／CTLA－4、GITR、Nrp－1（Neuropilin－1）、CD27、CD62L以及CD127等，然而目前仍未發(fā)現(xiàn)高度特異的標(biāo)記。CD25是IL－2受體的α鏈，能夠在靜止的和活化的nTreg細(xì)胞上持續(xù)、高水平地表達(dá)，是目前最為常用的nTreg細(xì)胞標(biāo)記分子［3］。CD25是T細(xì)胞活化早期的一個(gè)標(biāo)志，它不僅在nTreg細(xì)胞上表達(dá)，還可以在活化的CD4＋效應(yīng)性T細(xì)胞上表達(dá)［4］。Baecher－Allan［5］等研究發(fā)現(xiàn)人類的外周血CD4＋T細(xì)胞中只有CD25呈高表達(dá)（CD25hi）的才是具有免疫抑制作用，因此目前有關(guān)Treg細(xì)胞的研究大多以CD25高表達(dá)作為標(biāo)準(zhǔn)。但最近有研究［6］發(fā)現(xiàn)某些CD4＋T細(xì)胞中CD25呈中低表達(dá)的也是Treg細(xì)胞，同樣具有免疫調(diào)節(jié)的功能，因此采用CD25高表達(dá)作為標(biāo)記物可能會(huì)遺漏部分CD25呈中低表達(dá)的Treg細(xì)胞，而影響Treg實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。CD28／CTLA－4是屬于免疫球蛋白超家族的成員成員，幾乎在所有的CD4＋T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞表面都有表達(dá)，具有共同的B7－1／B7－2配體，是 T細(xì)胞激活／失活的重要信號(hào)分子［7］。CD28與 APCs上的 B7－1／B7－2相結(jié)合，傳遞信號(hào)共刺激、誘導(dǎo)nTreg細(xì)胞在胸腺中的發(fā)育。而當(dāng)nTreg細(xì)胞從胸腺移出到達(dá)外周淋巴組織后，CD28能夠通過(guò)IL－2誘導(dǎo)Bcl－2樣抗凋亡分子的產(chǎn)生從而促進(jìn)nTreg細(xì)胞的自我更新并維持其活性、保持其胞群的穩(wěn)定。CD27是由二硫鍵連接單體而組成的二聚體跨膜糖蛋白，是TNF受體超家族一員，表達(dá)于大多數(shù)的T細(xì)胞、部分B細(xì)胞、NK細(xì)胞和胸腺。研究發(fā)現(xiàn)CD27可持續(xù)表達(dá)于nTreg細(xì)胞的表面。將CD27與CD25聯(lián)合應(yīng)用作為標(biāo)記物，可以在有嚴(yán)重炎癥反應(yīng)的組織內(nèi)有效地將nTreg細(xì)胞與CD25＋的活化效應(yīng)性T細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)［8］。同時(shí)Ruprecht CR以及Liu WH等都認(rèn)為采用CD25聯(lián)合其它標(biāo)記分子如CD27，作為標(biāo)記更為可靠，可以防止單純以CD25標(biāo)記物可能遺漏部分CD25中低水平表達(dá)的nTreg細(xì)胞，同時(shí)也能防止混入部分CD25高表達(dá)的活化iTreg細(xì)胞，而影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性［9］。但 Seddiki NB 等［10］認(rèn)為，外周血液中有許多激活的CD25＋效應(yīng)性T細(xì)胞也會(huì)有CD27的持續(xù)高水平表達(dá)，這就限制了CD27作為一種Treg細(xì)胞標(biāo)記物在研究中的應(yīng)用。

