聚丙烯酰胺凝膠電泳法對導入后代重組個體的檢測

劉云霞

（錦州市農產品質量檢驗檢測中心，遼寧 錦州 121017）

組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術，應用于驗證和檢測試材的DNA導入情況，通過觀察導入后代與供體DNA的共同和差異譜帶，來篩選含供體特異DNA譜帶的導入后代。這項技術的研究是外源遺傳物質導入育種技術不可缺少的一部分。

1 試材

錦269麥、95109麥、340玉米。

2 方法

實驗采用無水乙酸鈉—冰乙酸系統(tǒng)進行電泳。

2.1 制樣

將試材種子浸泡2～4 h，按質量體積比1：2加入樣品提取液研磨，然后4000 r/min離心15 min，取上清液，100℃水浴3 min，置冰箱中備用。

2.2 制備膠液

2.2.1分離膠：18.6%Acr——Bis膠液3.0 mL；pH 3.0的 82%乙酸鹽緩沖溶液 9.0 mL；1%AP1.5 mL；0.5%VC-FeSO4溶液1.5 mL。

2.2.2濃縮膠：18.6%Acr——Bis膠液3.0 mL；pH 5.0的 82%乙酸鹽緩沖溶液 6.5 mL；10%AP 1.0 mL；TEMED 40.0 mL；水 5.5 mL。

2.3 點樣

用微量注射器每槽加入20 μL預冷樣品液，加入適量甲基綠溶液作為前沿指示劑，上加20 μL40%蔗糖溶液。

2.4 電泳

采用0.3%甘氨酸—乙酸緩沖液，20 mA電流下電泳3 h。

2.5 染色

將凝膠在 200 μL、10%三氯乙酸染色液和 10 μL、1%考馬斯亮蘭R250染色劑中染色3 h以上。

3 結果

將凝膠置清水中浸泡，背景漂白后觀察藍色譜帶。通過觀察譜帶，發(fā)現(xiàn)錦269麥譜帶中確有幾條特異性條帶出現(xiàn)，并且其位點及分布與340玉米的譜帶相同，證明錦269麥中確有340玉米基因導入。

綜上所述，組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳法是外源DNA導入技術的間接驗證方法。它應用于導入后代重組個體的檢測，具有直觀、清晰、準確的特點。