2 Treg細(xì)胞的起源、發(fā)育和分化

nTreg是由胸腺的T細(xì)胞自然分化并發(fā)育成熟之后進(jìn)入外周淋巴組織的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，它們?cè)陬A(yù)防病理性自身免疫反應(yīng)方面起著重要作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，出生后3天進(jìn)行了胸腺切除的小鼠，會(huì)罹患自發(fā)的多器官自身免疫病，同時(shí)伴有外周淋巴細(xì)胞中CD25＋T細(xì)胞數(shù)量減少；然而，如果從正常小鼠過(guò)繼轉(zhuǎn)移nTreg細(xì)胞到實(shí)驗(yàn)組小鼠，則可阻止自身免疫病的發(fā)生［11］。該實(shí)驗(yàn)證實(shí)了nTreg的來(lái)源于胸腺的可能。nTreg細(xì)胞在胸腺內(nèi)的發(fā)育依賴于主要組織相容性復(fù)合體－Ⅱ／肽復(fù)合體或外周的自身抗原在胸腺內(nèi)的提呈，同時(shí)也作為CD4＋T細(xì)胞自然選擇的一部分，以陰性選擇方式存活下來(lái)。發(fā)育成熟的CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)移至外周，具有抑制其自身免疫應(yīng)答功能。

經(jīng)胸腺選擇后的nTreg細(xì)胞可以進(jìn)一步表達(dá)Foxp3，從而具備Treg細(xì)胞特性和功能。研究表明，CD28可能影響nTreg細(xì)胞在胸腺內(nèi)的發(fā)育和功能。若CD28缺失，外周血nTreg細(xì)胞的數(shù)量會(huì)減少，從而會(huì)引起嚴(yán)重自身免疫功能紊亂［12］。在nTreg細(xì)胞的成長(zhǎng)過(guò)程中，CD28可能在兩個(gè)不同的階段起到關(guān)鍵作用。一方面，未成熟的胸腺前體細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為nTreg細(xì)胞時(shí)，需要TCR的聯(lián)合刺激。另一方面，nTreg細(xì)胞脫離胸腺環(huán)境后，CD28分子的聯(lián)合刺激能夠促進(jìn)nTreg細(xì)胞的自我更新和存活，從而維持一個(gè)穩(wěn)定的nTreg細(xì)胞環(huán)境。

獲得性調(diào)節(jié)T細(xì)胞（iTreg），是在特定免疫環(huán)境中，受抗原刺激的天然成熟CD4＋T細(xì)胞增殖和分化來(lái)的CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞的另一個(gè)亞群，包括Th1、Th3以及人工誘導(dǎo)的CD4＋CD25＋T細(xì)胞等，在微生物感染和移植免疫中起重要作用。此種胸腺外的產(chǎn)生機(jī)制可能是機(jī)體對(duì)胸腺產(chǎn)生nTreg細(xì)胞能力逐漸下降及其擴(kuò)增能力有限的彌補(bǔ)［13］。目前研究認(rèn)為，成熟的外周CD4＋CD25－T細(xì)胞激活后可以產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)功能的CD4＋T細(xì)胞；并且調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和病理性T細(xì)胞大體上可以來(lái)自相同的成熟T細(xì)胞前體細(xì)胞。這種T細(xì)胞前體細(xì)胞是發(fā)展為調(diào)節(jié)性的T細(xì)胞還是病理性的T細(xì)胞，主要取決于依靠抗原的性質(zhì)和／或數(shù)量的不同。

3 Treg細(xì)胞在MG中的研究進(jìn)展

乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AchR－ab）介導(dǎo)和T細(xì)胞依賴性被認(rèn)為是MG的主要病因［14］。在淋巴細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中，機(jī)體為避免自身免疫病的發(fā)生，“外周耐受”機(jī)制起到了非常重要作用。在“外周耐受”機(jī)制中起非常重要作用的細(xì)胞便是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）。隨著研究的深入，Treg細(xì)胞在MG中的作用逐漸引起相關(guān)研究者的注意，并成為目前MG的發(fā)病機(jī)制研究的熱點(diǎn)。2005年Balandina A等［15］研究發(fā)現(xiàn) MG患者的胸腺中Treg細(xì)胞的數(shù)量雖然與健康對(duì)照之間無(wú)明顯差異，但其免疫抑制功能卻有明顯下降。他們對(duì)此進(jìn)行體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，他們將CD4＋CD25＋T細(xì)胞和CD4＋CD25－T細(xì)胞等比例混合，觀察兩組胸腺細(xì)胞對(duì)CD4＋CD25－T細(xì)胞的抑制率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MG患者的胸腺中CD4＋CD25＋T細(xì)胞不能抑制CD4＋CD25－T的增殖，而健康對(duì)照組中的抑制率可達(dá)80%。Luther C等［16］發(fā)現(xiàn)MG合并胸腺瘤組的胸腺中，CD4＋CD25＋細(xì)胞數(shù)量明顯下降，占CD4＋胸腺細(xì)胞的比例與正常對(duì)照組和MG不合并胸腺瘤組比較有差異的顯著。根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果分析Treg細(xì)胞的數(shù)量的改變可能和MG合并胸腺瘤有關(guān)。

同時(shí)許多研究者對(duì)MG病人外周血液中Treg細(xì)胞數(shù)量的變化也進(jìn)行了研究。Sun Y等［17］研究認(rèn)為：MG患者外周血Treg細(xì)胞的數(shù)量與患者病情的穩(wěn)定情況有關(guān)，病情穩(wěn)定的MG患者外周血中Treg細(xì)胞的數(shù)量較正常對(duì)照者明顯增高；而病情不穩(wěn)定患者與正常對(duì)照相比稍有下降。他們同時(shí)發(fā)現(xiàn)胸腺切除術(shù)能夠使外周血中Treg細(xì)胞的數(shù)量增加。鄒志強(qiáng)等的研究發(fā)現(xiàn)MG伴胸腺增生組的胸腺中CD25的表達(dá)與正常對(duì)照組相比顯著升高，并與MGFA分期呈正相關(guān)；MG伴胸腺增生組的胸腺中CD4＋CD25＋的細(xì)胞占CD4＋細(xì)胞的比例與對(duì)照胸腺相比明顯增高，而外周血中的CD4＋CD25＋T細(xì)胞比例則無(wú)顯著變化。Balandina等［18］通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MG組和正常對(duì)照組之間CD4＋CD25＋T細(xì)胞占CD4＋T細(xì)胞的比例無(wú)有顯著差異。但是夏強(qiáng)等［19］用間接免疫熒光雙標(biāo)記的方法對(duì)MG胸腺的Treg細(xì)胞進(jìn)行定位分析研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然MG組Treg細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差別；但Treg細(xì)胞占陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的比例（即占髓質(zhì)區(qū)所有細(xì)胞的比例）則明顯下降。分析可能與Balandina等和Luther等采用的是流式細(xì)胞技術(shù)，檢測(cè)的是CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞占CD4＋T細(xì)胞的比例，而夏強(qiáng)等研究的是Treg細(xì)胞占髓質(zhì)區(qū)所有細(xì)胞的比例。

5 展望

目前對(duì)于Treg細(xì)胞的研究進(jìn)入到一個(gè)新階段，成為目前MG研究的熱點(diǎn)。但有許多問(wèn)題目前還不清楚，比如引起患者體內(nèi)的Treg細(xì)胞數(shù)量和功能缺陷的原因目前尚不清楚，特別是誘導(dǎo)Foxp3基因表達(dá)的機(jī)制以及Treg細(xì)胞在體內(nèi)具體通過(guò)什么途徑引起MG的問(wèn)題等。同時(shí)對(duì)于Treg細(xì)胞數(shù)目異?；蚬δ芪蓙y與MG的治療和預(yù)后之間的關(guān)系，目前研究仍然很少。如能通過(guò)某種方法或途徑在體內(nèi)外有效調(diào)控Treg細(xì)胞的數(shù)量和功能，必將為MG的發(fā)病機(jī)制以及治療的研究具有重要的意義。

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